酶促获得可溶性纤维的方法与流程

本发明涉及由低聚糖和多糖的混合物制备不易消化的α-葡聚糖混合物的方法。本发明还涉及不易消化的α-葡聚糖的混合物。本发明还涉及能够产生α(1,3)糖苷键的葡聚糖转移酶和能够产生α(1,6)糖苷键的葡聚糖转移酶的依次用途，其用于降低α-葡聚糖混合物的可消化性。

背景技术：

0、现有技术

1、膳食纤维在人类营养中具有重要作用。在膳食纤维中，存在可溶于水并具有胶凝能力的可溶性纤维与不溶性纤维的区分。可溶性纤维(包括支链麦芽糖糊精)是特别有利的，因为它们不易消化。因此，将它们掺入饮食中可以降低食物的血糖指数并延长饱腹感。它们还具有对肠道菌群的益生元性质；换句话讲，它们能够选择性地促进某些益生菌类型细菌的生长或微生物群的活性，提供健康益处。

2、迄今为止，包括支链麦芽糖糊精的可溶性纤维主要通过物理化学方法获得。

3、特别是本申请人公司以商品名fm10销售的麦芽糖糊精作为水溶性纤维的情况。

4、存在通过物理化学方法获得的其他可溶性纤维，例如由泰莱集团(tate and lyl)销售的由杜邦营养与生物科学公司(dupont nutrition andbiosciences)销售的或

5、许多研究已经证明，可消化性与可溶性纤维内各种类型的糖苷键的百分比直接相关。

6、事实上，标准麦芽糖糊精是可以快速消化的并且被定义为基本上在α1→4(下文中1→4或α(1,4))处与仅4％至5％的α1→6糖苷键(下文中1→6或α(1,6))连接的葡萄糖和葡萄糖聚合物的纯化且浓缩的混合物，具有变化极大的分子量，完全可溶于水并且具有低还原能力。

7、通过增加α1→6键或α1→3键的百分比，麦芽糖糊精的支化度增加，这使得它们更耐消化。

8、使用能够促进“支链”型键形成的酶的酶促方法在安全和环境保护方面具有许多优点，并且还提供更好的特异性。

9、最初，大多数生产可溶性纤维的酶促方法是使用蔗糖作为酶的底物来进行的，以便产生新键。例如，wo2015183714描述了由蔗糖和α-葡聚糖型底物的混合物进行的酶促反应。

10、目前，大多数酶促方法使用淀粉麦芽糖酶由淀粉生产可溶性纤维。

11、期望在不存在蔗糖的情况下从底物获得酶溶性纤维。

技术实现思路

1.一种用于制备α-葡聚糖混合物的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述底物包含：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述底物的右旋糖当量(de)介于18与20之间，优选地介于18与19之间，甚至更优选地为约18.4。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述底物以介于50g/l反应介质与500g/l反应介质之间，优选地介于100g/l反应介质与200g/l反应介质之间的浓度引入。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述第一次温育和第二次温育之间添加所述底物。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一种酶是能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,3)糖苷键的α-葡聚糖转移酶，并且所述第二种酶是能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,6)糖苷键的α-葡聚糖转移酶。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述第一种酶是能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,6)糖苷键的α-葡聚糖转移酶，并且所述第二种酶是能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,3)糖苷键的α-葡聚糖转移酶。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,6)糖苷键的所述α-葡聚糖转移酶是具有序列seq idno:1的蛋白质或与具有seq id no:1的所述蛋白质具有至少90％同一性的蛋白质。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,3)糖苷键的所述α-葡聚糖转移酶是具有序列seq idno:2的蛋白质或与具有所述序列seq id no:2的所述蛋白质具有至少90％同一性的蛋白质。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每种酶为介于0.01mg/ml反应介质与1mg/ml之间反应介质，优选地介于0.05mg/ml反应介质与0.5mg/ml反应介质之间，甚至更优选地约0.1mg/ml反应介质的浓度。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于每次温育进行介于12小时与48小时之间的时间段，优选地约24小时，和/或处于包含在介于20℃与40℃之间的温度，优选地约37℃下和/或在介于5与6.5之间，优选地约5.75的ph下进行。

12.一种能够通过根据前述权利要求中任一项所述的方法获得的α-葡聚糖混合物。

13.一种α-葡聚糖的混合物，其特征在于所述α-葡聚糖的混合物具有：

14.根据权利要求12或13中任一项所述的α-葡聚糖混合物在制备用于人或动物营养的食品中的用途。

15.能够裂解所述α(1,4)糖苷键并产生α(1,6)糖苷键的葡聚糖转移酶和能够裂解α(1,4)糖苷键并产生α(1,3)糖苷键的葡聚糖转移酶的依次用途，其用于降低α-葡聚糖混合物的可消化性，所述葡聚糖转移酶分别具有所述序列seq id no:1或与具有所述序列seq idno:1的所述蛋白质具有至少90％同一性的蛋白质，以及具有序列seq id no:2或与具有seqid no:2的所述蛋白质具有至少90％同一性的蛋白质。