鉴别副干酪乳杆菌的引物探针、试剂盒及方法与流程

本发明涉及生物，具体涉及用于鉴别副干酪乳杆菌的引物探针、试剂盒及方法。

背景技术：

1、由于微生物具有生长周期短、菌种改造容易等优势，微生物资源的开发和利用是当今研究的热点。乳酸菌是一类利用可发酵性糖并产生大量乳酸的微生物，其种类繁多，在自然界中分布广泛，绝大多数对人、畜安全无害，有保健和医疗功效，还具有改善食品风味、提高食品营养价值、抗菌防腐等作用，受到了国内外研究者的青睐。近年来，乳酸菌在食品、轻工、医药、饲料等领域的应用比重大幅增加，新型乳酸发酵食品及饮料、乳酸菌类防腐剂、乳酸菌制剂、乳酸菌类益生素、乳酸菌类饲料添加剂等层出不穷，在提高人们生活质量、促进人们身体健康的同时，也创造了巨大的经济效益，据统计，仅以乳杆菌作为发酵菌的食品工业所创造的经济价值就占全球发酵类食品的20％。由此可见，乳酸菌作为最重要的工业微生物，具有不可取代的优先研发地位。

2、副干酪乳杆菌(lactobacillus.paracasei)属于乳杆菌属(lactobacillus)，广泛存在于奶酪、泡菜等发酵食品，以及人体的口腔及肠道中，还有少量报道表明可从一些酒类如低度清酒和白兰地中分离得到该菌种。近年来人们广泛开展了对副干酪乳杆菌的定性、筛选、代谢、生理学等方面的研究，大量资料表明，副干酪乳杆菌适合多方面的应用，在生产生活及医药保健等方面的应用具有广阔的市场前景。但是目前对于副干酪乳杆菌的鉴别仍旧缺乏快速、准确、有效的鉴别方法。

技术实现思路

1、本发明主要目的在于提供鉴别副干酪乳杆菌的引物探针、试剂盒及方法。本发明筛选得到了一条可特异性鉴别副干酪乳杆菌的基因片段，如seq id no.1所示。采用本发明所述引物探针、试剂盒对副干酪乳杆菌进行鉴别特异性强，稳定性高。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、本发明第一方面提供seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列在鉴别副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)中的应用。seq id no.2所示核苷酸序列为部分seq idno.1所示序列。

4、本发明第二方面提供鉴别副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)的引物探针，所述引物探针根据seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列设计得到。

5、进一步地，所述引物探针包括以下引物对：

6、1145-s-f：5’-gcaggatgctgattgttagcag-3’；

7、1145-s-r：5’-ctccgaccaaagcgactatgac-3。

8、本发明第三方面提供鉴别副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)的试剂盒，所述试剂盒包括以下所述引物探针：

9、所述引物探针能够扩增seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列的全部或部分。

10、本发明第四方面提供鉴别副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)的方法，所述方法包括以下步骤：提取待测样品基因组dna；以提取得到的基因组dna为模板，采用根据seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列设计得到的引物探针进行pcr扩增；将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳即得；所述引物探针能够扩增seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序的全部或部分。

11、与现有技术相比，本发明具有以下优势：

12、本发明筛选得到了一条可特异性鉴别副干酪乳杆菌的如seq id no.1所示的基因片段，该基因片段的序列已上传genbank数据库，接收序列号为op681785。以seq id no.1所示序列为模板设计引物探针，可快速、准确地鉴别副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)。本发明所述引物探针特异性强、灵敏度高、稳定性高。

13、本发明所述引物探针、试剂盒产品及方法能够适用于相对复杂的环境中鉴别副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)。所述引物探针、试剂盒产品在生产生活及医药保健等方面的应用具有广阔的市场前景。

技术特征：

1.seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列在鉴别副干酪乳杆菌中的应用。

2.鉴别副干酪乳杆菌的引物探针，其特征在于，所述引物探针根据seq id no.1或seqid no.2所示核苷酸序列设计得到。

3.根据权利要求2所述的引物探针，其特征在于，所述引物探针能够扩增seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列的全部或部分。

4.根据权利要求2或3所述的引物探针，其特征在于，所述引物探针包括以下引物对：

5.鉴别副干酪乳杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下所述引物探针：

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，包括以下引物探针：

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括基因组提取试剂和pcr扩增试剂；

8.鉴别副干酪乳杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：提取待测样品基因组dna；以提取得到的基因组dna为模板，采用根据seq id no.1或seq id no.2所示核苷酸序列设计得到的引物探针进行pcr扩增；将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳即得；所述引物探针能够扩增seq id no.1或seq idno.2所示核苷酸序的全部或部分。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，提取待测样品基因组dna的方法为：收集待测样品中菌体，向收集的菌体中依次加入100μl碱裂解液ⅰ、溶菌酶和rnase a酶，振匀；加入碱裂解液ⅱ，混合均匀，进行冰浴；冰浴后加入碱裂解液ⅲ，混匀后进行冰浴，离心取上清液，加入苯酚、氯仿和异戊醇，混匀，离心后取上清液加入无水乙醇，混合均匀；静置，离心，干燥；加入乙醇溶液，混匀后离心，干燥沉淀；用含有rnase a酶1×te溶液重悬，即得；

10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，pcr反应体系为中，基因组浓度为210μg·l-1、引物浓度为21μmol·l-1、mg2+浓度为1.50mmol·l-1；

技术总结
本发明涉及生物技术领域，具体涉及用于快速鉴别副干酪乳杆菌的引物探针、试剂盒及方法。所述引物探针根据SEQ ID NO.1所示核苷酸序列设计得到。本发明所述引物探针、试剂盒产品可快速检测产品中是否含副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)，检测结果准确度高，稳定性强。本发明所述引物探针特异性强、灵敏度高、稳定性高。

技术研发人员：于伟东,韩仁皓,侯少阳,陆世海,杨凯,薛冰,张大虎,艾庆蕊,张东立,张瑞红,石亚新
受保护的技术使用者：山东大树欧亚天然调味品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12