一种提取元宝枫籽中神经酸的方法与流程

本发明涉及神经酸提取，具体为一种提取元宝枫籽中神经酸的方法。

背景技术：

1、元宝枫是我国特有的枫树树种，属槭树科、槭树属，元宝枫种子的含油量较高，元宝枫籽油中含有一种特殊的脂肪酸-神经酸，神经酸是大脑神经组织和神经细胞的重要组成成分，可以促进受损神经组织的修复和再生，能够帮助改善脑神经的正常活动，以及防止脑神经衰老。目前，神经酸在提取时，需要先于元宝枫籽中提取元宝枫籽油，例如采用压榨法、索氏抽提、超临界萃取等方式，随后再利用结晶法、分子蒸馏、尿素包合法等对神经酸进行分离纯化，元宝枫籽油的得率和神经酸的分离纯化方式均关系到神经酸的得率。元宝枫籽油在提取时，基本上都是利用原料本身在有机溶剂中的溶解性进行提取，其提取效率普遍较低，成本高，特别是其中的一些方法还可能使成分被损坏或变性，从而影响最终神经酸的产率和品质。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供了一种提取元宝枫籽中神经酸的方法。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种提取元宝枫籽中神经酸的方法，包括以下步骤：

3、s1：将元宝枫籽洗净后，58-63℃干燥至恒重后粉碎，获得含水率4wt%-5wt%元宝枫籽颗粒；

4、s2：将所述元宝枫籽颗粒与无机酸-有机溶剂混合，制得元宝枫油混合料液；所述混合料液中元宝枫籽颗粒与无机酸-有机试剂的质量比为1:15；

5、s3: 将所述混合料液泵入感应电场反应系统，感应电场的参数包括：输入电压为220v，恒稳磁场100～300mt, 泵转速为100~300 r/min，所述混合料液反应体系的终反应温度50~70℃、提取时间为55~60 min；

6、s4：在完成所述的元宝枫籽油提取后，将所述混合料液冷却至室温，并滤除其中的固形物得到滤液，随后将所述滤液于40 ℃进行旋转蒸发得到料液，直至所获料液的体积为滤液体积的20%，然后将所述料液与sevage试剂按5：1的体积比混合后振荡离心，以去除料液中的蛋白质得到除蛋白料液，其后将除蛋白质料液与乙醇按1：3的体积比混合后过滤，并收集滤出物，之后将滤出物于真空度12 pa下处理50 h，得到元宝枫籽油；

7、s5：计算元宝枫籽油的得油率；

8、s6：利用gc-ms分析元宝枫籽油中的神经酸含量；

9、s7：制取混合脂肪酸：将元宝枫籽油中加入氢氧化钠，氢氧化钠的用量为元宝枫籽油重量的12wt%，将反应液置于85℃水浴中进行皂化10h，直至反应液澄清透明，再用20 %盐酸将其ph调节为2.0，再加入萃取剂进行萃取，收集油层并用蒸馏水将油层洗至中性，然后在油层中加入无水硫酸钠脱除水分后，再置于旋转蒸发仪中进行60 ℃旋蒸，回收萃取剂，得到混合脂肪酸；

10、s8：对混合脂肪酸中的神经酸进行分离纯化；

11、s9：采用峰面积归一化法测定神经酸的纯度。

12、作为优选，所述无机酸-有机试剂中，无机酸包括稀盐酸和硝酸；有机试剂包括丙酮和乙醚。

13、作为优化，步骤s7中的萃取剂为石油醚、正己烷和丙酮中的一种或几种，萃取次数≥3。

14、作为优选，s8步骤中的分离纯化方式为先进行分子蒸馏方法后再采用尿素包合法。

15、作为优选，所述分子蒸馏法的步骤如下：将混合脂肪酸进样至分子蒸馏设备中，在蒸馏温度为150℃，真空度0.05mbar的条件下，收集含神经酸的重组分样品。

16、作为优选，所述尿素包合法的步骤如下：将尿素按照1：6的比例溶解在95%的乙醇中，在60℃水浴中加热溶解，并搅拌，待尿素完全溶解后，按照尿脂比1：1的比例加入脂肪酸，直至溶液澄清透明；取出冷却至常温，-4℃冷藏24h后，形成尿素包合物，将尿素包合物进行抽滤分离，收集结晶部分；结晶部分用蒸馏水水洗后，用石油醚进行萃取，静置后取上层溶液，然后将上层溶液用无水硫酸钠脱去水分，最后旋蒸，得到所需神经酸。

