抗金黄色葡萄球菌肠毒素B的抗体Hm0283及其应用

本发明涉及抗体领域，具体涉及抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，还涉及该抗体的应用。

背景技术：

1、人类病原体金黄色葡萄球菌产生的葡萄球菌肠毒素b(seb)是一种强大的超抗原毒素，导致食物中毒和全身中毒，从而导致严重的危及生命的疾病，称为中毒性休克综合征(tss)。seb超抗原主要与mhc ii类分子和tcr分子相互作用，导致单核细胞/巨噬细胞和t淋巴细胞的活化，并诱导高水平的促炎细胞因子和趋化因子。而大量炎症细胞因子，包括il-2、tnf和ifn–γ等可导致呼吸衰竭、血管损伤、多器官系统崩溃和死亡。

2、目前针对seb没有特定的药物治疗，研究提出了多种治疗方法，包括小分子药物、疫苗及靶向seb单抗或多抗。本发明抗体通过金黄色葡萄球菌脓毒血症感染致死模型进行保护性评价，实验结果表明，600μg抗体能够保护60％小鼠，此结果表明，全人源抗seb抗体能够抑制疾病进展、增强清除并且抑制入侵生物的全身扩散，有效保护balb/c小鼠免遭mrsa引起的脓毒血症感染。因此，基于抗体药物为核心的被动免疫治疗mrsa感染具有巨大的发展应用前景，将可成为“非抗生素”治疗mrsa感染和控制耐药性发展新的免疫防治手段。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283；本发明的目的之二在于提供编码所述抗体hm0283的核苷酸序列；本发明的目的之三在于提供含有所述核苷酸序列的载体或宿主；本发明的目的之四在于提供一种生产抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283；本发明的目的之五在于提供所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283在制备特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素b的试剂中的应用；本发明的目的之六在于提供所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283在制备治疗、预防或诊断金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、1、抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，所述抗体hm0283包括重链和轻链，所述重链的可变区cdr1,cdr2和cdr3氨基酸序列分别如seq id no.1、seq id no.2和seq idno.3所示；所述轻链的可变区cdr1和cdr3氨基酸序列分别如seq id no.4和seq id no.5所示，cdr2的氨基酸序列为aas。

4、本发明优选的，所述抗体hm0283的恒定区包括人源iga、igd、ige、igg或igm恒定区中的任意一种；优选为igg，本发明的抗体的轻链可以是κ型或λ型的，优选为κ型。功能性片段包含但不限于或由vl/vh区域对和抗体恒定域组成的抗体，如scfv、fab、f(ab′)2或fv特定抗体等。

5、本发明优选的，所述重链的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述轻链的氨基酸序列如seq id no.10所示。

6、本发明优选的，所述抗体hm0283特异结合金黄色葡萄球菌肠毒素b或金黄色葡萄球菌肠毒素b突变蛋白。

7、本发明优选的，抗体hm0283与seb结合的平衡解离常数不高于2×10-8m。

8、2、编码所述抗体hm0283的核苷酸序列。

9、含有所述核苷酸序列的载体或宿主，所述载体为pgex系列载体、pet系列载体和pcdna3.1(+)系列载体。所述表达载体优选的技术方案为pcdna3.1(+)。所述宿主可以是原核细胞，如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等；或是低等真核细胞，如酵母细胞等；或是高等真核细胞，如sf9昆虫细胞、cho动物细胞或293细胞等。特别优选的是人生产细胞系，较佳地，优选293f细胞。

10、4、一种生产抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，将含有编码所述核苷酸序列宿主细胞进行培养，收集表达的抗体，并通过protein a/g进行分离纯化得到，也可以使用mabselect或mabselect prisma进行分离纯化。

11、5、所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283在制备特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素b的试剂中的应用。

12、6、所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283在制备治疗、预防或诊断金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。

13、本发明的有益效果在于：本发明提供抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，该抗体通过培养转入信号序列的表达载体的宿主细胞来生成单克隆抗体，生成的单克隆抗体被分泌入上清液中，并且可以通过应用常规的层析技术分离纯化，优选用protein a/g进行分离纯化，制得的抗体可用于诊断或测定金黄色葡萄球菌肠毒素b，并且是有效的，并且所述抗体还可以预防或治疗由mrsa感染所引起的脓毒血症、肺炎，对金葡菌的预防、治疗和检测均具有重要意义。

技术特征：

1.抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，其特征在于：所述抗体hm0283包括重链和轻链，所述重链的可变区cdr1,cdr2和cdr3氨基酸序列分别如seq id no.1、seq id no.2和seq id no.3所示；所述轻链的可变区cdr1和cdr3氨基酸序列分别如seq id no.4和seq idno.5所示，cdr2的氨基酸序列为aas。

2.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，其特征在于：所述抗体hm0283的恒定区包括人源iga、igd、ige、igg或igm恒定区中的任意一种。

3.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，其特征在于：所述重链的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述轻链的氨基酸序列如seq id no.10所示。

4.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，其特征在于：所述抗体hm0283特异结合金黄色葡萄球菌肠毒素b或金黄色葡萄球菌肠毒素b突变蛋白。

5.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，其特征在于：抗体hm0283与seb结合的平衡解离常数不高于2×10-8m。

6.编码权利要求1～5任一项所述抗体hm0283的核苷酸序列。

7.含有权利要求6所述核苷酸序列的载体或宿主。

8.一种生产抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283，其特征在于：将含有编码权利要求6所述核苷酸序列宿主细胞进行培养，收集表达的抗体，并通过protein a/g进行分离纯化得到。

9.权利要求1～5任一项所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283在制备特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素b的试剂中的应用。

10.权利要求1～5任一项所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体hm0283在制备治疗、预防或诊断金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。

技术总结
本发明公开了抗金黄色葡萄球菌肠毒素B的抗体Hm0283及其应用，还提供了编码本发明抗体或其功能性片段的核酸分子、表达载体和宿主细胞，以及本发明抗体或其功能性片段的生产工艺。本发明还提供了包含本发明抗体或其功能性片段的免疫缀合物以及药物组合物，可以用于治疗、预防或诊断金黄色葡萄球菌的感染，将可成为金黄色葡萄球菌感染和控制耐药性发展研究领域的重要方向。

技术研发人员：敬海明,范鸿胤,曾浩,赵莉群,邹全明,宋振,罗崚心,欧阳雪,程平,罗萍
受保护的技术使用者：中国人民解放军陆军军医大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13