一种指导氟达拉滨抗肿瘤应用的试剂盒

本发明属于医药，涉及sdh基因在指导氟达拉滨抗肿瘤应用中作为生物标记物，尤其涉及一种指导氟达拉滨抗肿瘤应用的试剂盒。

背景技术：

1、琥珀酸脱氢酶(sdh)是三羧酸循环中的关键代谢酶，主要发挥将琥珀酸氧化为富马酸的功能，并参与到线粒体呼吸链的电子传递中。sdh是由sdha、sdhb、sdhc及sdhd四个亚基组成的复合物。作为经典的肿瘤抑制物，sdh的任一亚基发生失活型突变后均会导致自身表达量降低及复合物功能的丧失，进一步造成琥珀酸在细胞中的异常累积，激活hif 1α信号及导致dna过度甲基化，最终促进肿瘤的恶性表型及肿瘤患者的不良预后。sdh缺失被发现出现在胃肠道间质癌、嗜铑细胞瘤及副神经节瘤(pcpg)、肾细胞癌、结直肠癌等多种肿瘤中，导致肿瘤转移率显著升高及患者的生存率降低。研究表明，71.9％的pcpg转移患者中含有sdh失活型突变,sdh突变的pcpg患者五年生存率仅约36％。此外，在胃肠道间质癌中，sdh缺失还导致对胃肠道间质癌一线用药伊马替尼的敏感性降低。目前临床上尚无靶向sdh缺失肿瘤的药物，sdh缺失肿瘤患者的生存及预后不容乐观。因此，仍需开发新的靶向sdh缺失肿瘤的有效药物。

2、氟达拉滨(fludarabine)是一类抗肿瘤药物，临床适应症主要包括慢性淋巴细胞性白血病、急性髓系白血病和非霍奇金淋巴瘤。氟达拉滨的主要抗肿瘤机理是抑制dna合成，此外，氟达拉滨还被报道可以通过抑制stat1信号的激活来发挥抗肿瘤作用。但是目前临床上并无生物标志物来指导氟达拉滨的抗肿瘤应用。sdh基因能否作为氟达拉滨临床用药的生物标记物，氟达拉滨能否抑制sdh缺失肿瘤的恶性表型，从而改善sdh缺失肿瘤患者的生存及预后尚未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种指导氟达拉滨抗肿瘤应用的试剂盒，所述试剂盒包括作为生物标记物的sdha基因及编码的sdha蛋白，所述sdha基因的核苷酸序列如seq id no:1所示，所述sdha蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。

2、本发明所述指导是通过检测sdh蛋白水平的抗体，所述sdh蛋白选自sdha、sdhb、sdhc和sdhd中的一种或多种，优选为sdha，抗原序列如seq id no:2所示。

3、本发明所述sdh基因可在氟达拉滨的抗肿瘤应用中作为生物标记物，可精准指导氟达拉滨(fludarabine)药物在抗sdh突变型肿瘤治疗中应用，所述化合物氟达拉滨分子式为c10h12fn5o4，结构如式(1)所示：

4、

5、本发明试剂盒涉及的检测sdha基因mrna水平的引物序列如seq id no:3、seq idno:4、seq id no:5、seq id no:6所示。

6、本发明显示，通过慢病毒感染的方法将急性髓系白血病(aml)细胞内的sdha敲低，构建sdha正常表达模型和sdha缺失模型。相较于sdha正常表达的细胞，化合物氟达拉滨对sdha敲低的细胞有更加显著的抑制增殖及克隆形成能力的作用。此外，氟达拉滨对sdha敲低的细胞有更加显著的诱导凋亡的作用。

7、本发明提供了sdh基因作为氟达拉滨抗肿瘤应用中的生物标志物，指导氟达拉滨作为治疗sdh缺失肿瘤的全新干预手段，拓展了氟达拉滨在临床疾病治疗中的应用范围，同时为改善sdh缺失肿瘤患者的生存和预后提供了可能性。

技术特征：

1.一种指导氟达拉滨抗肿瘤应用的试剂盒，其特征在于，包括作为生物标记物的sdha基因及编码的sdha蛋白，sdha基因核苷酸序列如seq id no:1所示，所述sdha基因编码的蛋白序列如seq id no:2所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述指导是通过检测sdh蛋白水平的抗体，提高氟达拉滨抑制sdh缺失肿瘤的生长、克隆、转移，或促进sdh缺失肿瘤的凋亡。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测sdha基因mrna水平的引物序列如seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6所示。

技术总结
本发明提供一种指导氟达拉滨抗肿瘤应用的试剂盒，以SDH基因作为氟达拉滨抗肿瘤应用中的生物标志物，指导氟达拉滨治疗SDH缺失肿瘤的新用途。SDH缺失会导致肿瘤的恶性程度显著升高，而相较于SDH正常表达的肿瘤，化合物氟达拉滨对SDH缺失肿瘤细胞的增殖能力和克隆形成能力均产生更加显著的抑制作用，并且能更加显著地诱导SDH缺失肿瘤细胞的凋亡。本发明为SDH缺失肿瘤的临床治疗提供全新的干预策略，为进一步改善SDH缺失肿瘤患者的生存及预后提供了可能性，同时也拓展了氟达拉滨在临床疾病治疗中的应用范围。

技术研发人员：应美丹,何俏军,杨波,陈一凡,徐晓军,曹戟,应雯雯
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12