17、作为优选，s6中利用所述gc-ms分析神经酸含量的方法为：先称量0.2500 g元宝枫籽油，加入5 ml正己烷，然后加入浓度2%的氢氧化钾甲醇溶液；在50 ℃下，甲酯化2 h；甲酯化后，添加10 ml 5 % hcl；再添加5 ml正己烷；静置15 min分层后，得到上层液体；用正己烷定容至10 ml，随后进行gc-ms分析，gc-ms参数为：程序升温：初温50 ℃，保留1 min；以10℃/min的速率升温至140 ℃，保留5 min，再以4 ℃/min的速率升温至210 ℃，最后以3 ℃/min的速率升温至230 ℃，保留16 min；进样口温度240 ℃，色谱-质谱接口温度240 ℃，载气 he，进样量1μl。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明所提供的一种提取元宝枫籽中神经酸的方法，利用感应电场辅助有机溶剂对元宝枫籽油进行提取，提取后再利用分子蒸馏法协同尿素包合法对元宝枫籽油中的神经酸进行提取，感应电场提取能够在不引入外源物质的情况下，实现温和提取，磁感应电场能够产生磁感应电流，它们各自具有非热效应和热效应的协同作用，加快元宝枫籽油的溶出，以此提高效率和得率，不会破坏活性成分，增加神经酸的提取产率，使得后续纯化更加省时省力，具备很好的工业化应用前景。

技术特征：

1.一种提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于：所述无机酸-有机试剂中，无机酸包括稀盐酸和硝酸；有机试剂包括丙酮和乙醚。

3.根据权利要求1所述的提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于：步骤s7中的萃取剂为石油醚、正己烷和丙酮中的一种或几种，萃取次数≥3。

4.根据权利要求1所述的提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于：s8步骤中的分离纯化方式为先进行分子蒸馏方法后再采用尿素包合法。

5.根据权利要求4所述的提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于：所述分子蒸馏法的步骤如下：将混合脂肪酸进样至分子蒸馏设备中，在蒸馏温度为150℃，真空度0.05mbar的条件下，收集含神经酸的重组分样品。

6.根据权利要求5所述的提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于：所述尿素包合法的步骤如下：将尿素按照1：6的比例溶解在95%的乙醇中，在60℃水浴中加热溶解，并搅拌，待尿素完全溶解后，按照尿脂比1：1的比例加入脂肪酸，直至溶液澄清透明；取出冷却至常温，-4℃冷藏24h后，形成尿素包合物，将尿素包合物进行抽滤分离，收集结晶部分；结晶部分用蒸馏水水洗后，用石油醚进行萃取，静置后取上层溶液，然后将上层溶液用无水硫酸钠脱去水分，最后旋蒸，得到所需神经酸。

7. 根据权利要求1所述的提取元宝枫籽中神经酸的方法，其特征在于：步骤s6中利用所述gc-ms分析神经酸含量的方法为：先称量0.2500 g元宝枫籽油，加入5 ml正己烷，然后加入浓度为2%的氢氧化钾甲醇溶液；在50 ℃下，甲酯化2 h；甲酯化后，添加10 ml 5 %hcl；再添加5 ml正己烷；静置15 min分层后，得到上层液体；用正己烷定容至10 ml，随后进行gc-ms分析，gc-ms参数为：程序升温：初温50 ℃，保留1 min；以10 ℃/min的速率升温至140 ℃，保留5 min，再以4 ℃/min的速率升温至210 ℃，最后以3 ℃/min的速率升温至230℃，保留16 min；进样口温度240 ℃，色谱-质谱接口温度240 ℃，载气 he，进样量1μl。

技术总结
本发明涉及神经酸提取技术领域，具体涉及一种提取元宝枫籽中神经酸的方法，利用感应电场辅助有机溶剂对元宝枫籽油进行提取，提取后再利用分子蒸馏法协同尿素包合法对元宝枫籽油中的神经酸进行提取，感应电场提取能够在不引入外源物质的情况下，实现温和提取，磁感应电场能够产生磁感应电流，它们各自具有非热效应和热效应的协同作用，加快元宝枫籽油的溶出，以此提高效率和得率，增加神经酸的提取产率，使得后续纯化更加省时省力，具备很好的工业化应用前景。

技术研发人员：秦大伟,鲁仪增,仝伯强,孙华
受保护的技术使用者：山东省林草种质资源中心（山东省药乡林场）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16