用于增强人T细胞功能的基因激活靶标的制作方法

背景技术：

1、可用作抗癌治疗剂的细胞治疗剂的实例包括cd8+t细胞、cd4+t细胞、nk细胞、巨噬细胞、树突细胞和嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)t细胞。使用患者来源免疫细胞也可以是副作用很小或没有副作用的有效的癌症治疗。nk细胞具有细胞杀伤效力并且由于不具有抗原特异性而具有一些副作用。树突细胞是属于疫苗概念的治疗剂，因为它们不具有直接杀伤细胞的功能，并且能够将抗原特异性地递送至患者体内的t细胞，从而高效地将癌细胞特异性赋予t细胞。另外，cd4+t细胞在促进生产性、抗原依赖性免疫应答中发挥作用，并且已知cd8+t细胞具有抗原特异性和细胞杀伤功能。

2、然而，迄今为止已经使用或开发的大多数细胞治疗剂具有主要的临床局限性。例如，癌细胞自身分泌抑制人体中免疫应答的物质，或者不呈递产生针对这样的癌细胞的抗体所必需的抗原，从而阻止适当的免疫应答发生。

技术实现思路

0、发明概述

1、本文中描述了t细胞功能的调节子以及使用这样的调节子的方法。在原代人t细胞中进行全基因组crispr激活(crispr activation，crispra)和crispr干扰(crisprinterference，crispri)筛选，以鉴定治疗相关t细胞表型的遗传调节子。这些筛选鉴定了1074个对这些表型表现出显著响应的基因。该筛选鉴定了参与t细胞功能的已知基因，这表明该筛选可靠地鉴定了确实影响t细胞功能的基因。然而，该筛选也鉴定了参与t细胞功能的新的基因。

2、本文中描述了这样的方法，其包括在至少一种淋巴样细胞或髓样细胞或其组合中对表1至7或图1至4中所列任一调节剂基因进行体外修饰，以产生至少一种经修饰淋巴样细胞、至少一种经修饰髓样细胞、或经修饰淋巴样细胞和经修饰髓样细胞的混合物。例如，修饰可以是表1至7或图1至4中所列任一基因的一个或更多个内源基因组位处的一个或更多个的缺失、替换或插入。修饰可以是表1至7或图1至4中所列任一基因的表达或翻译的降低。表达或翻译的降低可通过抑制性核酸(例如rnai、shrna、sirna)来实现。修饰可以是表1至7或图1至4中所列任一基因的表达提高。例如，表达提高可通过对表1至7或图1至4中所列任一基因的一个或更多个启动子进行修饰来实现。修饰可以是表1至7或图1至4中所列任一基因的一个或更多个crispr介导的修饰或激活。修饰可包括用一种或更多种表达盒转化至少一种淋巴样细胞或髓样细胞或其组合，所述表达盒包含与含有表1至7或图1至4中所列任一基因的编码区的核酸区段可操作连接的启动子。

3、所述方法还可包括向对象施用至少一种经修饰淋巴样细胞、至少一种经修饰髓样细胞、或经修饰淋巴样细胞和经修饰髓样细胞的混合物。

4、在一些情况下，所述方法可包括孵育至少一种经修饰淋巴样细胞、至少一种经修饰髓样细胞、或经修饰淋巴样细胞和经修饰髓样细胞的混合物，以形成经修饰细胞群。可将这样的经修饰细胞群施用于对象。在一些情况下，对象可患有疾病或病症。例如，所述疾病或病症是免疫病症或癌症。

5、还描述了这样的方法，其包括使至少一种测试剂与测试细胞接触以提供测试测定混合物，以及测量：

6、所述测试细胞的细胞增殖、所述测试细胞的细胞因子释放或其组合；

7、所述测试细胞的活化；

8、所述细胞中表1至7或图1至4中所列任一调节子的表达或活性；或者

9、其组合。

10、所述方法还可包括将所测量结果与对照结果进行比较。对照结果可以是在没有任何测试剂的情况下测量的测试细胞的结果。

11、例如，测试细胞可包含淋巴样细胞和/或髓样细胞。测试细胞的实例可包括细胞毒性t细胞、辅助t细胞、调节性t细胞、初始t细胞、活化的t细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、γδt细胞、嵌合抗原受体(car)细胞、自然杀伤(natural killer，nk)细胞、诱导多能干细胞来源的免疫(例如淋巴样和/或髓样)细胞或其组合。

