本发明属于分子生物学,更具体地,本发明涉及一种检测质粒polya尾长度的引物、试剂盒和方法。
背景技术:
1、发现mrna的3’端带有polya尾已有几十年的历史,期间的研究已经证实polya尾为调节mrna翻译和稳定性的核心因子。
2、在mrna体外合成中,当前普遍的做法是质粒模板中polya尾经体外转录来实现mrna中polya尾的添加。
3、mrna中polya尾长度取决于质粒中polya尾长度,而质粒polya尾序列在宿主菌培养过程中经常会发生碱基丢失,造成polya尾缩短的现象,因此对于质粒中polya尾长度进行确认十分重要。当前质粒polya尾长度的检测方法主要以sanger测序为主,但是测序周期较长,成本也高。因此,提供一种简单快捷且准确性高的测定质粒polya尾长度的方法非常有意义。
技术实现思路
1、基于此,本发明的目的在于提供一种检测质粒polya尾长度的引物、试剂盒及方法。
2、实现上述发明目的的技术方案包括如下。
3、本发明的第一方面,提供了一种检测质粒polya尾长度的引物,包括序列如seq idno.1所示的正向引物,和序列如seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4或seq id no.5所示的反向引物。
4、本发明的第二方面,提供了一种检测质粒polya尾长度的试剂盒,包括上述检测质粒polya尾长度的引物。
5、本发明的第三方面,提供了一种检测质粒polya尾长度的方法,包括以下步骤:采用上述检测质粒polya尾的引物,对待测质粒进行pcr扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测。
6、在本发明中,设计了针对质粒polya尾进行扩增的引物,可以特异性扩增质粒polya尾;提取质粒对质粒polya尾pcr扩增后,即可通过琼脂糖凝胶电泳检测分析polya尾长度,其对比sanger测序法,所需时间减少和成本均大幅度减少,准确性基本能与sanger测序法保持一致。
1.一种检测质粒polya尾长度的引物,其特征在于,所述引物包括:序列如seq id no.1所示的正向引物,和序列如seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4或seq id no.5所示的反向引物。
2.根据权利要求1所述的检测质粒polya尾长度的引物,其特征在于,所述引物包括:序列如seq id no.1所示的正向引物,和序列如seq id no.2所示的反向引物。
3.根据权利要求1或2所述的检测质粒polya尾长度的引物,其特征在于,所述质粒的3'utr区域为hbbutr。
4.权利要求1~3任一项所述的引物在制备检测质粒polya尾长度的试剂盒中的应用。
5.一种检测质粒polya尾长度的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1~3任一项所述的检测质粒polya尾长度的引物。
6.根据权利要求5所述的检测质粒polya尾长度的试剂盒,其特征在于,所述引物中的正向引物和反向引物的工作浓度均为8um~12um。
7.一种检测质粒polya尾的方法,其特征在于,包括以下步骤:采用权利要求1~3任一项所述的检测质粒polya尾的引物,对待测质粒进行pcr扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测。
8.根据权利要求7所述的检测质粒polya尾的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应体系包括:待测质粒样品0.8~1.2ul、正向引物0.8~1.2ul、反向引物0.8~1.2ul、taqpcrmastermix8~12ul,无酶水加至20ul。
9.根据权利要求7所述的检测质粒polya尾的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应程序包括:94℃,30s,56℃,30s,72℃,10s;循环30次。
10.根据权利要求7所述的检测质粒polya尾的方法,其特征在于,所述琼脂糖凝胶电泳检测的条件为240v~260v,20min~30min。