KCNV2基因疗法的制作方法

本公开总体上涉及分子生物学和医学领域。更具体地，本发明提供了用于治疗视网膜疾病的基因疗法的组合物和方法。

背景技术：

1、kv8.2是由kcnv2基因编码的电压门控钾通道亚基。kcnv2基因位于染色体9p24.2上，并且由2个编码545个氨基酸的蛋白质的外显子组成。所述蛋白质在人类、小鼠和猕猴的视网膜中在视杆细胞和视锥细胞光感受器内节(椭圆体和肌样区域)中表达，而在外节中不存在。kv8.2与其他钾亚基相互作用，诸如在视杆细胞和视锥细胞内节中表达的kv2.1，以及在人类中在视锥细胞中表达但在视杆细胞中不表达的kv2.2。kv8.2进一步与kv2通道相互作用以改变其生物物理特性。

2、kv8.2是迄今为止唯一与人类疾病有关的钾通道亚基。kv8.2的变体/突变导致严重的遗传性光感受器营养不良，称为“伴有超常视杆细胞反应的视锥细胞营养不良”(cdssr)。cdssr的症状包括视敏度下降、色觉缺陷和视网膜电图反应改变(包括b波振幅升高)。

3、因此，迫切需要用于治疗与kcnv2突变相关的视网膜疾病(包括但不限于cdssr)的新疗法。

技术实现思路

1、在一个方面，本公开提供了一种表达构建体，所述表达构建体包含：

2、(a)赋予在感光细胞中表达的启动子序列，和

3、(b)编码kv8.2的核酸序列；

4、其中所述核酸序列与所述启动子可操作地连接。

5、在实施方案中，启动子序列是cag或视紫红质激酶(rk)启动子序列。在实施方案中，启动子序列包含与seq id:no:8至少90％同一的序列。在实施方案中，启动子序列包含seq id:no:8的序列。在其他实施方案中，启动子序列包含与seq id:no:7至少90％同一的序列。在实施方案中，启动子序列包含seq id:no:7的序列。

6、在实施方案中，表达构建体还包含转录后调控元件。在实施方案中，表达构建体还包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)。在实施方案中，wpre包含与seq id no:11至少90％同一的序列或包含seq id no:11的序列。

7、在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列是来自wt kcnv2基因的编码序列(cds)。在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列包含与seq id no:9至少90％同一的序列。在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列包含含有seq id no:9的序列。

8、在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列是密码子优化的kcnv2基因序列。在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列包含与seq id no:10至少90％同一的序列。在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列包含含有seq id no:10的序列。

9、在实施方案中，编码kv8.2的核酸序列编码蛋白质，所述蛋白质包含与seq id no:13至少90％同一的序列。在一些实施方案中，编码kv8.2的核酸序列编码包含seq id no:13的蛋白质。

10、在实施方案中，表达构建体还包含牛生长激素聚腺苷酸化(bgh-polya)信号。在实施方案中，聚腺苷酸化信号包含与seq id no:12至少90％同一的序列。在实施方案中，聚腺苷酸化信号包含seq id no:12。

11、在实施方案中，表达构建体包含与选自由seq id no:1-4组成的组的序列至少90％同一的序列。在实施方案中，表达构建体包含选自由seq id no:1-4组成的组的序列。

12、在另一方面，本公开提供了一种包含本文公开的表达构建体的载体。在实施方案中，载体是病毒载体。在实施方案中，载体是腺相关病毒(aav)载体。在实施方案中，载体包含源自aav血清型aav2的基因组。在实施方案中，载体包含源自aav7m8的衣壳。在实施方案中，载体包含源自aav5的衣壳。

13、在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文公开的载体和药学上可接受的载剂(carrier)。

14、在另一方面，本公开提供了一种用于治疗有需要的受试者的视网膜疾病的方法，其中所述视网膜疾病与kcnv2基因中的一个或多个突变相关，所述方法包括向所述受试者施用本文公开的载体或药物组合物。在实施方案中，视网膜疾病是伴有超常视杆细胞反应的视锥细胞营养不良(cdssr)。

15、在另一方面，本公开提供了一种增加有需要的受试者中kcnv2表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文公开的载体或药物组合物。

16、在另一方面，本公开提供了一种增加有需要的受试者的光感受器中的kv8.2水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文公开的载体或药物组合物。

