一种重组肝炎病毒抗原、基因和试剂盒的制作方法

本发明涉及动物疾病检测领域，特别是涉及一种重组肝炎病毒抗原、基因和试剂盒。

背景技术：

1、现有的实验动物小鼠肝炎病毒抗体elisa检测试剂盒都是采用双抗原(阳性抗原+阴性抗原)包被的方式，且抗原为用病毒感染相应细胞培养出的抗原。培养的抗原由于纯度低，特异性低，具有一定的交叉反应性，且双抗原板检测耗费的样本量多，检测时间长(120min以上)，结果统计也更复杂(需要先将阳性抗原包被孔测得的od值减去阴性抗原包被孔测得的od值，计算出差值，再根据差值与临界值的关系判断阴阳性)。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种重组肝炎病毒抗原、基因和试剂盒，用特异性高的重组抗原包被的小鼠肝炎病毒抗体elisa试剂盒，且经过对样本稀释液的改进，可以有效降低样本的本底吸光度值，减少背景颜色，从而可以达到直接从反应板颜色判断结果的效果，另外由于单抗原包被，可以节约样本用量，减少反应时间，采用吸光度值判断结果也更简单方便，可以很好的解决现有技术的缺陷。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一种重组肝炎病毒抗原，所述重组肝炎病毒抗原的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明还提供了一种编码上述技术方案所述重组肝炎病毒抗原的基因，所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

5、本发明还提供了一种用于检测实验小鼠肝炎病毒抗体的elisa检测试剂盒，包括包被有上述技术方案所述重组肝炎病毒抗原的酶标板。

6、优选的，所述酶标板上重组肝炎病毒抗原的包被浓度为1μg/ml。

7、优选的，还包括样本稀释液、洗涤液、阳性质控品、阴性质控品、酶标记物、底物液和终止液。

8、优选的，所述样本稀释液包括：0.1mpbs缓冲液、质量百分含量为2％的牛血清白蛋白、质量百分含量为1％的海藻糖和质量百分含量为0.5％的peg6000。

9、优选的，所述洗涤液包括：0.1m磷酸盐缓冲液和体积百分含量为0.5％的吐温-20。

10、优选的，所述阳性质控品含有蛋白稳定剂1:100倍稀释的小鼠肝炎病毒抗体阳性血清；

11、所述阴性质控品为蛋白稳定剂1:100倍稀释的小鼠肝炎病毒抗体阴性血清。

12、优选的，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的抗小鼠igg，所述酶标记物的浓度为1:500～1:4000。

13、优选的，所述底物液包含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺、过氧化氢和0.1m柠檬酸钠溶液；

14、所述终止液为0.1～2mol/l的硫酸溶液。

15、本发明的有益效果为：

16、(1)重组蛋白具有纯度高，特异性高等特点，可有效降低试剂间的交叉反应，特异性更好。

17、(2)高特异性的蛋白有效降低阴性样本的背景值，可以避免使用双抗原检测，检测更简单，样本使用量更少，且更有利于结果的判断(单抗原检测，只需将样本od值与临界值比较即可判断出阴阳性结果)。

18、(3)试剂盒整体性能与市面上的同类elisa检测试剂盒相比，具有检测时间短，灵敏度更高，结果判断更简单等优点。

技术特征：

1.一种重组肝炎病毒抗原，其特征在于，所述重组肝炎病毒抗原的氨基酸序列如seqid no.1所示。

2.一种编码权利要求1所述重组肝炎病毒抗原的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

3.一种用于检测实验小鼠肝炎病毒抗体的elisa检测试剂盒，其特征在于，包括包被有权利要求1所述重组肝炎病毒抗原的酶标板。

4.根据权利要求3所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，所述酶标板上重组肝炎病毒抗原的包被浓度为1μg/ml。

5.根据权利要求3所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，还包括样本稀释液、洗涤液、阳性质控品、阴性质控品、酶标记物、底物液和终止液。

6.根据权利要求5所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括：0.1mpbs缓冲液、质量百分含量为2％的牛血清白蛋白、质量百分含量为1％的海藻糖和质量百分含量为0.5％的peg6000。

7.根据权利要求5所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括：0.1m磷酸盐缓冲液和体积百分含量为0.5％的吐温-20。

8.根据权利要求5所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品含有蛋白稳定剂1:100倍稀释的小鼠肝炎病毒抗体阳性血清；

9.根据权利要求5所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的抗小鼠igg，所述酶标记物的浓度为1:500～1:4000。

10.根据权利要求5所述的elisa检测试剂盒，其特征在于，所述底物液包含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺、过氧化氢和0.1m柠檬酸钠溶液；

技术总结
本发明提供了一种重组肝炎病毒抗原、基因和试剂盒，属于动物疾病检测技术领域。所述重组肝炎病毒抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明提供的重组肝炎病毒抗原具有纯度高，特异性高等特点，可有效降低试剂间的交叉反应，特异性更好。高特异性的蛋白有效降低阴性样本的背景值，可以避免使用双抗原检测，检测更简单，样本使用量更少，且更有利于结果的判断。试剂盒整体性能与市面上的同类ELISA检测试剂盒相比，具有检测时间短，灵敏度更高，结果判断更简单等优点。

技术研发人员：许爱红,刘秋菊,曾周祥,吴少珏
受保护的技术使用者：深圳海思安生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13