12、可将如此测量的结果与对照细胞混合物的结果进行比较，所述对照细胞混合物包含不含任何测试剂的情况下测量的测试细胞和t细胞。

技术特征：

1.方法，其包括在至少一种淋巴样细胞或髓样细胞或其组合中对表1至7或图1至4中所列任一基因进行离体修饰，以产生至少一种经修饰淋巴样细胞、至少一种经修饰髓样细胞、或经修饰淋巴样细胞与经修饰髓样细胞的混合物。

2.权利要求1所述的方法，其中所述修饰是表1至7或图1至4中所列任一基因中一个或更多个内源基因组位点处的一个或更多个的缺失、替换或插入。

3.权利要求1所述的方法，其中所述修饰是表1至7或图1至4中所列任一基因的表达或翻译的降低。

4.权利要求3所述的方法，其中所述表达或翻译的降低通过抑制性核酸(例如，rnai、shrna、sirna)来实现。

5.权利要求1所述的方法，其中所述修饰是表1至7或图1至4中所列任一基因的表达提高。

6.权利要求5所述的方法，其中所述表达提高通过对表1至7或图1至4中所列任一基因的一个或更多个启动子进行修饰来实现。

7.权利要求1所述的方法，其中所述修饰是表1至7或图1至4中所列任一基因的一个或更多个crispr介导的修饰或激活。

8.权利要求1所述的方法，其中所述修饰是用一种或更多种表达盒转化至少一种淋巴样细胞或髓样细胞或其组合，所述表达盒包含与含有表1至7或图1至4中所列任一基因的编码区的核酸区段可操作连接的启动子。

9.权利要求1所述的方法，其还包括向对象施用至少一种经修饰淋巴样细胞、至少一种经修饰髓样细胞、或经修饰淋巴样细胞与经修饰髓样细胞的混合物。

10.权利要求1所述的方法，其还包括孵育所述至少一种经修饰淋巴样细胞、至少一种经修饰髓样细胞、或经修饰淋巴样细胞与经修饰髓样细胞的混合物以形成经修饰细胞群。

11.权利要求10所述的方法，其还包括向对象施用所述经修饰细胞群。

12.权利要求9或11所述的方法，其中所述对象患有疾病或病症。

13.权利要求12所述的方法，其中所述疾病或病症是免疫病症或癌症。

14.方法，其包括使至少一种测试剂与测试细胞接触以提供测试测定混合物，以及测量：

15.权利要求14所述的方法，其还包括将所测量结果与对照结果进行比较。

16.权利要求15所述的方法，其中对照结果是所述测试细胞在无任何所述测试剂的情况下测得的结果。

17.权利要求14所述的方法，其中所述测试细胞包含淋巴样细胞和/或髓样细胞。

18.权利要求14所述的方法，其中所述测试细胞包含细胞毒性t细胞、辅助t细胞、调节性t细胞、初始t细胞、活化的t细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、γδt细胞、嵌合抗原受体(car)细胞、自然杀伤(nk)细胞、诱导多能干细胞来源的免疫(例如淋巴样和/或髓样)细胞、或其组合。

技术总结
本文中描述了T细胞调节子和调节这样的T细胞调节子的方法，以及鉴定调节所述T细胞调节子的新的药剂的方法。在淋巴样细胞和/或髓样细胞中对这样的T细胞调节子的修饰可提供可施用于有此需要的对象的淋巴样细胞/髓样细胞，所述对象例如患有免疫障碍、癌症以及其它疾病和病症的对象。

技术研发人员：亚历山大·马尔松,拉尔夫·施密特,扎卡里·斯坦哈特
受保护的技术使用者：J·大卫格莱斯顿研究所-根据J·大卫格莱斯顿遗嘱的遗嘱信托
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16