一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒

本发明涉及一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒，属于生物模型的构建。

背景技术：

1、肿瘤动物模型是进行肿瘤相关机制和药物筛选研究的重要平台。目前，临床前肿瘤动物模型多采用肿瘤细胞系悬液建模的方法，它具有肿瘤细胞系易获得和实验易重复等优点。但利用肿瘤细胞系建立的肿瘤模型存在诸多缺陷。肿瘤细胞在体外建系的过程脱离了自然的肿瘤微环境，导致其基因发生改变；体外培养过程中选择性压力以及经过消化酶处理，破坏肿瘤组织及细胞异质性与原结构；细胞系所成的肿瘤缺乏原发瘤相关微环境组份。最终导致肿瘤生物学行为和自然属性不可逆性改变，严重阻碍人类对肿瘤机制及治疗应答的研究，它已成为影响肝脏癌症疗效改善的瓶颈，亟待解决。

2、患者来源移植瘤模型(patient derived xenograft，pdx)是将患者的肿瘤组织接种到免疫缺陷小鼠皮下构建而成。因其部分保留了患者肿瘤组织的病理组织学和基因组学特征，保留肿瘤的特异基因、分子及其组织学异质性、还原原发瘤侵袭转移及药敏等生物学特性，目前成为肿瘤生物学研究的首选模型。然而既往传统的pdx模型建立有赖于手术标本的获得，既往报道成瘤率在10％-50％不等。如患者为晚期肿瘤或转移肿瘤无法进行手术治疗、无法获得手术标本，则不能建立pdx模型，在科研方面失去了宝贵的研究样本，在临床方面使患者失去了利用pdx筛选敏感药物的机会。

技术实现思路

1、本发明的目的是：针对目前构建pdx模型存在成瘤率不高等问题与缺陷，本发明提出一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒，通过优化冲洗液、保存液和孵育液，拓宽了pdx的建立来源，为肿瘤临床治疗及研究提供一个较理想的临床前实验动物平台，从而为改善患者的总体预后提供有力支持。

2、为了实现上述目的，本发明提供了一种组合试剂在制备用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒中的应用，所述组合试剂包括：用于冲洗组织样本的洗涤液，用于保存冲洗后组织样本的保存液，以及用于孵育组织样本的孵育液，其中：

3、所述洗涤液为每1000ml含有4mg多粘菌素e，100g氨苄青霉素，和50g链霉素的生理盐水；

4、所述保存液的组成为：磷酸氢二钠16.5mmol/l，磷酸二氢钾1.65mmol/l，枸橼酸钾25mmol/l，枸橼酸钠25mmol/l，腺嘌呤核苷5mmol/l，1,6-二磷酸果糖100g/l，牛血清白蛋白bsa 100g/l，蛋白酶抑制剂pepstantin 1mg/l，多粘菌素e 4mg/l，氨苄青霉素100g/l，链霉素50g/l，以及余量的水；

5、所述孵育液每1000ml的组成为：dmem培养液500ml，matrigel胶500ml，牛血清白蛋白bsa 100g/l，表皮生长因子egf 20μg/l，成纤维细胞生长因子bfgf 20μg/l，多粘菌素e2mg/l，氨苄青霉素50g/l，以及链霉素25g/l；

6、所述组织样本为内镜活检消化道肿瘤组织样本，所述消化道肿瘤为结肠癌、胃癌或食管癌

7、本发明还提供了一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒，该试剂盒至少包括：用于冲洗组织样本的洗涤液，用于保存冲洗后组织样本的保存液，以及用于孵育组织样本的孵育液，其中：

8、所述洗涤液为每1000ml含有4mg多粘菌素e，100g氨苄青霉素，和50g链霉素的生理盐水；

9、所述保存液的组成为：磷酸氢二钠16.5mmol/l，磷酸二氢钾1.65mmol/l，枸橼酸钾25mmol/l，枸橼酸钠25mmol/l，腺嘌呤核苷5mmol/l，1,6-二磷酸果糖100g/l，牛血清白蛋白(bsa)100g/l，蛋白酶抑制剂(pepstantin)1mg/l，多粘菌素e 4mg/l，氨苄青霉素100g/l，链霉素50g/l，以及余量的水；

10、所述孵育液每1000ml的组成为：dmem培养液500ml，matrigel胶500ml，牛血清白蛋白bsa 100g/l，表皮生长因子egf 20μg/l，成纤维细胞生长因子bfgf 20μg/l，多粘菌素e2mg/l，氨苄青霉素50g/l，以及链霉素25g/l；

11、所述组织样本为内镜活检消化道肿瘤组织样本，所述消化道肿瘤为结肠癌、胃癌或食管癌。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

13、本发明提供的试剂盒用于内镜来源的标本构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型，该试剂盒至少包括洗涤液、保存液和孵育液，本发明方案中首先优化了冲洗液及保存液，在保存液中加入强缓冲液以保证保存环境的ph值，加入了高浓度的青链霉素和多粘菌素e，抑制细菌污染；其次，优化了孵育液，将孵育液中加入egf、bfgf增强了肿瘤块的活性，加入了多粘菌素e的孵育液可以增强对g-菌的感染；本发明通过对消化液、保存液和孵育液的优化，解决了内镜标本总量小、污染多、成瘤率极低的缺陷，拓宽了消化道肿瘤pdx的建立来源，具有实际应用价值和推广价值。

技术特征：

1.一种组合试剂在制备用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒中的应用，其特征在于，所述组合试剂包括：用于冲洗组织样本的洗涤液，用于保存冲洗后组织样本的保存液，以及用于孵育组织样本的孵育液，其中：

2.一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒，其特征在于，该试剂盒至少包括：用于冲洗组织样本的洗涤液，用于保存冲洗后组织样本的保存液，以及用于孵育组织样本的孵育液，其中：

技术总结
本发明公开了一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒。本发明提供的试剂盒用于内镜来源的标本构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型，该试剂盒至少包括洗涤液、保存液和孵育液，在保存液中加入强缓冲液以保证保存环境的PH值，加入了高浓度的青链霉素和多粘菌素E，抑制细菌污染；将孵育液中加入EGF、bFGF增强了肿瘤块的活性，加入了多粘菌素E的孵育液可以增强对G‑菌的感染；本发明通过对消化液、保存液和孵育液的优化，解决了内镜标本总量小、污染多、成瘤率极低的缺陷，拓宽了消化道肿瘤PDX的建立来源，为肿瘤临床治疗及研究提供一个较理想的临床前实验动物平台，从而为改善患者的总体预后提供有力支持。

技术研发人员：付佩尧,诸炎,耿子寒,胡晓元,钟芸诗,马丽黎,李全林,周平红
受保护的技术使用者：复旦大学附属中山医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13