一种抗LILRB4单克隆抗体的制作方法

本发明涉及生物医药，特别涉及一种抗lilrb4单克隆抗体。

背景技术：

1、急性髓系白血病(aml)是成人常见的一种白血病，aml在老年中更常见，在美国60岁以上每年新增aml约14500例，其中1/3超过75岁，在欧洲年新增约18000例，随着世界人口逐步出现老龄化，老年aml的发病率呈逐年上升趋势，因此老年aml的基本疾病特点和治疗也越来越受到关注。高龄是aml预后不佳的最常见因素之一，40岁以上每跨度10岁生存期逐次递减，老年aml2年以上存活率仅10％。目前干细胞移植治疗可以有效降低化疗后的aml的复发率，但是干细胞移植治疗具有很高的死亡率，因此在aml缓解期进行造血干细胞移植的适应证仍有争议。

2、白细胞免疫球蛋白样受体b4(lilrb4)作为lilrb家族成员，结构上包含两个细胞外免疫球蛋白样结构域及三个细胞内itim结构域。在生理条件下，lilrb4通过在t细胞和浆细胞等多种免疫细胞上的表达，在免疫系统的功能中起着非常重要的作用。在病理条件下，lilrb4通过多种信号通路影响各种疾病的进程，如肿瘤和白血病的转化和浸润。

3、目前，以明生物，恩格姆生物制药公司和华夏英泰(北京)生物技术有限公司均在研发靶向lilrb4的单克隆抗体药物，目前均处在临床i期阶段。临床前研究显示抗lilrb4的单克隆抗体能够激活t细胞杀伤，抑制血液癌细胞的浸润。因此，抗lilrb4单克隆抗体作为首款有望用于aml的t细胞激活剂，将为全球aml和慢性粒单核细胞白血病(cmml)病患带来创新治疗方案，具有非常大的市场潜力。

技术实现思路

1、本发明通过对免疫文库的筛选，提供了一种可以与lilrb4特异性结合且具有较高生物学活性的抗lilrb4单克隆抗体。

2、本发明具体技术方案如下：

3、本发明提供了一种抗lilrb4单克隆抗体，包括3个分别用hcdr1、hcdr2和hcdr3表示的重链互补决定区和3个分别用lcdr1、lcdr2和lcdr3表示的轻链互补决定区，所述重链互补决定区hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述重链互补决定区hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述重链互补决定区hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示，所述轻链互补决定区lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述轻链互补决定区lcdr2的氨基酸序列如seq id no:5所示，所述轻链互补决定区lcdr3的氨基酸序列如seq idno:6所示。

4、进一步的，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如seqid no:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

5、进一步的，还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:13所示的鼠源ck型的恒定区；所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:12所示。

6、进一步的，所述抗lilrb4单克隆抗体为fab、f(ab)2、fv或scfv中的一种或几种组合。

7、本发明还提供了一种蛋白，所述蛋白包含所述的抗lilrb4单克隆抗体。

8、本发明还提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码所述的抗lilrb4单克隆抗体。

9、本发明进一步提供了一种重组dna表达载体，所述重组dna表达载体包含所述的核苷酸分子。

10、本发明进一步提供了一种转染所述的重组dna表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；

11、优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为hek293细胞、cho细胞或ns0细胞。

12、本发明还提供了一种药物，所述药物包含所述的抗lilrb4单克隆抗体。

13、本发明还提供了所述的抗lilrb4单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；

14、所述癌症包括急性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤、乳腺癌、肺癌或前列腺癌中的一种或多种。

15、本发明的有益效果如下：本发明提供的抗lilrb4单克隆抗体与lilrb4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制lilrb4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游nf-κb信号通路的激活和arg1的释放，促进t细胞增殖的抑制，及抑制组织浸润。此外，本发明筛选得到的抗lilrb4单克隆抗体能够用于治疗癌症，癌症包括但不限于急性髓系白血病(aml)、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、多发性骨髓瘤(mm)、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤(bpdcn)、乳腺癌、肺癌或前列腺癌。

技术特征：

1.一种抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，包括3个分别用hcdr1、hcdr2和hcdr3表示的重链互补决定区和3个分别用lcdr1、lcdr2和lcdr3表示的轻链互补决定区，所述重链互补决定区hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述重链互补决定区hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述重链互补决定区hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示，所述轻链互补决定区lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述轻链互补决定区lcdr2的氨基酸序列如seq id no:5所示，所述轻链互补决定区lcdr3的氨基酸序列如seq idno:6所示。

2.如权利要求1所述的抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

3.如权利要求2所述的抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:13所示的鼠源ck型的恒定区；所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq idno:12所示。

4.如权利要求1所述的抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，所述抗lilrb4单克隆抗体为fab、f(ab)2、fv或scfv中的一种或几种组合。

5.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白包含权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体。

6.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体。

7.一种重组dna表达载体，其特征在于，所述重组dna表达载体包含权利要求6所述的核苷酸分子。

8.一种转染权利要求7所述的重组dna表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；

9.一种药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体。

10.权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；

技术总结
本发明涉及生物医药领域，具体提供了一种抗LILRB4单克隆抗体，HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2和SEQ IDNo:3所示，LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:4、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示，本发明提供的抗LILRB4单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游NF‑κB信号通路的激活和ARG1的释放，促进T细胞增殖，及抑制组织浸润，有效用于治疗癌症。

技术研发人员：白义
受保护的技术使用者：北京东方百泰生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11