转录因子SmMYB12及其应用和蛋白质

本发明涉及一种从茄子中克隆得到的转录因子smmyb12及其在调控茄子果皮类黄酮含量中的应用和蛋白质。

背景技术：

1、茄子(solanum melongena l.)，茄科茄属类蔬菜，起源于印度，中国为第二起源地。我国茄子收获面积为78.2万公顷，占全世界收获面积的42.3％(fao,2021)，但各地喜好的果实颜色变化较大：在东北以绿茄为主，江浙沪一带主要是细长的紫茄，在中原地区，主要以绿长茄为主，西南地区以紫茄为主，华南地区主要栽培紫红长茄。因此，果皮颜色成为茄子重要的育种目标之一。

2、myb类转录因子：myb在n端含有一段由51～52个氨基酸残基组成的dna结合域，形成螺旋-转角-螺旋(hth)的构型。根据保守myb结构域的数目不同可以将其分为三类(stracke et al.,2001)：单个myb结构域蛋白(r1-myb)，2个结构域蛋白(r2r3-myb)和3个结构域蛋白(r1r2r3-myb)，与花青素合成关系最密切的主要是r2r3-myb。

3、邵文婷(2013)从茄子中分离到smmyb调节基因，发现smmyb是一个r2r3myb转录因子，正向调控茄子花青素合成，从而促进果皮着色。周婷婷(2016)从欧洲绿萼茄、东北紫萼茄及绿紫相间的杂交后代中分别克隆smmyb基因，对其在不同开花期萼片上的表达进行荧光定量pcr分析，结果表明smmyb的表达量与花青素含量呈正相关。atmyb12在烟草中表达会导致黄酮醇的大量积累(luo等，2008)。

4、高温影响花色素苷合成的研究在苹果(lin-wang k et al,2011)和葡萄(mori ket al,2007；mori k et al,2005)中均有报道，而高温对茄子果色的影响却未见报道，因此探究高温对smmyb12基因表达的影响及smmyb12基因在果色形成中的调控作用，对选育高温下果皮着色好的茄子新品种有至关重要的意义。

技术实现思路

1、鉴于上述问题，根据本发明的一个目的，提供一种从茄子果皮中获得的转录因子smmyb12，其最大阅读框(orf)序列如由seq id no:1表示。

2、根据本发明的一个具体实施方式，所述转录因子smmyb12的orf大小为1011bp，其编码336个氨基酸，具有r2和r3两个保守结构域。这说明smmyb12属于r2r3-myb基因家族。

3、进一步地，上述smmyb12基因编码的氨基酸序列由seq id no:2表示。

4、所述转录因子smmyb12在果实不同发育时期的果皮中都有表达。根据本发明的又一个具体实施方式，以18s rrna为内参基因，经实时荧光定量表达分析，所述smmyb12基因在果实不同发育时期的果皮中都有表达，特别是在35℃以上温度处理下的表达量提高。具体地，smmyb12基因在35℃高温(ht)处理下的表达量显著高于25℃对照(ck)下的表达量(如图2所示)。

5、根据本发明的另一方面，还提供所述转录因子smmyb12在调控茄子果皮类黄酮含量中的应用。其中，所述应用包括将所述转录因子smmyb12基因与植物表达载体(例如pcambia1302)正向相连后得到重组质粒，例如pcambia1302-smmyb12，将所述重组质粒(例如pcambia1302-smmyb12)转化农杆菌菌株(例如可为gv3101)，经农杆菌介导法转化茄子后，茄子果皮中类黄酮含量升高。

6、根据本发明的又一方面，提供上述转录因子smmyb12的载体。

7、根据本发明的另一方面，提供上述转录因子smmyb12的宿主细胞。

8、根据本发明的又一方面，提供上述转录因子smmyb12编码的蛋白质，其氨基酸序列由seq id no:2表示。

9、本发明的转录因子smmyb12可使茄子果皮的类黄酮含量明显升高，使得果皮颜色变浅。这有助于进一步了解茄子果皮着色机理，从而可利用分子手段来调控茄子果皮着色、选育着色更好的茄子新品种。

技术特征：

1.一种从茄子中克隆得到的转录因子smmyb12，其最大阅读框序列由seq id no:1表示。

2.根据权利要求1所述的转录因子smmyb12，其编码336个氨基酸，具有2个高度保守的myb结构域r2和r3。

3.根据权利要求1所述的转录因子smmyb12，所述转录因子smmyb12编码的氨基酸序列由seq id no:2表示。

4.根据权利要求1所述的转录因子smmyb12，所述转录因子smmyb12基因在果实不同发育时期的果皮中都有表达。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的转录因子smmyb12在调控茄子果皮类黄酮含量中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其中，所述应用包括：

7.根据权利要求6所述的应用，其中，所述植物表达载体为pcambia1302，农杆菌菌株为gv3101。

8.根据权利要求1至4中任意一项所述的转录因子smmyb12的载体。

9.根据权利要求1至4中任意一项所述的转录因子smmyb12的宿主细胞。

10.根据权利要求1至4中任意一项所述的转录因子smmyb12编码的蛋白质，其氨基酸序列由seq id no:2表示。

技术总结
本发明涉及一种从茄子中克隆得到的转录因子SmMYB12，及其在调控茄子果皮类黄酮含量中的应用和蛋白质。所述转录因子SmMYB12的最大阅读框序列由SEQ ID NO.1表示，其编码的氨基酸序列由SEQ ID NO.2表示。采用农杆菌介导的方法转化茄子，结果证实转基因茄子植株与非转化植株相比，类黄酮含量明显升高，使得果皮颜色变浅。本发明有助于进一步了解茄子果皮着色机理，从而可利用分子手段来调控茄子果皮着色、选育着色更好的茄子新品种。

技术研发人员：吕玲玲,李立云,窦雯雯,皮建辉
受保护的技术使用者：怀化学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14