一种检测猫病毒性鼻气管炎的免疫层析试纸条

本发明属于检测猫病毒性鼻气管炎，具体涉及一种检测猫病毒性鼻气管炎的免疫层析试纸条。

背景技术：

1、猫传染性鼻气管炎又称为猫鼻支，是一种以急性上呼吸道症状为特征的高度接触性传染病，具体症状包括：角膜结膜炎、上呼吸道感染和流产，但以打喷嚏、过度流涎、眼鼻分泌物增多等上呼吸道症状为主。猫鼻支的病原为猫疱疹病毒i型(fhv-1)，fhv-1属于疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科，水痘病毒属。

2、目前市场上缺乏猫病毒性鼻气管炎(疱疹病毒)快速诊断产品，因此研发具备自主知识产权，快速胶体金诊断产品，对于宠物疫病的防控具有巨大的经济、社会价值。为了填补猫病毒性鼻气管炎(疱疹病毒)快速诊断产品的市场空白，针对猫病毒性鼻气管炎(疱疹病毒)的诊断靶标蛋白，分析病毒性鼻气管炎(疱疹病毒)的结构特征，纯化蛋白抗原，制备单克隆抗体，进行抗体配对，研制猫病毒性鼻气管炎(疱疹病毒)快速诊断试纸条。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了提供一种准确和有效的检测猫猫病毒性鼻气管炎的方法。

2、本发明提供一种杂交瘤细胞对，所述杂交瘤细胞对包括第一杂交瘤细胞株h-7株和第二杂交瘤细胞株h-8株。

3、本发明提供上述杂交瘤细胞对在检测猫疱疹病毒i型抗原中的应用。

4、本发明提供一种检测猫疱疹病毒i型的抗体对，所述抗体对是单克隆抗体h-7株和h-8株，所述单克隆抗体h-7是由杂交瘤细胞h-7株分泌获得的；所述单克隆抗体h-8株是由杂交瘤细胞h-8株分泌获得的。

5、本发明提供上述抗体对在检测猫疱疹病毒i型抗原中的应用。

6、本发明提供一种检测猫疱疹病毒i型的试剂盒，所述试剂盒包括上述的抗体对。

7、6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括pvc底板、金标垫、样品垫和吸水垫。

8、进一步地限定，以pvc背板为支撑物，在其上分别贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸水垫，其中金标垫采用聚酯膜，经含有1％bsa和1％吐温-20的pbs处理后，将制备好的胶体金标记单克隆抗体h-7金标垫部分，完毕，37℃烘干2h，硝酸纤维膜上包被有两条线：分别为质控线和检测线，其中检测线包被物为单克隆抗体h-8株浓度为1.6mg/ml，质控线包被物为纯化的兔抗鼠抗体浓度为2.1mg/ml，然后用biodot划膜仪喷涂于硝酸纤维膜上，组装好后大板用切条机切成7-8mm的裸条备用。

9、进一步地限定，所述胶体金标记单克隆抗体h-7混合物的终浓度为10μg/ml。

10、进一步地限定，所述胶体金的制备方法如下：

11、(1)1％的氯化金水溶液1ml，加入99ml超纯水，配置成0.01％的haucl4溶液，加热至沸腾；

12、(2)加入1.5ml 1％柠檬酸三钠水溶液，继续搅拌加热沸腾2～5min，金黄色的氯金酸水溶液在2min内颜色发生迅速变化，由灰色变成黑色最后变成紫红色，继续煮沸20min得到稳定的胶体金溶液。

13、进一步地限定，所述抗体对与标记胶体金混合的方法如下：

14、(1)用0.2mol/l k2co3溶液调节胶体金溶液至ph8.0，加入单克隆抗体h-7，混合物的终浓度为10μg/ml；

15、(2)然后将抗体对的溶液10000rpm 4℃离心15min，弃上清，用复溶液溶解浓缩沉淀，复溶液浓缩比例为125μl/ml；

16、(3)将浓缩后的胶体金复合物喷涂于胶体金垫内，喷涂量为15μl/cm。

17、有益效果：随着当前宠物诊疗业的高速发展，基于免疫反应的猫疱疹病毒的诊断技术越来越得到重视，而单克隆抗体是诊断抗原的重要试剂，目前已经研发出具备中和作用的单克隆抗体但是缺乏研制猫疱疹病毒配对单抗的相关报道，而配对的单抗组可以形成检测抗原的三明治结构，是研制夹心法elisa和抗原胶体金试纸条的关键，为了研制检测抗原的猫疱疹病毒检测试纸条，拟采用双抗体夹心法，制备形成夹心配对的猫疱疹病毒单克隆抗体。

技术特征：

1.一种杂交瘤细胞对，其特征在于，所述杂交瘤细胞对包括第一杂交瘤细胞株h-7株和第二杂交瘤细胞株h-8株。

2.权利要求1所述杂交瘤细胞对在检测猫疱疹病毒i型抗原中的应用。

3.一种检测猫疱疹病毒i型的抗体对，其特征在于，所述抗体对是单克隆抗体h-7株和h-8株，所述单克隆抗体h-7是由杂交瘤细胞h-7株分泌获得的；所述单克隆抗体h-8株是由杂交瘤细胞h-8株分泌获得的。

4.权利要求3所述抗体对在检测猫疱疹病毒i型抗原中的应用。

5.一种检测猫疱疹病毒i型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的抗体对。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括pvc底板、金标垫、样品垫和吸水垫。

7.权利要求6所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，以pvc背板为支撑物，在其上分别贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸水垫，其中金标垫采用聚酯膜，经含有1％bsa和1％吐温-20的pbs处理后，将制备好的胶体金标记单克隆抗体h-7金标垫部分，完毕，37℃烘干2h，硝酸纤维膜上包被有两条线：分别为质控线和检测线，其中检测线包被物为单克隆抗体h-8株浓度为1.6mg/ml，质控线包被物为纯化的兔抗鼠抗体浓度为2.1mg/ml，然后用biodot划膜仪喷涂于硝酸纤维膜上，组装好后大板用切条机切成7-8mm的裸条备用。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述胶体金标记单克隆抗体h-7混合物的终浓度为10μg/ml。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述胶体金的制备方法如下：

10.根据权利要求9所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述抗体对与标记胶体金混合的方法如下：

技术总结
本发明本发明提供一种检测猫病毒性鼻气管炎的免疫层析试纸条，属于属于检测猫病毒性鼻气管炎技术领域。为了本发明的目的是为了提供一种准确和有效的检测猫猫病毒性鼻气管炎的方法。一种检测猫嵌杯病毒的抗体对，所述抗体对是单克隆抗体H‑7株和H‑8株，所述单克隆抗体H‑7是由杂交瘤细胞H‑7株分泌获得的；所述单克隆抗体H‑8株是由杂交瘤细胞H‑8株分泌获得的。可用于特异性的鉴定动物体内是否有猫疱疹病毒I型，以确定是否引发感染。

技术研发人员：程悦宁,王振军,罗国良,冯二凯,易立
受保护的技术使用者：中国农业科学院特产研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13