抗衰老短肽及其制备方法与流程

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种抗衰老短肽及其制备方法。

背景技术：

1、人和高等动物的皮肤由表皮、真皮、皮下组织组成。表皮没有血管，细胞的能量和营养必须由真皮微循环提供。真皮层是皮肤的生命源泉，是一层致密、坚韧且有弹性的组织，主要由纤维成分(胶原蛋白纤维、弹力纤维和网状纤维)、糖蛋白、氨基葡萄糖和玻尿酸等组成。玻尿酸是一种透明的胶状物质，吸水能力可达500-1000倍，是公认的最佳保湿产品。年轻的皮肤，玻尿酸含量高，皮肤光滑、弹性、水嫩、膨胀饱满；皮肤老化时，真皮层变薄，减少了真皮层与表皮层之间物质交换的界面，细胞的正常代谢和有丝分裂作用受到阻碍，皮肤萎缩产生皱纹，因此抗衰老要从补充真皮层营养物质(如胶原蛋白和玻尿酸等)开始。胶原蛋白可以弥补基底膜功能，帮助表皮层与真皮层的结合，能够将水分、养分保送至真皮层。因此，如果能够补充人体皮肤中的胶原蛋白，将能够有效地对抗皮肤衰老的问题。

2、棕榈酸五胜肽-3(pentapeptide-3)别名五环短肽或五胜月肽，它是由法国著名化妆品公司sederma公司研发出品的一种人工合成的短肽。它能够有效促进透明质酸、胶原蛋白和弹力纤维增生，减少肌肤细纹，提高肌肤的含水量，增加皮肤厚度，增强肌肤紧致感和光泽度。它是胶原蛋白i(collagen i)碎片与棕榈酸(palmitic acid)结合后得到的对皮肤更具亲和性和亲水、锁水性的物质。研究表明，若将棕榈酸五胜肽-3加入纤维组织母细胞培养皿中，能加强胶原蛋白i、vii(纤维胶原)和纤维黏连蛋白的合成能力，还能促进表皮内的纤维母细胞产生胶原蛋白和玻尿酸等重要成分。可见，棕榈酸五胜肽-3对减轻皮肤老化有重要作用。试管内测试表明，棕榈酸五胜肽-3能迅速激活胶原蛋白iv合成能力达到100％～327％，激活玻尿酸的合成能力达到267％。如今，该短肽已经广泛应用于许多知名品牌的化妆品行列。

3、目前，已经有很多国家的知名化妆品品牌的许多系列添加了棕榈酸五肽-3作为抗衰老的营养成分。我国上海和深圳的一些生物科技公司也有该产品销售。但是，目前棕榈酸五胜肽-3的制备方法还都是局限于化学合成，其高额的成本限制了这类产品的广泛使用。因此，为了能使这类短肽类的皮肤营养产品不断走近百姓的日常生活，使得普通人拥有安全、稳定、实用的高品质化妆品，有必要设计研发更加高效的抗衰老短肽，并探索大规模制备抗衰老短肽的技术。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、为了提高现有抗衰老短肽—棕榈酸五肽-3的生物学活性，同时降低这类美容肽的生产成本，本发明提供一种抗衰老短肽及其制备方法，在达到优良抗衰老效果的同时，降低生产成本，为规模化生产和应用提供便利。

3、用于解决问题的方案

4、第一方面，本发明提供了一种短肽，其中，所述短肽的氨基酸序列包含如下(i)-(iv)中的任一项：

5、(i)如seq id no.1所示的氨基酸序列；

6、(ii)与seq id no.1所示的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其保留如seq id no.1所示序列的抗衰老效果；

7、(iii)在如seq id no.1所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或修饰1个或多个氨基酸残基并且保留如seq id no.1所示序列的抗衰老效果的氨基酸序列；

8、(iv)由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码如seq id no.1所示序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留如seq id no.1所示序列的抗衰老效果，所述严格条件是中等严格条件，中-高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。

9、第二方面，本发明提供了一种编码上述短肽的多核苷酸，其中，所述多核苷酸的序列包含如seq id no.2所示的序列，优选地，所述多核苷酸的序列为按照宿主细胞表达系统进行了密码子优化的序列。

