包含间充质干细胞的细胞群、细胞片及细胞片的制造方法

本发明涉及一种包含间充质干细胞的细胞群、细胞片及细胞片的制造方法。

背景技术：

1、间质细胞中包含的间充质干细胞(mesenchymal stem cells(msc))主要是指具有能够分化为作为来自中胚层的组织的骨、软骨、血管、心肌细胞等的能力的干细胞。作为用于定义人msc的标准，国际细胞治疗学会提出了如下内容作为所需最低条件：(1)在标准的培养条件对塑料具有粘接性；(2)细胞表面标志物的cd73、cd90、cd105为阳性，cd79α、cd34、cd45、hla-dr为阴性；(3)具有向成骨细胞、软骨细胞或脂肪细胞的分化能力(非专利文献1)。

2、我们知道，msc具有抗炎作用和生长因子诱导作用、促进血管生成作用等，对于组织的修复起到重要的作用。近年来，msc在再生医学中的应用势头正猛，促进组织和器官的再生及功能改善的新型治疗方法正快速实现实用。例如，专利文献1中公开了一种能够用于因牙周病等损伤后的牙周组织的再生的包含msc的来自牙周膜的细胞的片材。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：国际公开公报2005/103233

6、非专利文献

7、非专利文献1：m.dominici,md et al.,cytotherapy,:8,315-317(2006)

技术实现思路

1、提出了多种用于评价msc的有用标志物，例如，如上所述，在非专利文献1中，公开了cd105、cd73、cd90等作为msc所必须的标志物。然而，表达这些标志物的细胞不一定显示良好的增殖，因此需要更加有用的标志物。

2、根据其来源组织的不同，msc的增殖能力、分化能力显著不同，因此，根据msc的来源组织和用途，有用的用于评价msc的标志物也可能不同。专利文献1中虽然公开了来自牙周膜的细胞的细胞片的制造方法，但对于用于筛选作为材料的细胞的标志物等并未加以公开。

3、本发明的目的在于，获得一种包含增殖能力和成骨细胞分化能力优异、对于牙周组织的再生有用的间充质干细胞的细胞群。另外，本发明的目的还在于，提供一种以包含增殖能力和成骨细胞分化能力优异、对于牙周组织的再生有用的间充质干细胞的细胞群为材料的细胞片及细胞片的制造方法。

4、本发明人等针对用于牙周组织的再生的msc，考察了能够在分化诱导前分辨增殖能力和成骨细胞分化能力优异的msc的标志物，并发现了该标志物。并且发现，通过将该标志物用于筛选指标，能够得到牙周组织再生能力高的msc，并且能够以其为材料得到对于牙周组织再生有用的细胞片，从而完成了本发明。

5、即，根据本说明书，提供以下的发明。

6、(1)一种细胞群，包含来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞，钙化诱导前的碱性磷酸酶活性为1u以上。

7、(2)如(1)所述的细胞群，其中，钙化诱导后的碱性磷酸酶活性为5u以上。

8、(3)如(1)或(2)所述的细胞群，其中，所述间充质干细胞为来自牙周膜的间充质干细胞。

9、(4)一种细胞片，包含细胞群，所述细胞群含有来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞，所述细胞群的钙化诱导后的碱性磷酸酶活性为5u以上。

10、(5)如(4)所述的细胞片，其中，所述细胞群的钙化诱导前的碱性磷酸酶活性为1u以上。

11、(6)一种细胞片的制造方法，包括下述的(a)～(c)工序：

12、(a)获取细胞群，所述细胞群具有碱性磷酸酶活性，并且包含来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞；

13、(b)将所述细胞群用钙化诱导培养基培养，在塑料基板上使其增殖；以及

14、(c)回收并清洗所述塑料基板上形成的片状的细胞群。

15、(7)如(6)所述的方法，其中，所述工序(a)中的细胞群的碱性磷酸酶活性为1u以上。

16、(8)如(6)或(7)所述的方法，其中，所述细胞群的钙化诱导后的碱性磷酸酶活性为5u以上。

17、(9)一种储存和/或输送包含细胞群的细胞片的方法，所述细胞群含有来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞，所述细胞群具有高碱性磷酸酶活性，所述细胞片被保持在常温的α改良eagle基本培养基中。

18、(10)如(9)所述的方法，其中，所述细胞片能够在常温的α改良eagle基本培养基中在能够使用状态下保持7天以上。

19、(11)如(9)或(10)所述的方法，其中，所述细胞片为(4)或者(5)所述的细胞片、或通过(6)～(8)中任一项所述的方法制造的细胞片。

20、本说明书包括作为本申请的优先权的基础的日本专利申请第2021-188216号的公开内容。

21、根据本发明，能够得到增殖能力和成骨细胞分化能力优异、并且对于牙周组织的再生有用的间充质干细胞。另外，还能够提供一种以增殖能力和成骨细胞分化能力优异、并且对于牙周组织的再生有用的间充质干细胞为材料的细胞片及细胞片的制造方法。

技术特征：

1.一种细胞群，包含来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞，并且钙化诱导前的碱性磷酸酶活性为1u以上。

2.根据权利要求1所述的细胞群，其中，

3.根据权利要求1所述的细胞群，其中，

4.一种细胞片，包含细胞群，所述细胞群含有来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞，所述细胞群的钙化诱导后的碱性磷酸酶活性为5u以上。

5.根据权利要求4所述的细胞片，其中，

6.一种细胞片的制造方法，包括下述的(a)～(c)的工序：

7.根据权利要求6所述的方法，其中，

8.根据权利要求6所述的方法，其中，

9.一种储存和/或输送包含细胞群的细胞片的方法，所述细胞群含有来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞，所述细胞群具有高碱性磷酸酶活性，所述细胞片被保持在常温的α改良eagle基本培养基中。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中，所述细胞片为权利要求4或者5所述的细胞片、或通过权利要求6～8中任一项所述的方法制造的细胞片。

技术总结
本发明得到一种包含增殖能力和成骨细胞分化能力优异，对于牙周组织的再生有用的间充质干细胞的细胞群。另外，本发明提供一种以包含增殖能力和成骨细胞分化能力优异，对于牙周组织的再生有用的间充质干细胞的细胞群为材料的细胞片及细胞片的制造方法。从包含来自牙齿或牙周组织的间充质干细胞的细胞群中筛选获得钙化诱导前的碱性磷酸酶活性为1U以上的细胞群。通过以下的工序(a)～(c)得到细胞片。(a)获得包含具有碱性磷酸酶活性的间充质干细胞的细胞群；(b)将所述细胞群用钙化诱导培养基培养，在塑料基板上使其增殖；以及(c)回收并清洗所述塑料基板上形成的片状的细胞群。

技术研发人员：岩田隆纪,鬼塚理
受保护的技术使用者：国立大学法人东京医科齿科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/6/30