人PBMC细胞群及其应用的制作方法

本发明涉及生物。具体地说，本发明涉及hupbmc细胞群、所述细胞群在提高人源化小鼠模型的人免疫系统重建效率中的应用以及利用所述细胞群提高人源化小鼠模型的人免疫系统重建效率的方法。

背景技术：

1、最近10年肿瘤免疫治疗发展十分迅猛。免疫治疗是通过激发与增强机体抗肿瘤免疫应答，协同机体免疫系统杀伤肿瘤，抑制肿瘤生长的新兴肿瘤治疗方式。与传统疗法相比，免疫疗法有很大的优势，包括更广谱的抗癌效果，副作用更小。而且由于免疫系统的记忆功能，免疫疗法可能让晚期患者长期存活，甚至临床治愈，这是免疫药物区别于其它所有药物最大的不同，也是免疫疗法最大的优势之一。鉴于肿瘤免疫治疗药物的卓越疗效和广阔的市场前景，从国际制药巨头到众多中小型生物医药公司都在积极布局肿瘤免疫治疗领域的药物研发。前几年，肿瘤免疫治疗新药开发的领域主要集中在，各类靶向t细胞的疗法，例如pd-1/pd-l1抗体药物以及t细胞免疫检查点的药物，针对t细胞的双特异性抗体，还有car-t细胞治疗等新疗法。

2、免疫治疗主要是通过激发与增强人体免疫系统来杀伤肿瘤，因而在免疫治疗新药临床前开发阶段，成熟稳定的人源免疫系统重建肿瘤动物模型，就成为新疗法临床前评价非常重要的研究手段。人源免疫系统重建动物模型，是指将人的免疫系统植入重度联合免疫缺陷动物体内，在动物模型中重建人源的免疫系统，来模拟临床上的人源免疫应答反应。在这种模型中植入人的肿瘤细胞或者肿瘤组织后，这种动物就同时具有了人的免疫系统和人的肿瘤细胞或组织，可以较好的反应二者之间的相互作用，因而在临床前肿瘤免疫治疗药物和治疗方法的研发等方面具有良好的应用前景。

3、比较常用的人源免疫系统重建小鼠模型有两种，hupbmc(humanized-peripheralblood mononuclear cells)人源化小鼠模型，和huhsc(humanized-hematopoietic stemcells)人源化小鼠模型。其中hupmbc人源化小鼠模型因为成模速度快，制备相对简单并且成本相对低廉，十分适合免疫疗法候选药物的快速筛选与评价。其方法是将来源于人外周血中的pbmcs注入重度免疫缺陷小鼠体内从而获得。

4、但pbmc模型的人源免疫系统的重建效率受到小鼠品系、免疫细胞供体和移植策略等方面的影响。同一小鼠品系中，不同供体来源的pbmc，在注射到小鼠体内之后，重建效率差异巨大。这样使用不同供体造模的小鼠间差异极大，有的供体可以让小鼠较好的重建人源的免疫系统，有的供体则不能在小鼠体内重建人源的免疫系统，给免疫疗法药物评价带来巨大影响。因此，现有技术中使用pbmc供体在小鼠体内重建人源免疫系统效率低且不稳定，甚至无法重建人源免疫系统。

5、因此如何筛选出适合pbmc重建的pbmc供体，是解决免疫重建效率的关键问题之一。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种预测标准，通过该标准能够甄别和筛选适合pbmc免疫重建小鼠模型造模的pbmc供体，从而极大提高接种肿瘤小鼠pbmc模型人源免疫系统的重建效率。

2、本发明的目的还在于提供一种pbmc供体，利用该pbmc供体建立的人源化小鼠模型的人源免疫系统重建的成功率可以提高到80％以上。

3、在第一方面，本发明提供一种pbmc细胞群，所述pbmc细胞群具有以下特征：所述pbmc细胞群中cd14阳性率在16％以上；或者，所述pbmc细胞群中cd8阳性率在20％以上。