10、第三方面，本发明提供了一种重组表达载体，其中，所述重组表达载体包含上述多核苷酸的序列；

11、优选地，所述重组表达载体包括pet系列载体、穿梭载体、噬菌体或病毒载体；

12、更优选地，所述重组表达载体为pet-32a。

13、进一步地，所述重组表达载体还包含多核苷酸i，所述多核苷酸i为编码能够通过tev蛋白酶切除的氨基酸序列的多核苷酸；

14、优选地，所述多核苷酸i与上述多核苷酸的5’末端直接连接。

15、进一步地，所述重组表达载体还包含多核苷酸ii，所述多核苷酸ii为编码如seqid no.3所示的氨基酸序列的多核苷酸；

16、优选地，所述多核苷酸ii与上述多核苷酸的3’末端直接连接。

17、第四方面，本发明提供了一种重组宿主细胞，其中，所述重组宿主细胞包含上述重组表达载体；

18、优选地，所述重组宿主细胞为原核细胞、酵母或真核细胞；

19、更优选地，所述重组宿主细胞为大肠杆菌bl21(de3)。

20、第五方面，本发明提供了上述短肽的生产方法，其包括以下步骤：s1：将根据上述重组表达载体导入宿主细胞；s2：在生产培养基中培养所述宿主细胞并生产短肽；s3：收获并纯化所述短肽，优选用亲和柱层析纯化所述蛋白；s4：任选地对所述蛋白进行酶切，优选用tev蛋白酶酶切所述短肽。

21、第六方面，本发明提供了一种组合物，其包含上述短肽，优选地，所述组合物是组织工程产品、化妆品或药物。

22、第七方面，本发明提供了上述短肽在制备抗衰老用产品中的用途。

23、发明的效果

24、通过上述技术方案的实施，本发明所制备的新型抗衰老短肽为长期筛选优化的序列，比市场上同类产品效果显著提高。本发明所公开的新型抗衰老短肽的生产方法，采用大肠杆菌表达系统，适于大规模放大，生产成本非常低，而且编码所述抗衰老短肽的多核苷酸的序列针对大肠杆菌表达系统进行了密码子优化，进一步提高了产量。同时，本发明所制备的短肽可以有效抑制弹性蛋白酶的活性，具有良好的紧致作用，为抗衰老产品的开发、和生产提供了有效帮助。

技术特征：

1.一种短肽，其特征在于，所述短肽的氨基酸序列包含如下(i)-(iv)中的任一项：

2.一种编码如权利要求1所述的短肽的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列包含如seq id no.2所示的序列，优选地，所述多核苷酸的序列为按照宿主细胞表达系统进行了密码子优化的序列。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要求2所述的多核苷酸的序列；

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体还包含多核苷酸i，所述多核苷酸i为编码能够通过tev蛋白酶切除的氨基酸序列的多核苷酸；

5.根据权利要求3或4所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体还包含多核苷酸ii，所述多核苷酸ii为编码如seq id no.3所示的氨基酸序列的多核苷酸；

6.一种重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞包含如权利要求3～5任一项所述的重组表达载体；

7.根据权利要求1所述的短肽的生产方法，其包括以下步骤：

8.一种组合物，其特征在于，包含根据权利要求1所述的短肽，优选地，所述组合物是组织工程产品、化妆品或药物。

9.根据权利要求1所述的短肽在制备抗衰老用产品中的用途。

技术总结
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及抗衰老短肽及其制备方法。本发明提供了一种短肽，其氨基酸序列包含如SEQ ID No.1所示的序列。本发明还提供了所述肽的编码多核苷酸、包含该多核苷酸的重组表达载体、包含该重组表达载体的重组宿主细胞、所述肽的生产方法以及包含所述肽的具有抗衰老功能的组织工程产品、化妆品或药物以及在制备抗衰老用产品中的用途。本发明所述的抗衰老短肽生产工艺简单，成本低廉，能够让抗衰老皮肤营养产品走近百姓的日常生活，具有广阔的市场应用前景。

技术研发人员：杨霞,兰小宾,王玲玲,张永健
受保护的技术使用者：山西锦波生物医药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12