一种利用iPSC细胞和小分子IOX1构建孤独症脑类器官的方法

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种利用ipsc细胞(induced pluripotentstem cells，诱导多能干细胞)和小分子iox1构建孤独症脑类器官的方法。

背景技术：

1、孤独症是一种神经系统疾病，在全世界儿童的发病率逐年增高。孤独症的传统研究方案需要构建孤独症动物模型，时间长、花费高、对实验场所的要求高。近年来，随着类器官技术的兴起，在培养皿中构建孤独症脑类器官将为疾病发病机制研究和药物筛选提供极大的便利。而现有技术中，类器官的培养手段仍然较为匮乏，亟需提供更多的孤独症脑类器官的构建方法。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提出了一种利用ipsc细胞和小分子iox1构建孤独症脑类器官的方法。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、一种构建孤独症脑类器官的方法，包括以下步骤：

4、多能干细胞在培养基中培养至70-80％汇合度，经离心处理后弃上清，培养至多能干细胞呈细胞球；

5、在呈细胞球的多能干细胞加入基质胶培养；

6、培养基中添加iox1培养；

7、撤去iox1继续培养，获得所述孤独症脑类器官。

8、另一方面，本发明还提出了iox1在基于多能干细胞培养孤独症脑类器官中的应用。

9、本发明的有益效果：

10、本发明提出了一种新的孤独症脑类器官的构建方法，即通过iox1来构建孤独症脑类器官。

11、本发明通过科研发现iox1可以明显增加脑类器官中神经元数量(p<0.05)、减少少突胶质细胞数量(p<0.05)，从而改变神经元与少突胶质细胞的比例，从而模拟孤独症。通过反复试验，确定了在脑类器官培养的特定时间段添加iox1可以构建出孤独症脑类器官。

技术特征：

1.一种构建孤独症脑类器官的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建孤独症脑类器官的方法，其特征在于，在所述的人诱导多能干细胞在培养基中培养至70-80％汇合度之后，加入pbs进行清洗，并吸弃溶液，加入accutase消化。

3.根据权利要求1所述的构建孤独症脑类器官的方法，其特征在于，进行所述的离心处理之前，加入mtesr1培养基，吹打使细胞脱落并吹打，直至溶液变得混浊且成为单细胞；再加入mtesr1培养基，然后进行所述的离心处理。

4.根据权利要求1所述的构建孤独症脑类器官的方法，其特征在于，配置含有dmem-f12、kosr、血清、glutamax、mem-neaa、巯基乙醇与青链霉素的溶液a；在弃上清之后，加入所述溶液a，并添加y27632，上下颠倒混匀从而制备细胞悬液，37度环境下培养；

5.根据权利要求1所述的构建孤独症脑类器官的方法，其特征在于，

6.iox1在基于多能干细胞培养孤独症脑类器官中的应用。

技术总结
本发明公开了一种利用iPSC细胞和小分子IOX1构建孤独症脑类器官的方法，属于生物医学领域。该方法利用人诱导多能干细胞进行大脑类器官的诱导，并在诱导的特定时间段添加IOX1，来抑制组蛋白赖氨酸去甲基化酶的活性，从而得到一种全新的孤独症大脑类器官模型。本发明全新发现IOX1可显著改变大脑类器官的神经元分化，从而模拟人类孤独症大脑发育过程。该方法是发明人所创造，操作简单、流程可重复、均一性好。

技术研发人员：林昊,孙博,叶正
受保护的技术使用者：东南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13