基于识别不同抗原决定簇的马铃薯Y病毒单克隆抗体的组合及其应用

本发明涉及生物，具体涉及基于识别不同抗原决定簇的马铃薯y病毒单克隆抗体的组合及其应用。

背景技术：

1、马铃薯y病毒(potato virus y，pvy)是马铃薯y病毒属(potyvirus)的代表种，主要侵染马铃薯、烟草、辣椒等茄科作物，严重影响作物产量和品质。pvy在马铃薯上引起花叶、叶脉坏死、植株矮化、薯块坏死环斑等症状，在烟草上引起斑驳、花叶和叶脉坏死等症状，发生严重时可导致作物减产80％。pvy可由蚜虫以非持久性方式传播，也可通过汁液摩擦传播，在马铃薯上还可通过种薯传播。及时准确地鉴定pvy，有助于了解pvy发生情况，为pvy的监测预警和综合防控提供理论依据。

2、漏检或错检可导致检测结果错误，不利于pvy的有效防控，严重危害作物的安全生产。pvy商业化单克隆抗体mab1128、mab1129和mab1130可识别衣壳蛋白(coat protein，cp)的抗原决定簇25nlnkek30、16rpeqgsiqsnp26和5idaggs10。但是，有许多pvy分离物中不包含这3个抗原决定簇，因此，利用这3个单抗进行检测会产生漏检现象。pvy多克隆抗体与马铃薯y病毒属中其它的病毒有交叉反应，因此，利用多克隆抗体进行检测会发生错检现象。

3、筛选能识别新的抗原决定簇的pvy单克隆抗体，明确抗原决定簇的保守性和特异性，进而将其组合实现的病毒的精准检测，防止错检、漏检现象的发生，是保障马铃薯、辣椒等重要作物安全生产的关键。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种能够检测所有或绝大多数马铃薯y病毒分离物的单克隆抗体组合及其应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一方面，提供一批检测马铃薯y病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体为单克隆抗体n1、m1、m2、m3和c1中的至少一种；

4、所述单克隆抗体n1，其包含氨基酸序列如seq id no:1-3所示的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，和氨基酸序列如seq id no:4-6所示的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3；

5、所述单克隆抗体m1，其包含氨基酸序列如seq id no:7-9所示的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，和氨基酸序列如seq id no:10-12所示的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3；

6、所述单克隆抗体m2，其包含氨基酸序列如seq id no:13-15所示的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，和氨基酸序列如seq id no:16-18所示的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3；

7、所述单克隆抗体m3，其包含氨基酸序列如seq id no:19-21所示的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，和氨基酸序列如seq id no:22-24所示的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3；

8、所述单克隆抗体c1，其包含氨基酸序列如seq id no:25-27所示的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，和氨基酸序列如seq id no:28-30所示的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3。

9、进一步的，所述单克隆抗体n1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:31所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:32所示；所述单克隆抗体m1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:33所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:34所示；所述单克隆抗体m2的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:35所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq idno:36所示；所述单克隆抗体m3的重链可变区的氨基酸序列如seq idno:37所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:38所示；所述单克隆抗体c1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:39所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:40所示。

10、进一步的，所述单克隆抗体n1的重链的氨基酸序列如seq id no:41所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:42所示；所述单克隆抗体m1的重链的氨基酸序列如seq idno:43所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:44所示；所述单克隆抗体m2的重链的氨基酸序列如seq id no:45所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:46所示；所述单克隆抗体m3的重链的氨基酸序列如seq id no:47所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:48所示；所述单克隆抗体c1的重链的氨基酸序列如seq id no:49所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:50所示。

11、优选的，所述单克隆抗体为如下(1)-(3)任一单克隆抗体组合：

12、(1)单克隆抗体m1和单克隆抗体m2的组合；

13、(2)单克隆抗体m1和单克隆抗体c1的组合；

14、(3)单克隆抗体m2和单克隆抗体c1的组合。

15、本发明的第二方面，提供单克隆抗体的编码基因，包括：

16、seq id no:51和seq id no:52所示的分别编码单克隆抗体n1重链和轻链的核苷酸序列；

17、seq id no:53和seq id no:54所示的分别编码单克隆抗体m1重链和轻链的核苷酸序列；

18、seq id no:55和seq id no:56所示的分别编码单克隆抗体m2重链和轻链的核苷酸序列；

19、seq id no:57和seq id no:58所示的分别编码单克隆抗体m3重链和轻链的核苷酸序列；

20、seq id no:59和seq id no:60所示的分别编码单克隆抗体c1重链和轻链的核苷酸序列。

21、本发明的第三方面，提供上述单克隆抗体在如下(1)或(2)中的应用：

22、(1)检测马铃薯y病毒；

23、(2)制备检测马铃薯y病毒的产品。

24、优选的，所述检测马铃薯y病毒的产品包括但不限于：elisa检测试剂盒、westernblot检测试剂盒、胶体金检测试剂盒和化学发光免疫分析试剂盒等。

25、本发明的第四方面，提供一种检测马铃薯y病毒的elisa试剂盒，所述elisa试剂盒中含有上述单克隆抗体。

26、本发明的有益效果：

27、本发明获得的单克隆抗体n1、m1、m2、m3和c1及其组合能够识别所有或绝大多数已报道的pvy分离物，降低了漏检的可能性；且这5个单克隆抗体不与同属的其它病毒以及不同属的病毒反应，降低了错检的可能性。因此，本发明的单克隆抗体及其组合可实现pvy的精准检测。

技术特征：

1.一种检测马铃薯y病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为单克隆抗体n1、m1、m2、m3和c1中的至少一种；

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体n1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:31所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:32所示；

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体n1的重链的氨基酸序列如seq id no:41所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:42所示；

4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为如下(1)-(3)任一单克隆抗体组合：

5.权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体的编码基因。

6.根据权利要求5所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因包括：

7.权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体在如下(1)或(2)中的应用：

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测马铃薯y病毒的产品包括：elisa检测试剂盒、western blot检测试剂盒、胶体金检测试剂盒和化学发光免疫分析试剂盒。

9.一种检测检测马铃薯y病毒的elisa试剂盒，其特征在于，所述elisa试剂盒中含有权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体。

技术总结
本发明公开了基于识别不同抗原决定簇的马铃薯Y病毒单克隆抗体的组合及其应用，属于生物技术领域。本发明获得的单克隆抗体N1、M1、M2、M3和C1具有特异的CDR区，与现有报道的单克隆抗体存在显著差异；这5个单克隆抗体及其组合能够识别所有或绝大多数已报道的PVY分离物，降低了漏检的可能性；且这5个单克隆抗体不与同属的其它病毒以及不同属的病毒反应，降低了错检的可能性。因此，本发明的单克隆抗体及其组合可实现PVY的精准检测。

技术研发人员：李向东,闫志勇,赵翠玲,朱青,牟修岐,田延平,耿超
受保护的技术使用者：山东农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13