一种鸡蛋白过敏原F1融合蛋白及其应用的制作方法

本发明属于体外诊断，具体涉及一种鸡蛋白过敏原f1融合蛋白及其应用。

背景技术：

1、鸡蛋营养丰富，同时鸡蛋是导致儿童过敏的主要过敏食物之一。全球数据表明，鸡蛋过敏在5岁以下儿童中的发生率约为2％，一些先天遗传缺陷的成人可能也对鸡蛋过敏。鸡蛋过敏引发的症状包括呕吐、腹痛、腹泻和荨麻疹等。目前，鸡蛋过敏没有一劳永逸的治愈方法，严格避免食用含鸡蛋食品是鸡蛋过敏患者的最佳选择。然而，鸡蛋由于其高营养和良好加工特性而被广泛应用于食品工业，给鸡蛋过敏患者的膳食回避带来巨大挑战。

2、对鸡蛋过敏性疾病进行早期诊断，以准确地诊断并识别引起疾病的过敏原，并确定潜在的过敏触发因素。这对于预防接触或暴露于这些过敏原及特异性免疫治疗具有重要作用。

3、现有的鸡蛋白过敏原f1提取物是鸡蛋中进行过敏原的提取，由于来源及个体的差异，天然提取的鸡蛋白过敏原f1在组分和含量方面存在较大差异(如图1所示)，使得开发的鸡蛋白f1化学发光检测试剂盒的的二是批间差较大，量又少，很难规模化、产业化制备。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种对鸡蛋过敏检测的结果更加准确、可靠的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白。

2、为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、一种鸡蛋白过敏原f1融合蛋白，所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、一种鸡蛋白过敏原f1融合基因，所述的鸡蛋白过敏原f1融合基因为编码权利要求1所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的基因。

5、根据一些具体且优选地实施方式，所述的鸡蛋白过敏原f1融合基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

6、一种含有上述鸡蛋白过敏原f1融合基因的重组质粒。

7、根据一些实施方式，所述的重组质粒采用的表达载体为pet-21a(+)。

8、上述鸡蛋白过敏原f1融合蛋白在制备免疫学诊断试剂、食物过敏原诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。

9、一种鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的制备方法，将上述重组质粒在大肠杆菌中表达得到所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白。

10、一种鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的制备方法，其包括如下步骤：

11、(1)将人工合成的上述鸡蛋白过敏原f1融合基因与经过限制性内切酶ecor i和xho i双酶切的载体pet-21a(+)进行连接得到重组质粒；

12、(2)将步骤(1)的重组质粒在大肠杆菌中表达获得所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白。

13、优选地，所述的制备方法还包括对所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白进行镍柱纯化的步骤。

14、采用本发明所述方法只需要一次表达就能制备得到四种组分过敏原的融合蛋白，能防止部分过敏原含量较多或缺失造成的结果不准确，可提高产品检测的准确性。

15、一种鸡蛋白f1化学发光检测试剂盒，其包括含有r1试剂，所述的r1试剂为含有生物素化鸡蛋白过敏原f1融合蛋白和bsa的tris缓冲液。

16、根据一些实施方式，所述的试剂盒还包括r2试剂、m试剂和校准品，所述的r2试剂为含有ap标记的抗人ige抗体和bsa的mes缓冲液，所述的m试剂为含有磁微粒链霉亲和素bsa的pbs缓冲液，所述的校准品为含有ige抗体的tris缓冲液。

17、采用本发明的过敏原融合蛋白制备检测试剂盒，能够实现可稳定规模化生产，同时可大大降低鸡蛋白f1化学发光检测试剂盒的批间差较大的问题。

18、本发明与现有技术相比具有如下优势：

19、本发明的融合蛋白融合了卵类黏蛋白gal d1、卵白蛋白gal d2、卵转铁蛋白gald3及溶菌酶gal d4过敏原融合蛋白，解决了现有鸡蛋白过敏原f1批间差大的问题以及部分过敏原含量较多或缺失造成的检测结果不准确的问题，本发明保证了批间一致性，控制了产品质量，检测结果更加准确、可靠。

技术特征：

1.一种鸡蛋白过敏原f1融合蛋白，其特征在于，所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种鸡蛋白过敏原f1融合基因，其特征在于，所述的鸡蛋白过敏原f1融合基因为编码权利要求1所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的基因。

3.根据权利要求2所述的鸡蛋白过敏原f1融合基因，其特征在于，所述的鸡蛋白过敏原f1融合基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

4.一种含有如权利要求2或3所述的鸡蛋白过敏原f1融合基因的重组质粒。

5.根据权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，其采用的表达载体为pet-21a(+)。

6.如权利要求1所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白在制备免疫学诊断试剂、食物过敏原诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。

7.一种鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述的制备方法为：将权利要求4所述的重组质粒在大肠杆菌中表达得到所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白，

8.根据权利要求7所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括对所述的鸡蛋白过敏原f1融合蛋白进行镍柱纯化的步骤。

9.一种鸡蛋白f1化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的鸡蛋白f1化学发光检测试剂盒包括含有r1试剂，所述的r1试剂为含有生物素化鸡蛋白过敏原f1融合蛋白和bsa的tris缓冲液。

10.根据权利要求1所述的鸡蛋白f1化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括r2试剂、m试剂和校准品，所述的r2试剂为含有ap标记的抗人ige抗体和bsa的mes缓冲液，所述的m试剂为含有磁微粒链霉亲和素bsa的pbs缓冲液，所述的校准品为含有ige抗体的tris缓冲液。

技术总结
本发明提供一种鸡蛋白过敏原F1融合蛋白及其应用。本发明的鸡蛋白过敏原F1融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明的融合蛋白融合了卵类黏蛋白Gal d1、卵白蛋白Gal d2、卵转铁蛋白Gal d3及溶菌酶Gal d4过敏原融合蛋白，解决了现有鸡蛋白过敏原F1批间差大的问题以及部分过敏原含量较多或缺失造成的检测结果不准确的问题，本发明保证了批间一致性，控制了产品质量，检测结果更加准确、可靠。

技术研发人员：高金艳,孙国敬,鞠金梅,王玮晨,赵凯霞,张荣,朱梦雅,把程东,乔琦茗,陕文龙,李纪阳
受保护的技术使用者：江苏浩欧博生物医药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12