针对CDKN1A_p21CIP1蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用与流程

本发明涉及免疫检测，具体涉及针对cdkn1a_p21cip1蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、p21(cdkn1a，也被命名为p21waf1/cip1/sdi1)是一种周期蛋白依赖性激酶(cdk)抑制剂，由cdkn1a基因编码，位于p53基因下游的第六号染色体短臂上，是cip/kip家族的重要成员。p21蛋白因其蛋白质相对分子质量为21kda，由164个氨基酸构成，富含精氨酸。p21蛋白在正常细胞的存在形式为四聚体复合物，包括细胞周期依赖性激酶(cdk)、细胞周期素(cyc-lin)以及增殖细胞核抗原(pcna)。p21蛋白可抑制cdk和pcna，而p53或细胞有丝分裂原可刺激诱导p21转录，使rb蛋白的磷酸化过程受到破坏，细胞周期停滞在g1期直至受损的dna得以修复。

2、p21蛋白参与细胞周期停滞，dna复制和修复，细胞增殖和分化，衰老和凋亡，并与肿瘤发展密切相关。p21不仅可以发挥抗癌作用，还可以发挥致癌作用，这取决于细胞类型、细胞背景、亚细胞定位和翻译后修饰。p21蛋白的异常表达，会对cyclin、cdk及其激酶活性调节产生影响，进而影响细胞增殖与分化，最终导致肿瘤的发生。p21蛋白能够作为一项判断肿瘤的分化程度和预后好坏的参考指标，可作为结肠癌等恶性肿瘤的诊断标记物，并可作为治疗靶点抑制肿瘤生长。

3、因此，亟需开发针对cdkn1a_p21cip1蛋白的检测技术方案。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供针对cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体及其制备方法和应用，实现利用兔单克隆抗体的高特异性对细胞p21cip1蛋白的免疫学检测。

2、本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体，轻链互补决定区的序列分别如seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5所示，轻链可变区的序列如seq id no:2所示，轻链全长序列如seq id no:1所示；重链互补决定区的序列分别如seq id no:8、seq idno:9、seq id no:10所示，重链可变区的序列如seq id no:7所示，重链全长序列如seq idno:6所示。

4、本发明还提供用于制备上述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的重组蛋白，所述重组蛋白包含序列如seq id no:11所示的氨基酸片段。优选地，重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含cdkn1a_p21cip1蛋白片段、谷胱甘肽巯基转移酶(gst)标签和组氨酸蛋白标签。

5、本发明可以提供编码上述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的核苷酸序列、包含上述核苷酸序列的表达载体或者宿主。

6、本发明还提供针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体在制备检测人cdkn1a_p21cip1蛋白的试剂。所述检测的方法为免疫检测，具体可以为免疫组织化学法、免疫印迹法、免疫沉淀法中的至少一种。

7、本发明还可以提供上述针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：将编码针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的基因分别装载表达载体，转染宿主；培养获得包含兔单克隆抗体的上清液；纯化，即得。

8、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

9、本发明通过选取cdkn1a_p21cip1蛋白c末端的特定氨基酸片段为抗原，大肠杆菌rosetta表达获得重组蛋白作为免疫原，免疫新西兰大白兔，然后基于单个b淋巴细胞筛选和培养的单克隆抗体开发技术，获得抗cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体，验证可以特异性识别人cdkn1a_p21cip1蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术特征：

1.一种针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的轻链互补决定区的序列分别如seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5所示，重链互补决定区的序列分别如seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10所示。

2.根据权利要求1所述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的轻链可变区的序列如seq id no:2所示，重链可变区的序列如seq id no:7所示。

3.根据权利要求2所述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的轻链全长序列如seq id no:1所示，重链全长序列如seq id no:6所示。

4.一种用于制备权利要求1至3任一项所述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包含序列如seq id no:11所示的氨基酸片段。

5.一种编码权利要求1至3任一项所述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的核苷酸序列。

6.一种表达载体或者宿主，其特征在于，包含权利要求5所述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体的核苷酸序列。

7.如权利要求1至3任一项所述的针对人cdkn1a_p21cip1蛋白的兔单克隆抗体在制备检测人cdkn1a_p21cip1蛋白的试剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测的方法为免疫检测。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述免疫检测为免疫组织化学法、免疫印迹法、免疫沉淀法中的至少一种。

10.一种权利要求1至3任一项所述的针对人cdkn1a_p21cip1的兔单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明提供针对人CDKN1A_p21CIP1蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用。针对人CDKN1A_p21CIP1蛋白的兔单克隆抗体的轻链互补决定区的序列如SEQ ID NO:3～SEQ ID NO:5所示，重链互补决定区的序列如SEQ ID NO:8～SEQ ID NO:10所示，可以特异性识别人CDKN1A_p21CIP1蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是病理级免疫组化检测，可用于疾病诊断。

技术研发人员：代海艳,胡文娟,孙倩,李倩倩,程瑶,张云,李博,吴海
受保护的技术使用者：武汉爱博泰克生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12