与Stevens-Johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症相关的环状RNA标志物及其应用

本发明涉及生物医药，特别是涉及与stevens-johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症相关的环状rna标志物及其应用。

背景技术：

1、stevens-johnson综合征(sjs)和中毒性表皮坏死松解症(ten)是皮肤科急症，其特征是广泛的表皮坏死松解症和脱落，主要的组织学特征是广泛的角质形成细胞凋亡。sjs/ten是一种由主要由药物诱导的t细胞介导的iv型超敏反应。临床表现为面部和躯干、四肢出现疼痛性红斑、大疱和糜烂，几乎所有sjs/ten患者都会出现眼部、口腔和生殖器的黏膜受累，nikolsky征呈阳性，皮肤受累前可出现发烧、不适、喉咙痛和咳嗽等前驱症状。它发病率较低，一旦发生，却有极高的死亡率，正是因为它的严重性，所以早期诊断、评估预后、及早干预对其至关重要。

2、由巴斯图吉-加林(bastuji-garin等，2000)提出的scorten评分是一种评估多个临床参数的评分系统，已成为评估ten严重程度的标准。目前有关sjs/ten的发病机制未完全阐明，主要存在以下几种观点：药物特异性t细胞介导的细胞毒性、与hla和非hla基因的遗传联系、tcr限制和细胞毒性机制，其最终是从pbmc中迁移至皮肤的活化的细胞毒性t细胞通过产生各类细胞毒信号导致角质形成细胞凋亡。

3、外周血单个核细胞(pbmcs)由血液循环中的淋巴细胞(t、b淋巴细胞)、nk细胞、单核细胞和树突状细胞组成。这些细胞构成免疫系统的重要组成部分，许多免疫细胞可以从从血液循环迁移到皮肤。在sjs/ten患者的皮损、水疱液/细胞、外周血单核细胞或血浆中，许多负责运输、增殖和激活t细胞和其他免疫细胞(nk细胞)的细胞因子被发现升高，同时在sjs/ten患者血清、皮损中均可以检测到颗粒溶素、穿孔素/颗粒酶b、fas/fas配体、细胞因子/趋化因子等细胞毒信号。此外，sjs患者的pbmc中t细胞会迁移至皮肤活化从而产生一系列细胞毒信号介导皮损处的播散性角质形成细胞死亡。综上表明pbmcs与sjs/ten的发病机制密切相关，但其具体发病机制仍不清楚。

4、近年来，mirna作为一种非编码rna已阐明在sjs/ten发病机制中的作用并被研究用于作为sjs/ten潜在诊断标志物。有报道显示mirna在sjs/ten的皮肤、血清中异常表达。更重要的是allergy及eur分别发现mir-18a-5p、mir-124上调可作为ten疾病评估标志物。环状rna(circrna)也是一类非编码(nc)rna分子，它们形成共价闭合的连续环，没有5′-cap和3′-polya尾。由于circrna 的特殊环结构，它们可以稳定地存在于真核生物中。micrornas(mirnas)是另一类小的ncrnas，参与细胞发育、细胞分化和细胞周期调控。mirna可以调控pbmc中细胞分泌炎性介质的表达，而circrna重要功能是具有mirna海绵活性，它们能够结合mirna，阻止它们与其典型的mrna靶基因结合从而发挥作用。由此推测circrna可能参与sjs/ten的发病。此外有报道发现银屑病中circ_0075932过表达的脂肪细胞释放的外泌体对皮肤角质形成细胞的炎症和凋亡具有显著促进作用。以上为circrna在sjs/ten发病机制中的潜在作用奠定基础。但有关于circrna在sjs/ten发病机制中的潜在功能却未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种与stevens-johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症相关的环状rna标志物及其应用，以分析sjs/ten患者和健康个体的pbmc之间的差异circrna表达谱并分析其在临床中的价值。

2、本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

3、本发明提供了环状rna标志物在制备stevens-johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症检测试剂盒中的应用，所述环状rna标志物的核苷酸序列如seq idno:1所示。

4、有益效果：

5、本发明通过检测来自ten患者pbmc的11584个circrna和来自健康人pbmc的11579个circrna。不同类型的circrna(antisense-circrna，exonic-circrna，intergenic-circrna,intronic-circrna,sense-overlapping-circrna)的分布在ten和健康人pbmc之间几乎相似。使用散点图评估两组之间circrna表达的变化，并通过火山图显示具有统计学显着性的差异表达的circrna。分层聚类显示两组之间可区分的circrna表达模式。因此，与健康人pbmc相比，发现总共134个circrna在ten患者pbmc中差异表达(pvalue<0.05and|log2fc|>1)，其中62个circrna被上调，72个circrna被下调。预测靶基因的go分析主要集中在三个方面，包括生物过程，分子功能和细胞成分。大多数这些靶基因在结合、细胞内以及细胞过程中富集。根据kegg通路分析，它们主要涉及一系列生物过程，如natural killercell mediated cytotoxicity、th17 cell differentiation、th1 and th2 celldifferentiation、c-type lectin receptor signaling pathway。

6、验证差异表达的circrna

7、选择明显差异的hsa_circ_0083619进行qrt-pcr进一步验证。结果显示hsa_circ_0083619表达较正常组显著下调，这与rna-seq数据一致。

8、差异表达的circrna水平与临床特征的相关性分析

9、circrna与剥脱面积

10、此外，本发明研究了上述显著差异的hsa_circ_0083619与sjs/ten临床症状的相关性。pbmc中hsa_circ_0083619(r＝-0.576，p＝0.039)与表皮剥脱面积显著相关。

11、circrna与scorten

12、此外，为评估hsa_circ_0083619与sjs/ten严重程度之间的相关性，将hsa_circ_0083619与scorten评分进行相关性分析，结果显示：pbmc中hsa_circ_0083619(r＝-0.581，0.037)与scorten评分显著相关。

13、因此，本发明首次提出一种与stevens-johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症相关的环状rna标志物，该环状rna标志物能够用于制备stevens-johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症检测试剂盒，能够分析sjs/ten患者和健康个体的pbmc之间的差异circrna表达谱并分析其在临床中的价值。

技术特征：

1.环状rna标志物在制备stevens-johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述环状rna标志物的核苷酸序列如seq id no:1所示。

技术总结
本发明提供了一种与Stevens‑Johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症相关的环状RNA标志物及其应用，该环状RNA标志物能够用于制备Stevens‑Johnson综合征/中毒性表皮坏死松解症检测试剂盒中的应用，从而分析SJS/TEN患者和健康个体的PBMC之间的差异circRNA表达谱并分析其在临床中的价值。

技术研发人员：刘藕根,张志彬,黄江霞,吕盼,杨倩茹
受保护的技术使用者：南昌大学第二附属医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11