一种具有URAT1抑制活性的密蒙花苷及其制备方法和应用与流程

本发明涉及天然产物开发领域，具体涉及一种具有urat1抑制活性的密蒙花苷及其制备方法和应用。

背景技术：

1、尿酸盐转运蛋白1(urat1)，定位在肾脏近端小管的顶端膜，是控制肾脏尿酸盐重吸收过程的主要转运蛋白，也是用于治疗高尿酸血症的重要靶点之一。靶向urat1治疗高尿酸血症的药物(如苯溴马隆)，通过抑制urat1对尿酸盐的转运能力，减少尿酸盐的重吸收，从而促进尿酸排泄。然而，苯溴马隆具有较强的肝毒性，且不适用于痛风发作期，进而限制了其应用。而其他作用于urat1的药物也有不同程度的副作用和使用局限性，因此从天然化合物挖掘筛选urat1抑制剂逐渐成为研究的热点。

2、密蒙花苷，分子量为594.52，是一种糖苷类黄酮，具有抗血栓、降血糖、抗炎、抗肿瘤等活性，但目前未见关于密蒙花苷对urat1抑制活性或降尿酸活性的报道。研究报道的密蒙花苷主要来源有密蒙花、紫椴花、覆盆子等，但部分原料价格偏高，而黑莓叶中密蒙花苷含量较高，且黑莓叶作为黑莓种植产业的副产物，成本较低，因此可以作为制备密蒙花苷的原料。密蒙花苷生产工艺主要有机溶剂浸提、回流提取等方式，存在有机溶剂消耗量大、提取时间长、提取率较低等缺点。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种具有urat1抑制活性的密蒙花苷及其制备方法和应用。本发明利用超临界二氧化碳萃取技术，结合c18反相硅胶柱纯化，从黑莓叶中高效提取纯化密蒙花苷，所得的密蒙花苷得率和纯度高，具有较强的尿酸盐转运蛋白1抑制活性。

2、为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

3、本发明提供了一种具有urat1抑制活性的密蒙花苷的制备方法，包括以下步骤：

4、(1)黑莓叶洗净烘干，粉碎过筛，得黑莓叶粉；

5、(2)将步骤(1)的黑莓叶粉进行超临界萃取，收集提取液；

6、(3)将步骤(2)的提取液减压浓缩，得浓缩液；

7、(4)将步骤(3)的浓缩液纯化洗脱，收集洗脱液；

8、(5)将步骤(4)的洗脱液减压浓缩、干燥，得密蒙花苷。

9、进一步的，所述步骤(1)中的过筛的目数为40-100目。

10、进一步的，所述步骤(2)中的超临界萃取采用的是萃取釜，以co2为萃取剂，40％-80％乙醇为夹带剂；所述超临界萃取的条件为：萃取温度为30℃-50℃，萃取压力为35mpa-50mpa，萃取时间为40min-60min，夹带剂流速为2l/h-3l/h，co2流速为30l/h-50l/h，其中分离釜1的压力为15mpa-20mpa，分离釜2的压力为4mpa-8mpa。

11、进一步的，所述步骤(3)中的提取液和步骤(5)中的洗脱液均减压浓缩至原体积的1/10-1/20；所述减压浓缩条件为：温度为40℃-55℃，真空度为-0.055mpa～-0.098mpa。

12、进一步的，所述步骤(4)中的纯化采用的是硅胶柱纯化，具体为粒径10-40μm的c18反相硅胶柱。

13、进一步的，所述步骤(4)中的洗脱条件为：40％-45％甲醇溶液洗脱2-3bv，50％-60％甲醇溶液洗脱3bv，薄层色谱实时检测，收集50％-60％甲醇洗脱液中含有目标化合物的组分。

14、进一步的，所述步骤(5)中的干燥方式为真空干燥或冷冻干燥。

15、综上，一种具有urat1抑制活性的密蒙花苷的制备方法，包括以下步骤：

16、(1)黑莓叶洗净烘干，粉碎，过40-100目筛，得黑莓叶粉；

17、(2)将黑莓叶粉加入萃取釜，以co2为萃取剂，40％-80％乙醇为夹带剂进行超临界萃取，设置萃取温度30-50℃，压力35-50mpa，时间40-60min，夹带剂流速为2-3l/h，co2流速为30-50l/h，分离釜1压力为15-20mpa，分离釜2压力为4-8mpa，在分离釜2收集提取液；

