本发明属于体外诊断与抗体,具体涉及能与肌酸激酶同工酶(ck-mb)特异性结合的抗体或抗原结合片段及其应用。
背景技术:
1、急性心肌梗死(ami)是由冠状动脉阻塞或痉挛导致急性、持续性缺血氧的心肌坏死。ami发病时常伴有严重的胸骨后疼痛,冠状动脉硬化,心肌细胞会迅速坏死,血清心肌酶量增高,心律不齐、休克,发病时如果治疗不及时会危及生命。
2、ami可以通过心肌损伤标志物对其进行诊断,在患者发病早期,心肌细胞损伤较少时通过血液检测,早发现早治疗,可以及时挽救患者生命。能够作为ami早期诊断的标志物有肌钙蛋白i(ctni)、肌酸激酶同工酶(ck-mb)、肌红蛋白(myo)。肌酸激酶(ck)具有四周同工酶:杂化型(mb)、肌肉型(mm)、脑型(bb)、线粒体型(mimi),mb型主要存在与心肌细胞中,mm型主要存在于骨骼肌肉组织中,bb型主要存在于脑组织、胃肠道及子宫平滑肌中,mimi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。当心肌梗塞发生时,血清中的肌酸激酶水平在发病时6小时后迅速提高,24小时后达到一定峰值,其中ck-mb的活性可增高至正常水平的10~25倍。ck-mb作为心肌损伤标志物,具有较高的灵敏度、特异性及诊断准确率。
3、目前临床上有较多的方法检测ck-mb,如酶联免疫法、免疫抑制法、电泳法、免疫分析法、化学发光法等,这些方法上的弊端有检测中期长、原料用量大、仪器设备成本高等。
4、由于ami发病快,患者需要快速进行诊断,便于尽快治疗。免疫层析胶体金法具有快速检测、便携、易于操作等特点,广泛应用在传染病、毒品、早孕等方面,但是该方法检测灵敏度低、无法精准定量。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足,本发明的第一个目的是提供一对能与ck-mb特异性结合的抗体或抗原结合片段,能够特异性识别ck-mb,且形成双抗夹心模式,具有较好的亲和力、特异性及活性。
2、一对能与ck-mb特异性结合的抗体或抗原结合片段,包括:
3、抗体b4-3:
4、轻链可变区cdr1序列的氨基酸序列如seq id no:3所示;
5、轻链可变区cdr2序列的氨基酸序列如seq id no:4所示;
6、轻链可变区cdr3序列的氨基酸序列如seq id no:5所示;
7、重链可变区cdr1序列的氨基酸序列如seq id no:6所示;
8、重链可变区cdr2序列的氨基酸序列如seq id no:7所示;
9、重链可变区cdr3序列的氨基酸序列如seq id no:8所示;
10、以及,
11、抗体h6-4:
12、轻链可变区cdr1序列的氨基酸序列如seq id no:9所示;
13、轻链可变区cdr2序列的氨基酸序列如seq id no:10所示;
14、轻链可变区cdr3序列的氨基酸序列如seq id no:11所示;
15、重链可变区cdr1序列的氨基酸序列如seq id no:12所示;
16、重链可变区cdr2序列的氨基酸序列如seq id no:13所示;
17、重链可变区cdr3序列的氨基酸序列如seq id no:14所示。
18、作为优选,所述抗体b4-3和h6-4为单克隆抗体。
19、作为优选,所述抗体b4-3和h6-4为鼠源抗体。
20、本发明的第二个目的是提供一种核酸,所述核酸编码上述抗体或抗原结合片段。
21、本发明的第三个目的是提供一种载体,所述载体包括上述核酸。
22、本发明的第四个目的是提供一种细胞,所述细胞包括上述载体。
23、本发明的第五个目的是提供上述抗体或抗原结合片段在制备肌酸激酶同工酶相关疾病的早期检测产品中的应用。
24、作为优选,所述肌酸激酶同工酶相关疾病为急性心肌梗死(ami)疾病。
25、本发明的第六个目的是提供一种检测试剂盒,包含上述抗体或抗原结合片段。
26、作为优选,所述抗体b4-3作为标记抗体,所述抗体h6-4作为包被抗体。
27、本发明的有益效果:
28、本发明的两株抗人ck-mb单克隆抗体对ck-mb抗原具有较好的亲和力和特异性,且能够与ck-mb抗原形成双抗体夹心模式,可以用于人血清中的ck-mb蛋白含量的检测,开发胶体金法、乳胶法、酶联免疫法或免疫荧光层析法检测试剂盒。
1.一对能与ck-mb特异性结合的抗体或抗原结合片段,包括:
2.根据权利要求1所述的一对能与ck-mb特异性结合的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体b4-3和h6-4为单克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的一对能与ck-mb特异性结合的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体b4-3和h6-4为鼠源抗体。
4.一种核酸,其特征在于,所述核酸编码权利要求1-3任一项所述抗体或抗原结合片段。
5.一种载体,其特征在于,所述载体包括权利要求4所述核酸。
6.一种细胞,其特征在于,所述细胞包括权利要求5所述载体。
7.权利要求1-3任一项所述抗体或抗原结合片段在制备肌酸激酶同工酶相关疾病的早期检测产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述肌酸激酶同工酶相关疾病为急性心肌梗死ami疾病。
9.一种检测试剂盒,其特征在于,包含权利要求1-3任一项所述抗体或抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的一种检测试剂盒,其特征在于,所述抗体b4-3作为标记抗体,所述抗体h6-4作为包被抗体。