一种用于检测鹅星状病毒引起痛风的引物和试剂盒

本发明属于生物，具体涉及一种用于检测鹅星状病毒引起痛风的引物、试剂盒。

背景技术：

1、虽然阻断炎症是缓解人类痛风病症状的有效方法，但感染鹅星状病毒(gooseastrovirus，gastv)引起雏鹅痛风(一种最近出现的疾病)的治疗和预防仍不清楚。

2、星状病毒是属于星形病毒科的小型、无包膜、单股正链rna病毒。星状病毒的宿主范围很广，主要症状是腹泻或肠道疾病。近年来，痛风是鹅源性鹅星状病毒(gastv)感染的主要症状，已在中国的一些鹅场出现，并给中国鹅业造成了持续的经济损失。中国研究人员进行了多角度流行病学调查以评估病毒。总结这些数据，实验性gastv感染并未在所有感染的鹅中产生痛风症状，但痛风发病率相对较高。与其他病毒和饮食因素的共同感染可以影响痛风症状的发展。然而，在消除这些因素后，一些结果仍然不符合科赫定律。一些学者认为，疾病进展差异的原因在于一些重要宿主基因的多态性。然而，遗传多态性往往伴随着遗传背景、环境、饮食和其他因素的差异。在集中饲养的鹅中，遗传多态性对gastv诱发的痛风几乎没有影响。

3、本发明认为，gastv成功感染宿主后引发痛风的临界点就像跷跷板的支点。当支点向一侧倾斜时，就会出现相应的临床症状。这个支点可以是一个或多个重要的基因或/和信号通路。为了探索gastv感染后不同临床症状的支点，对感染雏鹅肾脏组织中的mrna进行了全面分析。使用转录组测序技术，结合代谢网络途径分析，广泛研究gastv感染介导的宿主基因重编程。

4、在研究中，获得了一些新的、出乎意料的发现。

5、在基因层面上，针对鹅星状病毒对雏鹅痛风的治疗和预防大多集中在病毒的检测，如下：

6、cn108956985a，一种检测新型鹅星状病毒抗体的间接elisa检测试剂盒及应用；

7、cn111088402a，一种新型鹅星状病毒检测引物组及试剂盒；

8、cn112941240b，检测鹅星状病毒和鹅嵌杯病毒的引物对、试剂盒及方法；

9、cn110241259a，一种快速区分鹅1型星状病毒与鹅2型星状病毒的hrm检测方法及其引物；

10、cn109971885a，新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重荧光定量pcr检测引物、试剂盒及应用；

11、cn108384899a，一种检测新型鹅星状病毒的荧光定量pcr试剂盒及应用。

12、对于鹅星状病毒导致的雏鹅痛风的预测方面并未有其他文献提及。

13、如果将检索范围扩大到人的痛风预测，可得到如下对比文件：

14、cn109182489a，痛风差异表达基因检测与急性发作预警试剂盒；

15、该方案有如下记载：

16、一种痛风差异表达基因检测与急性发作预警试剂盒，包括：与2种内参照基因actb、gapdh及6种痛风性关节炎急性发作期差异表达基因il1b、p2rx7、cxcl8、tlr2、tlr4、nlrp3的cdna互补配对的特异性引物探针seq id no.1-93。

17、在本案的研究中，我们发现了一个重合基因：tlr2。

18、但是需要明确的是，人的痛风的发生并非由鹅星状病毒或星状病毒导致的，现有技术并未有任何资料记载过，在tlr2在人的痛风和星状病毒导致的痛风之间的关联性。即在展开本案研究之前，我们发现人的大部分的目标基因并不能在鹅的基因序列中表现为感染前后的高表达或表达抑制。

19、本案解决的技术问题是：如何预测雏鹅个体对于鹅星状病毒导致的痛风的可能性。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种用于检测鹅星状病毒引起痛风的引物，该引物加入到试剂盒中后能够预测鹅的对于鹅星状病毒导致的痛风的可能性，为物种筛选提出了一种可行的方向。

2、同时，本发明还公开了一种试剂盒。

3、本发明的技术方案为：

4、一种用于检测鹅星状病毒引起痛风的引物，所述引物为如下引物组中的任一一组：

5、fgg基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：1和序列seq id no：2所示；

6、pram1基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：3和序列seq id no：4所示；

7、ccl20基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：5和序列seq id no：6所示；

8、tlr2基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：7和序列seq id no：8所示；

9、slc46a2基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：9和序列seq id no：10所示；

10、socs1基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：11和序列seq id no：12所示；

11、loc125179680基因引物组：上游引物和下游引物如序列seq id no：13和序列seqid no：14所示。

12、在本发明中，涉及的相关引物序列可见下表1所示：

13、表1引物表

14、

15、

16、其中，gapdh为内参基因，对应的引物序列seq id no：15和seq id no：16；

17、gastv—orf2为用于检测鹅星状病毒的引物，对应序列为seq id no：17和seq idno：18；

18、同时，本发明还公开了一种qrt-pcr试剂盒，含有如权上所述的引物。

19、在上述的qrt-pcr试剂盒中，所述试剂盒对应的qrt-pcr反应体系为：

20、水：6.2μl；

21、2×one step sybr green mix：10μl；

22、混合酶：1μl；

23、上游引物(10mm)：0.4μl；

24、下游引物(10mm)：0.4μl；

25、rna模板：2μl。

26、本发明的有益效果如下：

27、本发明研究发现，本发明所选择的引物对对应的靶标基因，在星状病毒引起痛风的样本中，这些靶标基因ct值小于对照组ct值，即靶标基因在痛风样本中高表达。

28、但在星状病毒感染且没有痛风症状的样本中，这些靶标基因ct值大于对照组ct值，即靶标基因在无症状感染星状病毒样本中低表达。

29、这为鹅的种群筛选提供了科学的指导意义。

技术特征：

1.一种用于检测鹅星状病毒引起痛风的引物，其特征在于，所述引物为如下引物组中的任一一组：

2.一种qrt-pcr试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1所述的引物。

3.根据权利要求2所述的qrt-pcr试剂盒，其特征在于，所述试剂盒对应的qrt-pcr反应体系为：

技术总结
本发明属于生物技术领域，公开了一种用于检测鹅星状病毒引起痛风的引物，所述引物为如下引物组中的任一一组：FGG基因引物组、PRAM1基因引物组、CCL20基因引物组、TLR2基因引物组、SLC46A2基因引物组、SOCS1基因引物组、LOC125179680基因引物组；同时，本发明还公开了一种试剂盒；该引物加入到试剂盒中后能够预测鹅的对于鹅星状病毒导致的痛风的可能性，为物种筛选提出了一种可行的方向。同时，本发明还公开了一种试剂盒。

技术研发人员：刘诚刚,李林林,向勇,廖明,翟颀,孙敏华,张俊勤,黄允真,董嘉文,邝瑞欢
受保护的技术使用者：广东省农业科学院动物卫生研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16