一种靶向ARG2基因的siRNA及其在改善乳腺癌耐药性的应用的制作方法

一种靶向arg2基因的sirna及其在改善乳腺癌耐药性的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种靶向arg2基因的sirna及其在改善乳腺癌耐药性的应用。


背景技术：

2.他莫昔芬是erα阳性乳腺癌病人主要的内分泌治疗药物，大约有40％的患者会产生他莫昔芬耐药。他莫昔芬耐药导致的复发转移已成为erα阳性乳腺癌临床治疗亟待解决的难题。大量研究揭示乳腺癌他莫昔芬耐药的发生伴随大量基因的异常表达，抑制耐药细胞中异常高表达的基因或其功能是治疗乳腺癌耐药的重要策略。
3.小干扰rna(small interfering rna；sirna)是一种长20到25个核苷酸的双链rna，已知sirna可通过互补配对的方式特异性的抑制相关基因的表达，这使sirna成为研究基因功能与药物靶标的一项重要工具。


技术实现要素：

4.为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种靶向arg2基因的sirna及其在改善乳腺癌耐药性的应用。
5.本发明的目的通过下述技术方案实现：一种靶向arg2基因的sirna，所述靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f：5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'。
6.一种靶向arg2基因的sirna在制备用于改善患者对乳腺癌耐药性的药物中的应用。
7.优选的，所述耐药性是由内分泌治疗药物他莫昔芬产生。
8.优选的，所述乳腺癌为erα阳性乳腺癌。
9.优选的，所述靶向arg2基因的sirna能高效抑制arg2基因的表达并显著降低人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性。
10.优选的，所述靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f：5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'。
11.一种靶向arg2基因的sirna和他莫昔芬在制备乳腺癌的药物中的应用。
12.优选的，所述乳腺癌为erα阳性乳腺癌。
13.优选的，所述靶向arg2基因的sirna能高效抑制arg2基因的表达并显著降低人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性。
14.优选的，所述靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f：5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'。
15.本发明的有益效果在于：本发明针对arg2基因的核苷酸序列设计合成sirna,将sirna转入人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞mcf7tr后能高效抑制arg2基因的表达并显著降mcf7tr细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性，从而达到抑制肿瘤的目的。本发明靶向
arg2基因的sirna分子可用于制备治疗他莫昔芬耐药性乳腺癌的药物，且具有广阔的应用前景。
附图说明
16.图1是arg2在他莫昔芬敏感细胞和耐药细胞中的表达量检测图；
17.图2是arg2表达水平与他莫昔芬治疗乳腺癌患者预后的关系图；
18.图3是siarg2干扰效率的检测图；
19.图4是干扰siarg2的表达对他莫昔芬耐药细胞的增殖以及对他莫昔芬的耐药性的影响(***代表p《0.01)。
具体实施方式
20.为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例及附图1-4对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
21.实施例一arg2在他莫昔芬耐药乳腺癌细胞中的表达水平研究
22.1、利用乳腺癌细胞系mcf7建立他莫昔芬耐药乳腺癌细胞研究模型mcf7tr
23.2、细胞总rna的提取、cdna合成
24.细胞总rna的提取采用柱式法total rna小量提取试剂盒(ezb-tz1)，步骤根据试剂盒说明书进行。
25.cdna合成采用4
×
ezscript reverse transcription mix ii(ezb-rt2gq)，步骤根据试剂盒说明书进行。
26.3、荧光定量pcr检测arg2的表达
27.荧光定量pcr采用2
×
ez color sybr green qpcr master mix(cq20)，步骤根据试剂盒说明书进行，实验结果如图1所示，可以看出，arg2表达在他莫昔芬耐药乳腺癌细胞中显著升高。
28.实施例二arg2表达与乳腺癌患者预后相关性研究
29.利用肿瘤数据库kaplan-meier plotter分析使用他莫昔芬治疗的乳腺癌患者中arg2的表达与预后相关性，如图2所示，发现arg2表达水平越高，乳腺癌患者无病生存率越低。
30.实施例三乳腺癌耐药细胞mcf7tr中利用sirna干扰arg2的干扰效率研究
31.以20nm的剂量转染培养的mcf7tr细胞，48小时后提取细胞总rna，逆转录成cdna，荧光定量pcr检测arg2的表达水平，实验结果如图3所示，可以看出，该sirna对arg2具有约90％的干扰效率。其中，靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f:5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'；对照组序列为：5'-si-nc-f：5'-uucuccgaacgugucacgutt-3',si-nc-r:5'-acgugacacguucggagaatt-3'。
32.实施例四乳腺癌耐药细胞mcf7tr中利用sirna干扰arg2的表达对他莫昔芬耐药性的影响
33.在转染sirna 48小时后，培养液中添加1um的他莫昔芬，48小时后通过cck-8试剂盒检测细胞存活率，实验结果如图4所示，可以看出，通过sirna干扰arg2的表达能显著降低他莫昔芬耐药细胞mcf7tr对他莫昔芬的耐药性。
34.本发明针对arg2基因的核苷酸序列设计合成sirna,将sirna转入人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞mcf7tr后能高效抑制arg2基因的表达并显著降mcf7tr细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性，从而达到抑制肿瘤的目的。本发明靶向arg2基因的sirna分子可用于制备治疗他莫昔芬耐药性乳腺癌的药物，且具有广阔的应用前景。
35.上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。