18、(3)将步骤(2)的提取液在温度40-55℃，真空度-0.055～-0.098mpa的条件下减压浓缩至原体积的1/10-1/20，得浓缩液；

19、(4)将步骤(3)的浓缩液用粒径10-40μm的c18反相硅胶柱纯化，上样后用40％-45％甲醇溶液洗脱2-3bv，50-60％甲醇溶液洗脱3bv，薄层色谱实时检测，收集50％-60％甲醇洗脱液中含有目标化合物的组分；

20、(5)将步骤(4)的洗脱液在温度40-55℃，真空度-0.055～-0.098mpa的条件下减压浓缩至原体积的1/10-1/20，真空干燥或冷冻干燥得密蒙花苷。

21、本发明还提供了一种密蒙花苷，其是由所述的制备方法制备得到的，其中纯度大于98％。

22、本发明还提供了所述的密蒙花苷在制备具有降尿酸作用的特殊医学用途配方食品、保健品或药品中的应用。

23、本发明还提供了所述的密蒙花苷在制备urat1抑制剂中的应用。

24、进一步的，所述密蒙花苷抑制urat1的ic50为7.77μmol/l。

25、与现有技术相比，本发明的优点和有益效果是：

26、1、本发明提供了一种从黑莓叶中提取制备密蒙花苷的制备方法，利用超临界二氧化碳萃取技术，结合c18反相硅胶柱纯化，高效制备高纯度具有尿酸盐转运蛋白1抑制活性的密蒙花苷，密蒙花苷得率0.84％，hplc纯度高达99.9％，而且制备方法具有安全环保、成本低廉等优势。

27、2、本发明提供的黑莓叶来源的密蒙花苷首次验证具有尿酸盐转运蛋白1抑制活性，抑制尿酸盐转运蛋白1的ic50为7.77μmol/l，与苯溴马隆活性相当，为尿酸盐转运蛋白1抑制剂开发提供新资源，同时也为黑莓叶高值化利用提供新用途。

28、3、黑莓叶来源密蒙花苷作为一种天然植物提取物，与已有药物相比具有对人体副作用小、绿色安全的优势，在制备具有尿酸盐转运蛋白1抑制活性的功能制品中具有明显的优势和广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种具有urat1抑制活性的密蒙花苷的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的过筛的目数为40-100目。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的超临界萃取采用的是萃取釜，以co2为萃取剂，40％-80％乙醇为夹带剂；所述超临界萃取的条件为：萃取温度为30℃-50℃，萃取压力为35mpa-50mpa，萃取时间为40min-60min，夹带剂流速为2l/h-3l/h，co2流速为30l/h-50l/h，其中分离釜1的压力为15mpa-20mpa，分离釜2的压力为4mpa-8mpa。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的提取液和步骤(5)中的洗脱液均减压浓缩至原体积的1/10-1/20；所述减压浓缩条件为：温度为40℃-55℃，真空度为-0.055mpa～-0.098mpa。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的纯化采用的是硅胶柱纯化，具体为粒径10-40μm的c18反相硅胶柱。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的洗脱条件为：40％-45％甲醇溶液洗脱2-3bv，50％-60％甲醇溶液洗脱3bv，薄层色谱实时检测，收集50％-60％甲醇洗脱液中含有目标化合物的组分。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中的干燥方式为真空干燥或冷冻干燥。

8.一种密蒙花苷，其特征在于，所述密蒙花苷是由权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到的，其中纯度大于98％。

9.权利要求8所述的密蒙花苷在制备具有降尿酸作用的特殊医学用途配方食品、保健品或药品中的应用。

10.权利要求8所述的密蒙花苷在制备urat1抑制剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种具有URAT1抑制活性的密蒙花苷及其制备方法和应用。所述制备方法的步骤包括：将黑莓叶洗净烘干，粉碎过筛，得黑莓叶粉；将黑莓叶粉进行超临界萃取，收集提取液；将提取液减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液纯化洗脱，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩、干燥，得密蒙花苷。所述密蒙花苷得率0.84％，HPLC纯度高达99.9％，且制备方法安全环保、成本低廉。本发明还经实验验证，密蒙花苷具有尿酸盐转运蛋白1抑制活性，为尿酸盐转运蛋白1抑制剂开发提供新资源，同时也为黑莓叶高值化利用提供新用途。

技术研发人员：万国韶,姚凤丽,王鹏,杜春影
受保护的技术使用者：青岛海济润生生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15