6,6＇-二异戊烯基靛玉红及其制备方法与应用

本发明属于药物化学领域，具体涉及6,6′-二异戊烯基靛玉红及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

1、靛玉红是一种双吲哚类生物碱，是靛蓝的同分异构体，可以从中药青黛中分离得到。靛玉红在临床上主要用于治疗慢性粒细胞白血病，具有临床疗效可靠、副作用小、对骨髓无明显抑制作用等特点。但是传统方法制备得到的青黛中主要成分为靛蓝，靛玉红在青黛中含量较低，且靛玉红用于癌症治疗具有水溶性低、药代动力学性能差，大大限制了其临床应用。因此，众多研究人员不断探索从其他途径获取靛玉红或开发具有更好药代动力学特性、改进药理特征的新型靛玉红衍生物，快速获取靛玉红以及获取更优药理作用靛玉红衍生物的方法很有必要。

2、放线菌是天然产物发现的重要宝库，至今已报道的抗生素中，约70％为放线菌产生。糖多孢菌属于放线菌目、伪诺卡氏菌属，具有生产抗生素和药物先导化合物的潜力，例如从红色糖多孢菌中分离得到广谱抗生素红霉素和从刺糖多孢菌中分离得到生物农药多杀菌素，体现了糖多孢菌属生产有效生物活性化合物的能力，也对其他糖多孢菌中次生代谢物的挖掘提供了参考。

3、经次生代谢物预测分析，我们发现山东糖多孢菌中存在与靛玉红生成片段——吲哚代谢有关的基因簇，对靛玉红或衍生物的生成或起到促进作用。基于此，在山东糖多孢菌中挖掘靛玉红或靛玉红衍生物等次生代谢物具有巨大潜力。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供6,6′-二异戊烯基靛玉红。

2、本发明的第二个目的是提供6,6′-二异戊烯基靛玉红的制备方法。

3、本发明的第三个目的是提供6,6′-二异戊烯基靛玉红在制备抗肿瘤药物中的应用。

4、本发明的技术方案概述如下：

5、6,6′-二异戊烯基靛玉红，如式i所示结构：

6、

7、上述6,6′-二异戊烯基靛玉红的制备方法，包括以下步骤：

8、(1)将在固体培养基上培养的山东糖多孢菌saccharopolyspora shandongensiscgmcc4.3530接入种子培养基中，摇瓶培养，获得种子培养物，将种子培养物接入发酵培养基中培养，收集发酵液；

9、(2)将步骤(1)获得的发酵液离心得到的沉淀，经溶剂a提取获得提取液，提取液经蒸发干燥，用水和溶剂b萃取，取溶剂b层蒸发干燥得到粗提物，用200-300目硅胶装柱，按质量比为1:1.5-3的比例将粗提物与100-200目硅胶拌样，干法上样，以溶剂c作为流动相对粗提物进行硅胶柱层析分离，收集紫色的馏分，浓缩干燥用溶剂d复溶，加入凝胶柱，以溶剂d作为流动相分离，收集紫色的馏分，干燥，得到纯品6,6′-二异戊烯基靛玉红。

10、步骤(1)优选为：将在isp4固体培养基上培养的山东糖多孢菌saccharopolysporashandongensis cgmcc4.3530接入种子培养基中，28-30℃、180-240rpm摇瓶培养36-70h，获得种子培养物，将种子培养物接入发酵培养基中在28-30℃、180-240rpm摇瓶培养7-10天，收集发酵液。

11、发酵培养基优选为：可溶性淀粉18-22g/l、葡萄糖8-12g/l、蛋白胨3-7g/l、酵母提取物3-7g/l、nacl 3-7g/l、k2hpo4 0.3-0.7g/l、mgso4·7h2o 0.3-0.7g/l，caco3 1-3g/l、hp20大孔吸附树脂10-40g/l，加无菌水至1l，调节ph值到7.0-7.4。

12、溶剂a优选：甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和石油醚中至少一种。

13、溶剂b优选：乙酸乙酯或石油醚。

14、溶剂c优选：石油醚和乙酸乙酯的混合液，或石油醚和二氯甲烷的混合液。

15、溶剂d优选：甲醇或甲醇与二氯甲烷的混合液。

16、上述6,6′-二异戊烯基靛玉红i在制备抗肿瘤药物中的应用。

17、本发明的优点：

18、本发明的6,6′-二异戊烯基靛玉红是利用微生物发酵所得，制备条件温和、操作简便。实验证明6,6′-二异戊烯基靛玉红具有优异的抗肿瘤活性，其中对白血病细胞株k562、乳腺癌细胞mda-mb-231、非小细胞肺癌a549、口腔表皮样癌细胞kb具有较好的体外抑制增殖作用，ic50值分别达到6.01±0.15μμ、8.53±0.37μμ、11.73±0.42μμ、8.64±0.32μμ。

技术特征：

1.6,6′-二异戊烯基靛玉红，其特征是如式(i)所示结构：

2.权利要求1的6,6′-二异戊烯基靛玉红的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述步骤(1)为：将在isp4固体培养基上培养的山东糖多孢菌saccharopolyspora shandongensis cgmcc4.3530接入种子培养基中，28-30℃、180-240rpm摇瓶培养36-70h，获得种子培养物，将种子培养物接入发酵培养基中在28-30℃、180-240rpm摇瓶培养7-10天，收集发酵液。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征是所述发酵培养基为：可溶性淀粉18-22g/l、葡萄糖8-12g/l、蛋白胨3-7g/l、酵母提取物3-7g/l、nacl 3-7g/l、k2hpo4 0.3-0.7g/l、mgso4·7h2o 0.3-0.7g/l，caco3 1-3g/l、hp20大孔吸附树脂10-40g/l，加无菌水至1l，调节ph值到7.0-7.4。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述溶剂a为甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和石油醚中至少一种。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述溶剂b为乙酸乙酯或石油醚。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述溶剂c为石油醚和乙酸乙酯的混合液，或石油醚和二氯甲烷的混合液。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述溶剂d为甲醇或甲醇与二氯甲烷的混合液。

9.权利要求1的6,6′-二异戊烯基靛玉红在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术总结
本发明公开了6,6′‑二异戊烯基靛玉红及其制备方法与应用，6,6′‑二异戊烯基靛玉红如式I所示结构：本发明的6,6′‑二异戊烯基靛玉红是利用微生物发酵所得，具有制备条件温和、操作简便。实验证明6,6′‑二异戊烯基靛玉红具有优异的抗肿瘤活性，与靛玉红相比，抗肿瘤效果更好。

技术研发人员：颜晓晖,张成玉,李鹏艳,刘宏亮
受保护的技术使用者：天津中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13