一株贝莱斯芽孢杆菌及其在葡萄灰霉病和葡萄保鲜中的应用

本发明属于微生物，具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌及其在葡萄灰霉病和葡萄保鲜中的应用。

背景技术：

1、葡萄(vitis vinifera l.)为我国主要经济作物之一，现有品种700多种，种植面积超过7.0×105hm2，其鲜食及酿酒生产已成为带动我国农业与农村经济发展的重要产业之一。但与此同时，葡萄病害的发生逐年上升，再加上葡萄自身不耐贮藏的特性，已经成为制约葡萄产量及品质的核心因素。其中，葡萄灰霉病更是葡萄生产中最常见、危害也最严重的病害之一。

2、葡萄灰霉病的病原为灰葡萄孢(botrytis cinerea)，其能够侵染葡萄花序、叶片及幼果，也能危及成熟果实，从而危害葡萄从种植到果实储藏的全产业链，造成重大经济损失。在葡萄种植阶段，不同结构类型的化学农药一直充当葡萄灰霉病防治的主力军，其中，具有代表性的化学农药包括早期广泛应用的多菌灵与异菌脲，以及近年推广使用的啶酰菌胺与嘧菌酯。尽管上述化学农药能够较好防控葡萄灰霉病，但是由于其作用机制相对单一且葡萄灰霉病菌遗传变异性强，导致田间抗性菌株不断出现，进而造成化学农药过量使用与农残超标的恶性循环。而在葡萄储藏阶段，由于其对农残的要求更为严苛，导致葡萄灰霉病防控与化学农药使用之间的矛盾更加突出。

3、与化学杀菌剂相比，从微生物中寻找防治植物病害的潜力菌株已经成为未来绿色农药发展的重要方向之一。截止目前，芽孢杆菌、链霉菌等细菌以及木霉菌、青霉菌等真菌中的部分菌株已经成功开发为商品化杀菌剂。微生物菌剂具有降解性好、安全性高、不易产生抗药性等优点，对发展环境友好型的生态农业具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明聚焦葡萄生产及贮藏过程的若干“卡脖子”问题：(1)多耐药葡萄灰霉病频发导致的化学杀菌剂防治困难且农残风险加大的问题；(2)葡萄不耐贮藏特性与多耐药葡萄灰霉病侵染双重叠加，造成葡萄贮藏保鲜困难的问题。

2、基于上述问题，本发明提出如下技术方案：

3、本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌nh-13-5，该菌株从山东黄河三角洲国家级自然保护区采集的碱蓬根际土壤中分离获得，并于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no.m 20221278。

4、上述贝莱斯芽孢杆菌被证明具有植物病害防治效果，尤其对于多耐药葡萄灰霉病及其引起的植物性病害，具有显著的预防和治疗效果。为此，本发明提供了上述贝莱斯芽孢杆菌在预防和/或治疗多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害中的应用；其中，在该应用中，防治目的可以是诊疗性，也可以是非诊疗性。具体地，本发明提供了上述贝莱斯芽孢杆菌在制备预防和/或治疗多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害的微生物制剂中的应用。

5、本发明进一步提供了上述贝莱斯芽孢杆菌在食品保鲜中的应用。所述食品包括但不限于水果、蔬菜以及粮食等食品；进一步优选为葡萄。

6、上述贝莱斯芽孢杆菌被证明具有较好的化学杀菌剂耐受性，基于此，本发明提供了上述贝莱斯芽孢杆菌在化学杀菌剂施用环境中的应用；所述应用包括但不限于如下情形：(1)在施用化学杀菌剂时，通过施用上述贝莱斯芽孢杆菌，以改善葡萄种植土壤的微环境，防止因化学杀菌剂过量施用造成的菌群失调及植物病原菌耐药性增强等问题；(2)与化学杀菌剂共同用于上述多耐药葡萄灰霉病菌的防治，即上述贝莱斯芽孢杆菌在与化学杀菌剂联合抑制多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害中的应用。本发明进一步提供了上述贝莱斯芽孢杆菌在制备与化学杀菌剂联合抑制多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害的杀菌剂中的应用。

