高氮型油菜假单胞菌及其发酵方法和应用与流程

本发明涉及微生物领域，具体涉及高氮型油菜假单胞菌及其发酵方法和应用。

背景技术：

1、油菜假单胞菌是一种植物根际促生菌，其可以分泌几丁质酶，降解几丁质，防治植物真菌病害，此外还具有极佳的耐盐能力和良好的解磷、解钾能力。因此具有极大的潜力开发用成生防菌剂、土壤改良剂用菌种、微生物菌剂等。

2、氮源是指构成微生物细胞和代谢产物中的氮素的营养物质，能提供微生物生长繁殖所需氮元素，是构成生物体的蛋白质、核酸及其他氮素化合物的主要材料。常用的氮源有有机氮源和无机氮源两大类。微生物对氮源的利用能力差异很大，大多数微生物只能利用铵盐、其他含氮盐、有机含氮化合物作为氮源，而无机氮源由于分子量小，易被吸收利用；有机氮源要被微生物分泌的蛋白酶水解后方能被吸收，进一步开始分解代谢。无机氮源作为速效氮源促进菌体繁殖，有机氮源作为迟效氮源，促进菌体分泌代谢产物。

3、随着人们对美好生活的需求不断提高，绿色食品、有机食品的需求量不断增加，市场亟需高品质的生物农药和有机肥料，油菜假单胞菌具有极大的市场应用潜力。但是绿色、有机种植中，化肥使用较少甚至不用，没有化肥提供速效氮源，且油菜假单胞菌不是可利用空气中氮气的固氮菌，其作为菌剂添加到有机肥料或者施用于土壤后，高有机氮环境会严重影响菌种的生长繁殖。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供高氮型油菜假单胞菌及其发酵方法和应用。

2、本发明提供了保藏编号为cgmcc no.26331的高氮型油菜假单胞菌(pseudomonasbrassicacearum)。

3、进一步的，所述的高氮型油菜假单胞菌通过驯化获得。在以保藏编号为cgmccno.6774的油菜假单胞菌nlsy003作为出发菌株，通过氮源逐步放大筛选出能够在不同的总氮浓度的培养基中生长的优势菌群，通过连续驯化培养，最终筛选出能够在高氮(总氮≥15％，有机氮≥10％)培养基中正常生长的高氮型油菜假单胞菌，并对菌株进行测序分析。最终筛选出可在总氮含量为15％～18％，其中有机氮含量为10％～12％的培养基上正常生长的菌株nlsy003-3，其保藏编号为cgmcc no.26331。与未驯化获得的菌株nlsy003相比，所述nlsy003-3对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌和西瓜枯萎病菌的抑制率分别提高了1.37％、5.56％和9.71％；对黄瓜和辣椒具有较高的促生效率，其中，辣椒的产量提高了17.7％。

4、本发明提供了包括所述高氮型油菜假单胞菌(pseudomonas brassicacearum)的菌群。

5、进一步的，所述的菌群包括与本发明所述的高氮型油菜假单胞菌不存在拮抗、竞争、寄生或捕食关系的任意菌株组成的菌群；所述的任意菌株与本发明所述的高氮型油菜假单胞菌在功能上协作或互补，用于增强本发明所述的高氮型油菜假单胞菌的生防功能。所述的增强包括但不限于提高或增加。

6、本发明提供了包括本发明所述高氮型油菜假单胞菌(pseudomonasbrassicacearum)或本发明所述菌群的菌剂。

7、进一步的，所述的菌剂的剂型包括颗粒、液体及干粉，本发明对此不做限定。

8、本发明提供了如下i)～iii)所示中的至少一种在制备生防产品中的应用：

9、i)、本发明所述的油菜假单胞菌或其发酵液、裂解液；

10、ii)、本发明所述的菌群；

11、iii)、本发明所述的菌剂。

12、进一步的，本发明所述生防产品的功能包括促进作物生长和/或抑制植物病原菌引起的病害中的至少一种。

13、本发明中，所述促进作物生长的环境或抑制植物病原菌引起的病害的环境中，总氮含量不高于18wt％，有机氮含量不高于12wt％。本发明所述的菌株nlsy003-3在总氮含量为15％～18％，有机氮含量为10％～12％的环境中可稳定生长。

