粘性生物样本的液化组合产品、核酸扩增体系、核酸检测体系、处理方法及应用与流程

本发明涉及医学样本处理及核酸提取检测，具体而言，涉及一种粘性生物样本的液化组合产品、核酸扩增体系、核酸检测体系、处理方法及应用。

背景技术：

1、随着荧光定量pcr以及多重pcr等技术在病原体检测领域的快速发展，通过痰液样本类型检测是否感染相应的病原体种类的需求日益增加。然而痰液样本具有粘度大、蛋白多、成分复杂的特点，包含粘蛋白和其他多种蛋白(如免疫蛋白)、多种酶类、脱落细胞、微生物及其他吸入杂质等，不便于直接检测，临床上痰液样本的检测需要先对痰液进行液化处理。

2、常见的痰液液化方法为氢氧化钠法、dtt(二硫苏糖醇)法以及蛋白酶法。氢氧化钠法是最常用的痰液液化方法，该方法比较简单，利用高浓度(通常至少为4wt％)的氢氧化钠溶液在60℃～80℃(也可在室温条件下)液化痰液，该方法用于核酸检测时，高浓度的强碱性环境易造成核酸损失。蛋白酶法的原理是利用蛋白酶消化痰液黏蛋白，该方法的酶解反应耗时较长，所需蛋白酶成本较高，且黏蛋白消化效率低。dtt(二硫苏糖醇)法是目前最常用的痰液液化方法，利用含巯基(-sh)的dtt断裂痰液中导致粘稠的主要成分粘蛋白，以pbs缓冲液(磷酸盐缓冲液)提供生理缓冲，通常还会加入乙醇等固定细胞；该方法耗时长，且所使用的dtt成本较高，且dtt稳定性差，需要在低温条件下保存，同时dtt存在一定的毒性，不适合临床上大批量处理痰液样本。此外，由于痰液样本粘度大，常规液化处理过程中易产生混合不均的问题。痰液样本中的核酸，尤其是rna极不稳定，通常在温室条件下数小时就被降解。然而在临床检测中，往往不能及时处理和检测痰液样本中的核酸，开发一种能够快速充分液化痰液，进一步还可以有效保护样本核酸的方法十分必要。目前已公开的关于痰液液化及核酸保护的发明较多。然而，这些方法普遍存在成分复杂、成本高、操作复杂、样本混匀及液化不充分等问题。

3、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、基于此，本发明的目的包括提供一种粘性生物样本的液化组合产品，该液化组合产品中的液化组分可以简单、快速、高效地液化粘性生物样本，还可以结合其中的保护组分对液化后的样本进行有效保存。采用该液化组合产品可以用于核酸扩增体系及核酸检测体系。前述液化组合产品还可用于粘性生物样本的免提取扩增、免提取检测。

2、在本发明的第一方面，提供一种粘性生物样本的液化组合产品，其包括a组分，还含有或不含有b组分；

3、所述a组分为包含下组各成分的水溶液i或该水溶液i的母液：乙酰半胱氨酸3％～15％(w/v)、氯化钠20mm～500mm、氯化钾50mm～120mm以及强碱；其中，以一元碱计，所述强碱在所述水溶液i中的浓度为50mm～1000mm；

4、所述b组分为柠檬酸或柠檬酸水溶液。

5、在本发明的第二方面，提供一种粘性生物样本的核酸扩增体系，其包括本发明第一方面所述粘性生物样本的液化组合产品，还包括核酸扩增试剂。

6、在本发明的第三方面，提供一种粘性生物样本的核酸检测体系，其包括本发明第一方面所述粘性生物样本的液化组合产品，还包括核酸检测试剂。

7、在本发明的第四方面，提供一种粘性生物样本的处理方法，其包括如下步骤：

8、采用水溶液i对粘性生物样本进行液化，制得液化处理物；

9、其中，所述水溶液i的组成如本发明第一方面中所定义。

10、在本发明的第五方面，提供：

11、本发明第一方面所述粘性生物样本的液化组合产品在粘性生物样本的液化中的应用，所述液化组合产品包括所述a组分，还含有或不含有所述b组分；或者，

12、本发明第一方面所述粘性生物样本的液化组合产品在粘性生物样本的保存中的应用，所述液化组合产品包括所述a组分和所述b组分；或者，

13、本发明第一方面所述粘性生物样本的液化组合产品，或本发明第二方面所述粘性生物样本的核酸扩增体系在粘性生物样本的免提取扩增中的应用，所述液化组合产品包括所述a组分，还含有或不含有所述b组分；或者，