7、上述化学杀菌剂选自啶酰菌胺及嘧菌酯中的一种或几种。

8、本发明提供了一种多耐药葡萄灰霉病菌联合杀菌剂，包括化学杀菌剂和上述贝莱斯芽孢杆菌；所述化学杀菌剂选自啶酰菌胺及嘧菌酯中的一种或几种。

9、上述贝莱斯芽孢杆菌被证明具有较强的ph及uv耐受性，基于此，本发明提供了上述贝莱斯芽孢杆菌在与uv联合抑制多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害中的应用。

10、本发明提供了一种微生物制剂，包含上述贝莱斯芽孢杆菌。该微生物制剂可被用于防治多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害。

11、上述微生物制剂包括但不限于固态制剂或液态制剂，例如粉剂或悬浮剂等。如果是悬浮剂，所述贝莱斯芽孢杆菌的菌含量≥108cfu/ml。

12、本发明提供了上述贝莱斯芽孢杆菌的发酵培养物。

13、上述发酵培养物的制备方法，步骤如下：

14、将上述贝莱斯芽孢杆菌经lb培养基摇床发酵2～3d，获得发酵培养物；所述lb培养基选自如下成分组成：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％ nacl，蒸馏水，ph调至7.0。

15、上述发酵培养物中，所述贝莱斯芽孢杆菌的菌含量≥108cfu/ml。

16、本发明的有益效果为：

17、本发明的贝莱斯芽孢杆菌对ph以及uv具有较强的耐受性，对多耐药葡萄灰霉病菌具有防治效果，并能够实现食品的保鲜效果。因此，可将所述贝莱斯芽孢杆菌制备成微生物制剂，应用于病菌防治、食品保鲜等领域，应用前景广阔。同时，本发明的贝莱斯芽孢杆菌对化学杀菌剂还具有较强的耐受性，因此，可将其与化学杀菌剂共同用于多耐药葡萄灰霉病菌的防治，从而降低农药施用量。

技术特征：

1.一种贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述菌株于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no.m 20221278。

2.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌在预防和/或治疗多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害中的应用。

3.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌在食品保鲜中的应用。

4.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌在化学杀菌剂施用环境中的应用。

5.一种多耐药葡萄灰霉病菌联合杀菌剂，其特征在于，包括化学杀菌剂和权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌。

6.根据权利要求5所述的联合杀菌剂，其特征在于，所述化学杀菌剂选自啶酰菌胺及嘧菌酯中的一种或几种。

7.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌在与uv联合抑制多耐药葡萄灰霉病菌和/或其引起的植物性病害中的应用。

8.一种微生物制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌。

9.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌的发酵培养物。

10.权利要求9所述发酵培养物的制备方法，其特征在于，步骤如下：将权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌经lb培养基摇床发酵2～3d，获得发酵培养物；所述lb培养基选自如下成分组成：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％nacl，蒸馏水，ph调至7.0。

技术总结
本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌及其在葡萄灰霉病和葡萄保鲜中的应用，属于微生物技术领域。本发明的贝莱斯芽孢杆菌，于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M 20221278。本发明的贝莱斯芽孢杆菌对pH以及UV具有较强的耐受性，对多耐药葡萄灰霉病菌具有防治效果，并能够实现食品的保鲜效果。因此，可将所述贝莱斯芽孢杆菌制备成微生物制剂，应用于病菌防治、食品保鲜等领域，应用前景广阔。同时，本发明的贝莱斯芽孢杆菌对化学杀菌剂还具有较强的耐受性，因此，可将其与化学杀菌剂共同用于多耐药葡萄灰霉病菌的防治，从而降低农药施用量。

技术研发人员：杜丰玉,肖琳,王进田,张诚玮
受保护的技术使用者：青岛农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12