技术特征：
1.一种靶向arg2基因的sirna，其特征在于：所述靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f：5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'。2.一种靶向arg2基因的sirna在制备用于改善患者对乳腺癌耐药性的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的一种靶向arg2基因的sirna在制备用于改善患者对乳腺癌耐药性的药物中的应用，其特征在于：所述耐药性是由内分泌治疗药物他莫昔芬产生。4.根据权利要求2所述的一种靶向arg2基因的sirna在制备用于改善患者对乳腺癌耐药性的药物中的应用，其特征在于：所述乳腺癌为erα阳性乳腺癌。5.根据权利要求2所述的一种靶向arg2基因的sirna在制备用于改善患者对乳腺癌耐药性的药物中的应用，其特征在于：所述靶向arg2基因的sirna能高效抑制arg2基因的表达并显著降低人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性。6.根据权利要求2所述的一种靶向arg2基因的sirna在制备用于改善患者对乳腺癌耐药性的药物中的应用，其特征在于：所述靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f：5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'。7.一种靶向arg2基因的sirna和他莫昔芬在制备乳腺癌的药物中的应用。8.根据权利要求7所述的一种靶向arg2基因的sirna和他莫昔芬在制备乳腺癌的药物中的应用，其特征在于：所述乳腺癌为erα阳性乳腺癌。9.根据权利要求7所述的一种靶向arg2基因的sirna和他莫昔芬在制备乳腺癌的药物中的应用，其特征在于：所述靶向arg2基因的sirna能高效抑制arg2基因的表达并显著降低人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性。10.根据权利要求7所述的一种靶向arg2基因的sirna和他莫昔芬在制备乳腺癌的药物中的应用，其特征在于：所述靶向arg2基因的sirna序列为：si-arg2-f：5'-ccuaucgagaaggcauguatt-3'，si-arg2-r：5'-uacaugccuucucgauaggtt-3'。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种靶向ARG2基因的siRNA及其在改善乳腺癌耐药性的应用，本发明针对ARG2基因的核苷酸序列设计合成siRNA,将siRNA转入人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF7TR后能高效抑制ARG2基因的表达并显著降MCF7TR细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的耐药性，从而达到抑制肿瘤的目的。本发明靶向ARG2基因的siRNA分子可用于制备治疗他莫昔芬耐药性乳腺癌的药物，且具有广阔的应用前景。景。景。


技术研发人员：朱英华 陆小梅 王佳颐
受保护的技术使用者：东莞市第八人民医院（东莞市儿童医院）
技术研发日：2022.12.27
技术公布日：2023/3/21