14、进一步的，本发明所述的环境包括但不限于土壤或水培液。

15、本发明中，所述作物包括但不限于禾本科作物、豆科作物、唇形科、葫芦科作物或茄科作物等；所述禾本科作物包括但不限于小麦、大麦、燕麦、黑麦、稻、玉米、谷、高粱、黍、稷、稗、龙爪稷、蜡烛稗或薏苡等；所述豆科作物包括大豆、豌豆、绿豆、小豆、蚕豆、豇豆、菜豆、小扁豆、蔓豆或鹰嘴豆等；所述唇形科作物包括但不限于薄荷、留兰香、百里香、薰衣草、罗勒、迷迭香或香青兰等；所述葫芦科作物包括但不限于丝瓜、南瓜、黄瓜、葫芦、冬瓜、苦瓜、佛手瓜、甜瓜、帽儿瓜、油渣果或罗汉果等；所述茄科作物包括但不限于茄子、辣椒、人参果、龙葵、番茄、香曼陀罗、曼陀罗、枸杞、小花矮牵牛、天仙子、酸浆、碧冬茄、东莨菪、烟草、菜椒、彩叶椒或颠茄等。本发明的一些具体的实施例中，以黄瓜和辣椒为实验对象，研究所述高氮型油菜假单胞菌促进作物生长的能力，结果表明，本发明所述的高氮型油菜假单胞菌可促进黄瓜和辣椒的生长，其中，辣椒的产量提高了17.7％。

16、本发明中，所述病害包括灰霉病、纹枯病或枯萎病中的至少一种。

17、引起灰霉病的植物病原菌为灰葡萄孢菌，其可侵染作物的花、果、叶、茎等，所述灰葡萄孢菌侵染的作物包括月季、草莓、蓝莓、番茄、葡萄、百万小铃、小木槿或酢浆草等；引起纹枯病的植物病原菌为立枯丝核菌，立枯丝核菌侵染的作物包括水稻、小麦、薏苡或谷子等；引起枯萎病的植物病原菌为尖孢镰刀菌，其侵染作物主要包括番茄、西瓜、辣椒等。本发明的具体实施例中，所述高氮型油菜假单胞菌优选抑制西瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌和水稻纹枯病菌。

18、本发明提供了生防产品，其原料包括如下i)～iii)所示中的至少一种：

19、i)、本发明所述的油菜假单胞菌或其发酵液、裂解液；

20、ii)、本发明所述的菌群；

21、iii)、本发明所述的菌剂。

22、本发明提供了促进作物生长和/或抑制植物病原菌引起的病害的方法，其为施用本发明所述的生防产品。

23、本发明通过驯化获得一株可在高氮环境稳定生长繁殖的油菜假单胞菌，其保藏编号为cgmcc no.26331，实验结果表明，本发明所述的高氮型油菜假单胞菌，其不仅能在总氮含量15％～18％(其中有机氮含量10％～12％)的培养基中正常生长，且对辣椒和黄瓜具有促生效果；此外，高氮型油菜假单胞菌作为一种生防菌，对番茄灰霉病、水稻纹枯病和西瓜枯萎病具有抑制作用，且抑制效果优于野生型油菜假单胞菌。

24、生物保藏说明

25、生物材料nlsy003-3，分类命名:油菜假单胞菌pseudomonas brassicacearum，于2022年12月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.26331。

技术特征：

1.保藏编号为cgmcc no.26331的高氮型油菜假单胞菌(pseudomonasbrassicacearum)。

2.包括权利要求1所述高氮型油菜假单胞菌(pseudomonas brassicacearum)的菌群。

3.包括权利要求1所述高氮型油菜假单胞菌(pseudomonas brassicacearum)或权利要求2所述菌群的菌剂。

4.如下i)～iii)所示中的至少一种在制备生防产品中的应用：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生防产品的功能包括促进作物生长和/或抑制植物病原菌引起的病害中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述促进作物生长的环境或抑制植物病原菌引起的病害的环境中，总氮含量不高于18wt％，有机氮含量不高于12wt％。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述作物包括葫芦科和茄科作物中的至少一种。

8.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述病害包括灰霉病、纹枯病或枯萎病中的至少一种。

9.生防产品，其包括如下i)～iii)所示中的至少一种：

10.促进作物生长和/或抑制植物病原菌引起的病害的方法，其为施用权利要求9所述的生防产品。

技术总结
本发明涉及微生物领域，具体涉及高氮型油菜假单胞菌及其发酵方法和应用。本发明通过驯化获得一株可在高氮环境稳定生长繁殖的油菜假单胞菌，其保藏编号为CGMCC No.26331，实验结果表明，本发明所述的高氮型油菜假单胞菌，其不仅能在总氮含量15％～18％(其中有机氮含量10％～12％)的培养基中正常生长，且对辣椒和黄瓜具有促生效果；此外，高氮型油菜假单胞菌作为一种生防菌，对番茄灰霉病、水稻纹枯病和西瓜枯萎病具有抑制作用，且抑制效果优于野生型油菜假单胞菌。

技术研发人员：郝祥蕊,吴小珍,李慧,杨亮亮,樊杰,丁千岭,张红艳,冯镇泰
受保护的技术使用者：上海农乐生物制品股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11