一种用于检测球形棕囊藻的核酸适体及其应用

本发明属于生物工程，特别地，涉及一种用于检测球形棕囊藻的核酸适体及其应用。

背景技术：

1、藻类是海洋初级生产者，是构成海洋生态环境的基础，可为浮游动物提供食物，但随着人类活动产生的富营养排放物增多，在沿海地区经常爆发赤潮，其中，球形棕囊藻就是引起赤潮的最常见藻类。球形棕囊藻引发的有害赤潮爆发，不仅影响海洋生物的存活和生长，降低海洋生物的繁殖能力，而且影响幼体的正常发育，给环境和渔业带来巨大危害。在我国，球形棕囊藻赤潮爆发的频率和范围日趋严重，并且造成的海洋生物大量死亡的事件时有发生，因此研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的检测技术，对于控制球形棕囊藻的危害极其重要。但是目前针对球形棕囊藻的的诊断方法主要是分子生物学检测方法等，包括pcr技术、巢式pcr技术、荧光定量pcr技术，elisa技术等。pcr技术检测结果精确可靠，但却存在操作繁琐、耗时长、仪器试剂昂贵等不足，无法满足现场快速准确检测诊断的要求。因此应着力发展操作便捷、成本低、耗时短、准确度高、可以在养殖场现场使用的球形棕囊藻快速检测技术和功能产品，这对于及早发现、确定病原，进而有的放矢地制定治疗方案来控制病原扩散、降低损失至关重要。

2、核酸适体是利用指数富集的配基系统进化技术(systematic evolution ofligands by exponential enrichment technology,selex)筛选出的能特异性识别目标物的核酸序列，能够与靶标(如小分子、肽、蛋白质、病毒、细胞等)特异性结合。近年来，由于核酸适体具有精准的特异性及高度的亲和力，受到了国内外多个领域的广泛关注，如疾病诊断与治疗、药物递送、食品安全检测和环境监测等。在环境检测方面，核酸适体广泛应用于环境治病微生物的检测。将核酸适体应用于球形棕囊藻的检测，有望实现该赤潮种类精准、快速且低成本的检测。因此核酸适体在环境监测、针对性防治等领域中具有广阔的应用前景。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于检测球形棕囊藻的核酸适体及其应用，以实现对球形棕囊藻的高灵敏、特异性检测水平。

2、根据本发明的一个方面，提供一种用于检测球形棕囊藻的核酸适体，核酸适体的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3、优选地，上述核苷酸序列被磷酸化、巯基化、甲基化、氨基化或同位素化。

4、优选地，如seq id no.1所示的核苷酸序列的二级结构如图1所示。

5、优选地，上述核苷酸序列具有功能基团，功能基团选自生物素标记物、发光标记物、酶标记物中的至少一种。

6、优选地，发光标记物选自羟基荧光素、异硫氰酸荧光素或羧基四甲基罗丹明中的至少一种。

7、根据本发明的另一个方面，提供上述用于检测球形棕囊藻的核酸适体在制备用于检测球形棕囊藻的产品中的应用，上述应用不包括在疾病诊断中的应用。

8、优选地，产品包括荧光分子探针，用于检测球形棕囊藻的核酸适体接有发光标记物。

9、根据本发明的另一个方面，提供一种用于检测球形棕囊藻的产品，包括上述用于检测球形棕囊藻的核酸适体。

10、优选地，上述用于检测球形棕囊藻的产品为分子探针和/或检测试剂盒。

11、与现有的蛋白类抗体相比，本发明通过selex技术筛选得到的核酸适体对球形棕囊藻具有更高的亲和力和特异性，而且还具有蛋白类抗体所不具备的特点，包括无免疫原性、制备周期短、重现性好、分子量小、便于体外化学合成、便于标记、易于对核酸适体的不同部位进行修饰和取代、序列稳定易于运输和保存等。采用基于本发明的核酸适体的快速检测方法对球形棕囊藻进行检测时，操作简单迅速、能够达到较高的准确率和灵敏度。可利用该核酸适体构建分子探针或检测试剂盒，并结合酶标仪、流式细胞仪、荧光显微镜等检测设备，实现球形棕囊藻的精确检测。这对于球形棕囊藻的快速诊断具有重要意义，在球形棕囊藻的检测领域有良好的应用前景。

技术特征：

1.一种用于检测球形棕囊藻的核酸适体，其特征在于，所述核酸适体的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.如权利要求1所述用于检测球形棕囊藻的核酸适体，其特征在于，所述核苷酸序列被磷酸化、巯基化、甲基化、氨基化或同位素化。

3.如权利要求1所述用于检测球形棕囊藻的核酸适体，其特征在于，所述如seq idno.1所示的核苷酸序列的二级结构如下所示：

4.如权利要求1～3任一项所述用于检测球形棕囊藻的核酸适体，其特征在于，所述核苷酸序列具有功能基团，所述功能基团选自生物素标记物、发光标记物、酶标记物中的至少一种。

5.如权利要求1～3任一项所述用于检测球形棕囊藻的核酸适体在制备用于检测球形棕囊藻的产品中的应用，所述应用不包括在疾病诊断中的应用。

6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述用于检测球形棕囊藻的产品包括荧光分子探针，所述用于检测球形棕囊藻的核酸适体接有发光标记物。

7.一种用于检测球形棕囊藻的产品，其特征在于，包括如权利要求1～3任一项所述用于检测球形棕囊藻的核酸适体。

8.如权利要求7所述产品，其特征在于，所述产品为分子探针和/或检测试剂盒。

技术总结
本发明提供一种用于检测球形棕囊藻的核酸适体及其应用，该用于检测球形棕囊藻的核酸适体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的核酸适体对球形棕囊藻特异性强、无免疫原性、制备周期短、重现性好、分子量小、便于体外化学合成、便于标记、易于对核酸适体的不同部位进行修饰和取代、序列稳定、易于运输和保存。采用本发明提供的核酸适体对球形棕囊藻进行检测时，操作简单迅速、能够达到较高的准确率和灵敏度。可利用该核酸适体构建分子探针或检测试剂盒，并结合酶标仪、流式细胞仪、荧光显微镜等检测设备，实现球形棕囊藻的精确检测。

技术研发人员：李鹏飞,余庆,元昌安,刘明珠,程远,韦红玲
受保护的技术使用者：广西科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12