一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法与流程

本发明涉及产绿链霉菌孢子培养，特别是一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法。

背景技术：

1、阿维拉霉素(avilamycin)又名卑霉素、阿维霉素，属寡糖类抗生素，是一种使用效果卓越的动物专用抗生素。阿维拉霉素具有较高的安全性，在肠道中不吸收，在畜产品中无残留，排泄后(包括分解物)对环境安全；在畜禽饲料中添加使用时无需停药期。因使用效果卓越，阿维拉霉素已在世界上40多个国家和地区广泛使用。

2、目前阿维拉霉素正处于国外技术垄断阶段，国内企业对于阿维拉菌种的研究处于开发阶段，尚未实现工业化生产。

3、目前在提高阿维拉霉素菌种能力方面主要是通过常规的菌种选育，而菌种质量的表达被忽视，优良的孢子质量是提高菌种能力的基础保证。目前阿维拉霉素孢子斜面生长状态不丰满，孢子量低，主要原因是斜面培养基软，从而湿度大，产孢困难。斜面软的原因是孢子固体培养基使用氯化钙，它和磷酸盐之间发生反应，导致斜面培养基的硬度低。单纯的提高琼脂加量，可以缓解一点，但是不能彻底解决孢子斜面的生长状态问题，导致后续的种子生长慢，发酵瓶效价不稳定，菌种砂土保藏也非常容易退化死亡，半年的时间砂土菌量就会明显降低。所以孢子质量是直接导致阿维拉霉素的菌种不稳定，不能投入大生产的主要原因之一。因此优化孢子生长的固体培养基，改善孢子的生长环境，提升孢子质量和砂土保藏的稳定性，是投入生产的根本保证。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，在斜面培养基中加入骨料物，使孢子斜面培养基的软硬度得到很好的控制，改善孢子的生长环镜，从而提高了产绿链霉菌孢子质量和保藏期限。

2、为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的：

3、一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，包括以下步骤：

4、s1、称量斜面培养基原材料：所述斜面培养基由以下组分组成：玉米淀粉15.0g/l，骨料物7-12g/l，kno3 1.0g/l，k2hpo4 0.5g/l，mgso4 0.5g/l，nacl20.5g/l，cacl2 2.0g/l，琼脂20g/l；

5、s2、将玉米淀粉和骨料物混合后用80℃以上热水糊化得到糊化料液，斜面培养基原材料中的其他组分混合后直接加水溶解成盐溶液；

6、s3、糊化料液冷却至室温后和盐溶液混合，定容，边搅动边分装至30x200mm的大试管中每管装量20ml，或分装至250ml茄瓶中每瓶装量50ml；

7、s4、进行高压蒸汽灭菌，灭菌完成后直接摇匀铺成30°的斜面，凝固后空培2天，形成斜面培养基，所述斜面培养基的标准总糖含量控制在1.0-2.0g/100ml，氮含量控制在10-20mg/100ml，磷含量控制在40-60ppm；

8、s5、在斜面培养基上接种阿维拉霉素菌种产绿链霉菌砂土，置于28±1℃的环境培养7-10天至阿维拉霉素孢子成熟。

9、进一步地，所述步骤s4中，斜面凝固后，骨料物沉淀到斜面0.5mm以下的区域。

10、进一步地，所述骨料物为小麦粒碎块、大麦粒碎块、玉米粒碎块、细小玻璃珠和磁珠中的一种。

11、进一步地，所述小麦粒碎块、大麦粒碎块、玉米粒碎块的细度大小为20目-40目，细小玻璃珠和磁珠的细度小于20目。

12、进一步地，所述步骤s5中，使用接种针挖取产绿链霉菌86#砂土孢子5mg接种到茄瓶内的斜面培养基上，或挖取产绿链霉菌86#砂土孢子2mg接种到大试管的斜面培养基上。

13、与现有技术相比，本发明通过在阿维拉霉素的固体斜面培养基中增加骨料物，可改善斜面的软硬度，优化了孢子的生长环境，提高了孢子质量，从而稳定了孢子的保藏效果，进而稳定了种瓶的质量，稳定了发酵瓶效价；还可以延长产绿链霉菌孢子的保藏期限。

技术特征：

1.一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的提高阿维拉霉素孢子质量的方法，其特征在于：所述步骤s4中，斜面凝固后，骨料物沉淀到斜面0.5mm以下的区域。

3.根据权利要求1所述的提高阿维拉霉素孢子质量的方法，其特征在于：所述骨料物为小麦粒碎块、大麦粒碎块、玉米粒碎块、细小玻璃珠和磁珠中的一种。

4.根据权利要求3所述的提高阿维拉霉素孢子质量的方法，其特征在于：所述小麦粒碎块、大麦粒碎块、玉米粒碎块的细度大小为20目-40目，细小玻璃珠和磁珠的细度小于20目。

5.根据权利要求1所述的提高阿维拉霉素孢子质量的方法，其特征在于：所述步骤s5中，使用接种针挖取产绿链霉菌86#砂土孢子5mg接种到茄瓶内的斜面培养基上，或挖取产绿链霉菌86#砂土孢子2mg接种到大试管的斜面培养基上。

技术总结
本发明属于产绿链霉菌孢子培养技术领域，具体公开了一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，通过在阿维拉霉素的固体斜面培养基中增加骨料物，可改善斜面的软硬度，优化了孢子的生长环境，提高了孢子质量，从而稳定了孢子的保藏效果，进而稳定了种瓶的质量，稳定了发酵瓶效价；还可以延长产绿链霉菌孢子的保藏期限。

技术研发人员：郑万静,赵敏,王雪峰,徐珍,李猛
受保护的技术使用者：河北圣雪大成制药有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11