一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法与流程

本发明涉及dna提取领域，具体而言，涉及一种全血基因组dna快提取试剂盒及其使用方法，可用于常规pcr扩增和荧光定量pcr。

背景技术：

1、随着分子生物学技术快速发展，基因组水平上的研究已成为研究热点。分子生物学中很多实验都涉及到基因组dna提取，基因组dna提取作为分子实验中最基础的实验之一，常规pcr扩增、荧光定量pcr和文库构建等实验都需要提取dna，随着现代诊断技术和精准医疗的蓬勃发展，需要处理的样品量日益增多，因此高效dna提取方法成为相关研究领域的迫切需求。

2、目前基因组dna提取的方法有很多种，例如苯酚氯仿抽提法、sds法、离心柱法和磁珠法，每种方法各有优缺点。并且市面上全血dna提取试剂盒种类繁多，但目前的全血dna提取试剂盒提取时存在诸多缺点，样本处理时间长、提取过程复杂和样本量多的时候相对成本比较高。

3、基因组dna提取的步骤主要分为裂解、dna与磁珠或者吸附柱结合、清洗和洗脱四个环节，清洗步骤作为核酸纯化过程中非常重要的环节，清洗的效果会直接影响提取的效率与纯度。目前核酸提取过程中最常用的清洗方法多为乙醇清洗，dna在乙醇中的溶解度较低，经过不同含量的乙醇清洗后，可除去残留的蛋白与盐离子，从而得到高纯度的dna。在清洗环节中，市场上常见的提取试剂清洗液多为两种，第一种清洗液为高浓度的胍盐与乙醇，用于除去残留的蛋白质和盐类，第二种为75％～85％乙醇溶液，用于除去残留的盐类，对核酸进一步纯化。

4、市场上常用的基因组dna提取步骤比较多，都需要吸附柱或者磁珠，提取过程相对比较复杂，全血投入量比较多，急需一种实验操作简单、快速、成本低和提取效率高的提取方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种全血基因组dna快提取试剂盒及其使用方法，旨在解决现有技术中dna提取操作方法复杂、步骤多和用时长，全血投入量只需20μl，且省去蛋白酶k、吸附柱和磁珠等试剂耗材，很大程度上降低成本和简化实验流程。

2、本发明中，解决技术问题的技术方案如下：

3、在本发明的第一方面，提供了一种全血基因组dna快提取试剂盒。

4、所述的全血dna快提取试剂盒，包括独立包装的红细胞裂解液、solution a和solution b；

5、所述红细胞裂解液包括如下组分：浓度为155mm的nh4cl，浓度为12mm的nahco3，和浓度为0.1mm edta；

6、所述solution a包括如下组分：浓度为0.2m的naoh；

7、所述solution b包括如下组分：浓度为1m ph 7.8的tris-hcl。

8、优选的，所述的全血dna快提取试剂盒中，检测试剂由独立包装的红细胞裂解液、solution a和solution b组成；

9、所述的红细胞裂解液由如下组分组成：155mm nh4cl，12mm nahco3和0.1mm edta。

10、优选的，所述的solution a为0.2m naoh。

11、优选的，所述的solution b为1m ph 7.8tris-hcl。

12、在本发明的第二方面，提供了一种全血基因组dna快提取试剂盒的使用方法。

13、所述全血基因组dna快提取试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

14、(1)准备1.5ml ep管，加入20μl全血；

15、(2)加入1ml红细胞裂解液，颠倒数次离心管混匀，置于离心机中7000转离心30s，移弃上清；

16、(3)重复步骤(2)一次；

17、(4)将ep管放置振荡器上振荡数秒；

18、(5)加200μl solution a，振荡5秒；

19、(6)加入40μl solution b，混匀，即得最终dna。

20、在本发明的第三方面，提供了利用第一方面所述全血基因组dna快提取试剂盒或利用第二方面所述方法提取的dna进行pcr的方法，具体如下：

21、将dna样本稀释到30ng/μl，选用ez#1为taq酶；

22、引物如下：

23、c-f:catctggactcttcttctcatgcc

24、c-r:gagctcaaacacccagcaagaag

25、反应体系和扩增程序如下：

26、

27、

28、在本发明的第四方面，提供了利用第一方面所述全血基因组dna快提取试剂盒或利用第二方面所述方法提取的dna进行荧光定量pcr的方法，具体如下：

29、将dna样本稀释到30ng/μl，选择ez#3为taq酶。

30、引物如下：

31、q-f:gaactcttgtgctcacgctgct

32、q-r:actgcagaaaggaagtgtgccaa

33、探针为：q-qf:5'-fam-aagggaccaacaggcagtcttcgt-3'-mgb

34、扩增体系和扩增程序如下：

35、

36、

37、

38、本发明具有如下技术效果：

39、与现有技术相比，本发明提供的全血基因组dna快提取试剂盒在室温条件下储存和操作，无需特殊条件，其使用方法简单，组分简单，不需要蛋白酶处理、过柱纯化和测浓度，全血投入量只需要20μl，单个样本的整个提取过程5min左右即可完成，提取后的dna在使用特定的dna聚合酶情况下可直接进行pcr扩增和荧光定量pcr。

技术特征：

1.一种全血基因组dna快提取试剂盒，其特征在于，包括独立包装的红细胞裂解液、solution a和solution b；

2.根据权利要求1所述的全血基因组dna快提取试剂盒，其特征在于，所述的全血dna快提取试剂盒中，检测试剂由独立包装的红细胞裂解液、solution a和solution b组成。

3.根据权利要求2所述的全血基因组dna快提取试剂盒，其特征在于，所述的红细胞裂解液由如下组分组成：155mm nh4cl，12mm nahco3和0.1mm edta。

4.根据权利要求2所述的全血基因组dna快提取试剂盒，其特征在于，所述的solutiona为0.2m naoh。

5.根据权利要求2所述的全血基因组dna快提取试剂盒，其特征在于，所述的solutionb为1m ph 7.8tris-hcl。

6.如权利要求1-5任意一项所述全血基因组dna快提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.利用如权利要求1-5任意一项所述全血基因组dna快提取试剂盒或利用如权利要求6所述方法提取的dna进行pcr的方法，其特征在于，具体如下：

8.利用如权利要求1-5任意一项所述全血基因组dna快提取试剂盒或利用如权利要求6所述方法提取的dna进行荧光定量pcr的方法，其特征在于，具体如下：

技术总结
本发明涉及DNA提取领域，具体而言，涉及一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法，可用于常规PCR扩增和荧光定量PCR。本发明提供的全血基因组DNA快提取试剂盒，包括独立包装的红细胞裂解液、Solution A和Solution B；所述红细胞裂解液包括如下组分：浓度为155mM的NH<subgt;4</subgt;Cl，浓度为12mM的NaHCO<subgt;3</subgt;，和浓度为0.1mM EDTA；所述Solution A包括如下组分：浓度为0.2M的NaOH；所述Solution B包括如下组分：浓度为1M pH 7.8的Tris‑HCl。本发明的试剂组分简单，成本低廉，全血投入量只需要20μl，且省去蛋白酶k、吸附柱和磁珠等试剂耗材，很大程度上降低成本，在核酸提取过程中省去清洗等步骤，整个提取过程5min即可完成，提取效率高。

技术研发人员：陈炤源,王浩,章婷婷,崔江应
受保护的技术使用者：江苏伟禾生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13