4、在具体的实施方式中，所述pbmc细胞群中cd14阳性率在16％以上并且cd8阳性率在20％以上。

5、在具体的实施方式中，所述pbmc是人pmbc。

6、在优选的实施方式中，所述pbmc细胞群用于制备动物模型。

7、在优选的实施方式中，所述动物模型是人源免疫系统重建肿瘤动物模型。

8、在优选的实施方式中，所述动物是啮齿类动物，优选小鼠。

9、在优选的实施方式中，所述人源免疫系统重建肿瘤动物模型的人源化免疫系统重建成功效率在50％以上；优选在60％以上；更优选在70％以上；最优选在80％以上。

10、在第二方面，本发明提供一种细胞制品，所述细胞制品包括第一方面所述的pbmc细胞群，以及维持所述pbmc细胞群存活的培养基。

11、在第三方面，本发明提供一种用于制备动物模型的试剂盒，所述试剂盒包括：

12、1)第一方面所述的pbmc细胞群或权利要求4所述的细胞制品；

13、2)将所述pbmc细胞群或所述细胞制品给予动物以制备动物模型的必要器件；和

14、3)任选的使用说明书。

15、在优选的实施方式中，所述动物模型是人源免疫系统重建肿瘤动物模型。

16、在优选的实施方式中，所述动物是啮齿类动物，优选小鼠。

17、在第四方面，本发明提供第一方面所述的pbmc细胞群或第二方面所述的细胞制品在制备动物模型中的用途。

18、在具体的实施方式中，所述动物模型是人源免疫系统重建肿瘤动物模型。

19、在具体的实施方式中，所述动物是啮齿类动物，优选小鼠。

20、在第五方面，本发明提供一种制备动物模型的方法，包括以下步骤：

21、将第一方面所述的pbmc细胞群或第二方面所述的细胞制品给予动物以制备动物模型。

22、在优选的实施方式中，所述动物模型是人源免疫系统重建肿瘤动物模型。

23、在优选的实施方式中，所述动物是啮齿类动物，优选小鼠。

24、在优选的实施方式中，所述人源免疫系统重建肿瘤动物模型的人源化免疫系统重建成功效率在50％以上；优选在60％以上；更优选在70％以上；最优选在80％以上。

25、在第六方面，本发明提供一种动物模型，所述动物模型利用第四方面所述的制备方法制备。

26、在优选的实施方式中，所述动物模型是人源免疫系统重建肿瘤动物模型。

27、在优选的实施方式中，所述动物是啮齿类动物，优选小鼠。

28、在优选的实施方式中，所述人源免疫系统重建肿瘤动物模型的人源化免疫系统重建成功效率在50％以上；优选在60％以上；更优选在70％以上；最优选在80％以上。

29、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

技术特征：

1.一种pbmc细胞群，所述pbmc细胞群具有以下特征：所述pbmc细胞群中cd14阳性率在16％以上；或者，所述pbmc细胞群中cd8阳性率在20％以上。

2.如权利要求1所述的pbmc细胞群，其特征在于，所述pbmc细胞群中cd14阳性率在16％以上并且cd8阳性率在20％以上。

3.如权利要求1或2所述的pbmc细胞群，其特征在于，所述pbmc是人pmbc。

4.一种细胞制品，所述细胞制品包括权利要求1-3中任一项所述的pbmc细胞群，以及维持所述pbmc细胞群存活的培养基。

5.一种用于制备动物模型的试剂盒，所述试剂盒包括：

6.权利要求1-3中任一项所述的pbmc细胞群或权利要求4所述的细胞制品在制备动物模型中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述动物模型是人源免疫系统重建肿瘤动物模型。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述动物是啮齿类动物，优选小鼠。

9.一种制备动物模型的方法，包括以下步骤：

10.一种动物模型，所述动物模型利用权利要求9所述的制备方法制备。

技术总结
本发明提供一种PBMC细胞群，所述PBMC细胞群中CD14阳性率在16％以上和/或所述PBMC细胞群中CD8阳性率在20％以上。本发明还提供包含所述细胞群的细胞制品或试剂盒。利用本发明的PBMC细胞群或细胞制品可以制备人源化免疫系统重建成功效率在50％以上，优选60％以上，更优选70％以上，最优选80％以上的动物模型。

技术研发人员：曾佳
受保护的技术使用者：上海蕤励生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13