TERT过表达脑周细胞条件培养液及其在保护缺氧缺血神经元中的应用

本发明涉及细胞培养液及其应用，特别涉及一种tert过表达脑周细胞培养液及其在保护缺氧缺血神经元中的应用。

背景技术：

1、新生儿缺氧缺血性脑病(neonatal hypoxic–ischemic encephalopathy,hie)是由于脑血流灌注减少和/或低氧血症所导致的新生儿脑病，现有治疗中最根本的措施是维持机体内环境的稳定，维持各器官功能的正常运转，在此基础上，各种针对再灌注损伤的治疗，及脑细胞代谢激活剂，以期受损害的神经细胞代谢逐渐恢复，但仍常有新生儿死亡或中枢神经系统永久性损伤，表现为智力低下、癫痫、脑瘫或发育迟缓。研究表明，hie发生发展过程中神经元损伤程度决定了该病的进展和预后，通过外源性干预减少缺氧缺血神经元损伤及修复神经元是减轻hie的重要措施。

2、脑周细胞是嵌入在大脑毛细血管和小血管(从毛细血管前小动脉到毛细血管后小静脉)内皮细胞周围的基底膜中的壁细胞。它既可表达神经营养因子如神经生长因子(nerve growth factor，ngf)、碱性成纤维生长因子(fibroblast growth factor，fgf2)和脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophic factor,bdnf)等，也可分泌促炎因子如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,tnf-α)和神经毒性分子载脂蛋白e4(apolipoprotein e4，apoe4)等，共同构建脑损伤后的神经修复微环境。因而，怎样改善脑损伤后脑周细胞分泌谱，使其有利于神经修复，是亟待解决的重要问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种端粒酶逆转录酶过表达脑周细胞条件培养液及其在保护缺氧缺血神经元中的应用。

2、所述端粒酶逆转录酶，是端粒酶的催化亚基，其英文为telomerase reversetranscriptase，在说明书描述中将端粒酶逆转录酶简称为tert。

3、本发明所述tert过表达脑周细胞条件培养液，用含tert的慢病毒转染第二代脑周细胞，构建过表达tert的脑周细胞；再将过表达tert的脑周细胞加入无血清高糖dmem培养基培养，即获得tert过表达脑周细胞条件培养液。无血清高糖dmem培养基的加入量取决于培养皿的大小。

4、上述tert过表达脑周细胞条件培养液，所述过表达tert的脑周细胞加入无血清高糖dmem培养基的培养是在37℃恒温细胞培养箱内持续培养24h～48h。培养箱为5v.％co2、95v.％空气的co2培养箱。

5、本发明通过实验证明：tert过表达脑周细胞条件培养液通过增加促神经元存活的fgf2分泌、减少神经元毒性分子apoe4分泌，从而发挥对缺氧缺血神经元的保护作用，减少了缺氧缺血诱导的神经元凋亡，并促进其存活。因此，可将tert过表达脑周细胞条件培养液应用于保护缺氧缺血神经元。

6、本发明具有以下有益结果：

7、1、本发明成功获得了tert过表达脑周细胞条件培养液。

8、2、本发明所述tert过表达脑周细胞条件培养液为缺氧缺血神经元的保护提供了一种新的技术方案。

技术特征：

1.一种tert过表达脑周细胞条件培养液，其特征在于用含tert的慢病毒转染体外培养的第二代脑周细胞，构建过表达tert的脑周细胞；再将过表达tert的脑周细胞加入无血清高糖dmem培养基培养，收集获得tert过表达脑周细胞条件培养液。

2.根据权利要求1所述tert过表达脑周细胞条件培养液，其特征在于过表达tert的脑周细胞加入无血清高糖dmem培养基的培养是在37℃恒温细胞培养箱内持续培养24h～48h。

3.权利要求1或2所述tert过表达脑周细胞条件培养液在保护缺氧缺血神经元中的应用。

技术总结
本发明公开了TERT过表达脑周细胞条件培养液及其在保护缺氧缺血神经元中的应用，本发明所述TERT过表达脑周细胞条件培养液，用含TERT的慢病毒转染第二代脑周细胞，构建过表达TERT的脑周细胞；再将过表达TERT的脑周细胞加入无血清高糖DMEM培养基培养，即获得TERT过表达脑周细胞条件培养液。本发明通过实验证明：TERT过表达脑周细胞条件培养液通过增加促神经元存活的FGF2分泌、减少神经元毒性分子APOE4分泌，从而发挥对缺氧缺血神经元的保护作用，减少了缺氧缺血诱导的神经元凋亡，并促进其存活。因此，可将TERT过表达脑周细胞条件培养液应用于保护缺氧缺血神经元。

技术研发人员：屈艺,母得志,刘仕茜,余露婷,黄凌依,应俊杰,李世平,刘倩,苏小娟,赵凤艳,周睿曦,阮铁超
受保护的技术使用者：四川大学华西第二医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13