检测质粒polyA尾长度的引物和方法与流程

本发明属于分子生物学，更具体地，本发明涉及一种检测质粒polya尾长度的引物、试剂盒和方法。

背景技术：

1、发现mrna的3’端带有polya尾已有几十年的历史，期间的研究已经证实polya尾为调节mrna翻译和稳定性的核心因子。

2、在mrna体外合成中，当前普遍的做法是质粒模板中polya尾经体外转录来实现mrna中polya尾的添加。

3、mrna中polya尾长度取决于质粒中polya尾长度，而质粒polya尾序列在宿主菌培养过程中经常会发生碱基丢失，造成polya尾缩短的现象，因此对于质粒中polya尾长度进行确认十分重要。当前质粒polya尾长度的检测方法主要以sanger测序为主，但是测序周期较长，成本也高。因此，提供一种简单快捷且准确性高的测定质粒polya尾长度的方法非常有意义。

技术实现思路

1、基于此，本发明的目的在于提供一种检测质粒polya尾长度的引物、试剂盒及方法。

2、实现上述发明目的的技术方案包括如下。

3、本发明的第一方面，提供了一种检测质粒polya尾长度的引物，包括序列如seq idno.1所示的正向引物，和序列如seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4或seq id no.5所示的反向引物。

4、本发明的第二方面，提供了一种检测质粒polya尾长度的试剂盒，包括上述检测质粒polya尾长度的引物。

5、本发明的第三方面，提供了一种检测质粒polya尾长度的方法，包括以下步骤：采用上述检测质粒polya尾的引物，对待测质粒进行pcr扩增后，琼脂糖凝胶电泳检测。

6、在本发明中，设计了针对质粒polya尾进行扩增的引物，可以特异性扩增质粒polya尾；提取质粒对质粒polya尾pcr扩增后，即可通过琼脂糖凝胶电泳检测分析polya尾长度，其对比sanger测序法，所需时间减少和成本均大幅度减少，准确性基本能与sanger测序法保持一致。

技术特征：

1.一种检测质粒polya尾长度的引物，其特征在于，所述引物包括：序列如seq id no.1所示的正向引物，和序列如seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4或seq id no.5所示的反向引物。

2.根据权利要求1所述的检测质粒polya尾长度的引物，其特征在于，所述引物包括：序列如seq id no.1所示的正向引物，和序列如seq id no.2所示的反向引物。

3.根据权利要求1或2所述的检测质粒polya尾长度的引物，其特征在于，所述质粒的3'utr区域为hbbutr。

4.权利要求1～3任一项所述的引物在制备检测质粒polya尾长度的试剂盒中的应用。

5.一种检测质粒polya尾长度的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的检测质粒polya尾长度的引物。

6.根据权利要求5所述的检测质粒polya尾长度的试剂盒，其特征在于，所述引物中的正向引物和反向引物的工作浓度均为8um～12um。

7.一种检测质粒polya尾的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用权利要求1～3任一项所述的检测质粒polya尾的引物，对待测质粒进行pcr扩增后，琼脂糖凝胶电泳检测。

8.根据权利要求7所述的检测质粒polya尾的方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应体系包括：待测质粒样品0.8～1.2ul、正向引物0.8～1.2ul、反向引物0.8～1.2ul、taqpcrmastermix8～12ul，无酶水加至20ul。

9.根据权利要求7所述的检测质粒polya尾的方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应程序包括：94℃，30s，56℃，30s，72℃，10s；循环30次。

10.根据权利要求7所述的检测质粒polya尾的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳检测的条件为240v～260v，20min～30min。

技术总结
本发明公开了一种检测质粒polyA尾长度的引物和方法，所述引物包括：序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物，和序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的反向引物。在本发明中，设计了针对质粒polyA尾进行扩增的引物，可以特异性扩增质粒polyA尾；提取质粒对质粒polyA尾PCR扩增后，即可通过琼脂糖凝胶电泳检测分析polyA尾长度，其对比Sanger测序法，所需时间减少和成本均大幅度减少，准确性基本能与Sanger测序法保持一致。

技术研发人员：潘有东,张琼,朱蕾,刘浩,万季,赵钊,王弈
受保护的技术使用者：深圳新合睿恩生物医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13