14、本发明第一方面所述粘性生物样本的液化组合产品，或本发明第二方面所述粘性生物样本的核酸扩增体系，或本发明第三方面所述粘性生物样本的核酸检测体系在粘性生物样本的免提取检测中的应用，所述液化组合产品包括所述a组分，还含有或不含有所述b组分。

15、本发明提供的粘性生物样本的液化组合产品可通过一定比例及浓度的乙酰半胱氨酸与强碱使痰液进行液化，氯化钠和氯化钾则通过协调细胞膜内外离子平衡来对核酸起保护作用，可以在室温条件下实现对粘性生物样本的简单、快速、高效地液化，可以无需特殊的高温加热处理，液化所需时间短(比如≤15min，进一步比如≤10min)，进一步结合使用柠檬酸对液化产物进行处理，可以提高样本中核酸的稳定性，延长样本保存时间；本发明提供的液化组合产品能够较好地与核酸提取及扩增兼容；此外，本发明提供的液化组合产品还可以实现免提取扩增、免提取检测。

16、通过上述各组分的协同作用，可以使粘性生物样本在室温下快速地充分液化，可避免传统氢氧化钠法中加热产生气溶胶导致的样品污染问题，而且无需进行复杂的加热等操作步骤。经上述液化组合产品的a组分和b组分联合处理后的样本，其中的核酸能够稳定地长时间保存。还可以在不进行核酸提取的情况下，直接进行核酸扩增或直接进行核酸检测。

技术特征：

1.一种粘性生物样本的液化组合产品，其特征在于，包括a组分，还含有或不含有b组分；

2.根据权利要求1所述的液化组合产品，其特征在于，满足如下特征中的任一个或任意合适的组合：

3.根据权利要求2所述的液化组合产品，其特征在于，满足如下特征中的一个或多个：

4.根据权利要求1或2所述的液化组合产品，其特征在于，所述水溶液i包含如下成分：乙酰半胱氨酸4％～10％(w/v)、氯化钠150mm～250mm、氯化钾60mm～100mm以及无机强碱100mm～600mm，其中，所述无机强碱的浓度以一元碱计。

5.一种粘性生物样本的核酸扩增体系，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述粘性生物样本的液化组合产品，还包括核酸扩增试剂。

6.一种粘性生物样本的核酸检测体系，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述粘性生物样本的液化组合产品，还包括核酸检测试剂。

7.一种粘性生物样本的处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的处理方法，其特征在于，满足如下的特征中的一个或多个：

9.根据权利要求8所述的处理方法，其特征在于，满足如下的特征中的一个或多个：

10.根据权利要求7所述的处理方法，其特征在于，所述的处理方法还包括将所述液化处理物与b组分混合制得样本保存液；其中，所述b组分为柠檬酸或柠檬酸水溶液，柠檬酸在所述样本保存液中的浓度为1％～10％(w/v)。

11.根据权利要求10所述的处理方法，其特征在于，满足如下特征中的一个或多个：

12.根据权利要求7所述的处理方法，其特征在于，还包括如下步骤：使用核酸扩增剂对权利要求7～11任一项中获得的样品处理物中的目标核酸进行扩增或检测。

13.根据权利要求12所述的处理方法，其特征在于，满足如下的特征中的一个或多个：

14.权利要求1～4任一项所述粘性生物样本的液化组合产品在粘性生物样本的液化中的应用，所述液化组合产品包括所述a组分，还含有或不含有所述b组分；或者，

技术总结
本发明提供一种粘性生物样本的液化组合产品、核酸扩增体系、核酸检测体系、处理方法及应用。该液化组合产品包括a组分，还含有或不含b组分；a组分为包含下组各成分的水溶液I或该水溶液I的母液：乙酰半胱氨酸3％～15％(w/v)、氯化钠20mM～500mM、氯化钾50mM～120mM以及50～1000mM强碱，以一元碱计；b组分为柠檬酸或其水溶液。通过上述各组分的协同作用，该液化组合产品可以使粘性生物样本在室温下直接快速地充分液化，可避免因加热产生气溶胶导致的样品污染问题，而且无需进行加热等复杂步骤。经该液化组合产品处理后的样本，可稳定地保存核酸，还可实现免提取扩增、免提取检测。

技术研发人员：陈诗谣,邓中平,邓勇,刘佳,戴立忠
受保护的技术使用者：圣湘生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13