17、在实施方案中，载体或药物组合物是通过眼内注射施用。在所公开的方法的实施方案中，载体或药物组合物被注射到受试者的中央视网膜中。

技术特征：

1.一种表达构建体，所述表达构建体包含：

2.如权利要求1所述的表达构建体，其中所述启动子序列是cag或视紫红质激酶(rk)启动子序列。

3.如权利要求2所述的表达构建体，其中所述启动子序列包含与seq id:no:8至少90％同一的序列。

4.如权利要求3所述的表达构建体，其中所述启动子序列包含seq id:no:8的序列。

5.如权利要求2所述的表达构建体，其中所述启动子序列包含与seq id:no:7至少90％同一的序列。

6.如权利要求5所述的表达构建体，其中所述启动子序列包含seq id:no:7的序列。

7.如前述权利要求中任一项所述的表达构建体，其中所述表达构建体还包含转录后调控元件。

8.如权利要求7所述的表达构建体，其中所述表达构建体还包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)。

9.如权利要求7所述的表达构建体，其中所述wpre包含与seq id no:11至少90％同一的序列。

10.如权利要求9所述的表达构建体，其中所述wpre包含含有seq id no:11的序列。

11.如权利要求1-10中任一项所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列是wt kcnv2基因。

12.如权利要求1-10中任一项所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列包含与seq id no:9至少90％同一的序列。

13.如权利要求12所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列包含含有seq id no:9的序列。

14.如权利要求1-10中任一项所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列是密码子优化的kcnv2基因序列。

15.如权利要求1-10中任一项所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列包含与seq id no:10至少90％同一的序列。

16.如权利要求15所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列包含含有seq id no:10的序列。

17.如权利要求1-16中任一项所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列编码蛋白质，所述蛋白质包含与seq id no:13至少90％同一的序列。

18.如权利要求17所述的表达构建体，其中编码所述kv8.2的所述核酸序列编码包含seq id no:13的蛋白质。

19.如前述权利要求中任一项所述的表达构建体，其中所述表达构建体还包含牛生长激素聚腺苷酸化(bgh-polya)信号。

20.如权利要求19所述的表达构建体，其中所述聚腺苷酸化信号包含与seq id no:12至少90％同一的序列。

21.如权利要求20所述的表达构建体，其中所述聚腺苷酸化信号包含seq id no:12。

22.如前述权利要求中任一项所述的表达构建体，其中所述表达构建体包含与选自由seq id no:1-4组成的组的序列至少90％同一的序列。

23.如权利要求22所述的表达构建体，其中所述表达构建体包含选自由seq id no:1-4组成的组的序列。

24.一种载体，所述载体包含如前述权利要求中任一项所述的表达构建体。

25.如权利要求24所述的载体，其中所述载体是病毒载体。

26.如权利要求25所述的载体，其中所述载体是腺相关病毒(aav)载体。

27.如权利要求26所述的载体，其中所述载体包含源自aav血清型aav2的基因组。

28.如权利要求26或27中任一项所述的载体，其中所述载体包含源自aav7m8的衣壳。

29.如权利要求26或27中任一项所述的载体，其中所述载体包含源自aav5的衣壳。

30.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求24-29中任一项所述的载体和药学上可接受的载剂。

31.一种用于治疗有需要的受试者的视网膜疾病的方法，其中所述视网膜疾病与kcnv2基因中的一个或多个突变相关，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求24-29中任一项所述的载体或如权利要求30所述的药物组合物。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述视网膜疾病是伴有超常视杆细胞反应的视锥细胞营养不良(cdssr)。

33.一种增加有需要的受试者中kcnv2表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求24-29中任一项所述的载体或如权利要求30所述的药物组合物。

34.一种增加有需要的受试者的光感受器中的kv8.2水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求24-29中任一项所述的载体或如权利要求30所述的药物组合物。

35.如权利要求31-34中任一项所述的方法，其中所述载体或所述药物组合物是通过眼内注射施用。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述载体或所述药物组合物被注射到所述受试者的中央视网膜中。

技术总结
本文提供了用于表达Kv8.2的表达构建体、病毒基因组和载体，以及包含本文公开的载体的药物组合物。还提供了使用本文公开的表达构建体和载体的方法，包括治疗有需要的受试者的视网膜疾病的方法，其中所述视网膜疾病与KCNV2基因中的一个或多个突变相关，所述方法包括向所述受试者施用本文公开的载体。

技术研发人员：A·乔治亚迪斯
受保护的技术使用者：梅里特斯英国第二有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/12