检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物及其应用的制作方法

本发明属于医学检测领域，具体涉及检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物。

背景技术：

1、皮疹常见于传染性疾病，如麻疹、猩红热、水痘、伤寒及流行性脑脊髓膜炎等。临床引起皮疹的疾病颇多。鉴别诊断通常包括天花、水痘、麻疹、细菌性皮肤感染、疥疮、药物过敏和梅毒。

2、猴痘是由猴痘病毒引起的一种罕见、散发的、天花样临床表现的急性传染病。在人类中，猴痘是一种散发性偶见疾病，其体征和症状类似天花，但病情通常较轻。猴痘感染者有动物接触史，临床表现最初表现类似“流感”的症状，随后皮肤出现疱疹、经历脓疱、结痂后留有瘢痕。

3、单纯疱疹病毒i型（hsv i型）原发感染常局限在口咽部，病毒通过呼吸道或直接接触患者唾液传播，引起口龈炎，表现为发热、咽喉痛，在牙龈和咽颊部出现成群疱疹，疱疹破溃后形成溃疡，大量病毒集中在病灶内，此外，病毒还可引起疱疹性角膜结膜炎、唇疱疹、疱疹性脑炎和皮肤疱疹性湿疹等疾病。

4、水痘-带状疱疹病毒是指在儿童初次感染引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数病人在成人后病毒再发而引起带状疱疹，故被称为水痘-带状疱疹病毒。初期局部皮肤有异常感，瘙痒、疼痛，进而出现红疹、疱疹，串连成带状，以躯干和面额部为多见，呈单侧分布，病程约3周左右，少数可达数月之久。

5、天花是由天花病毒引起的一种烈性传染病，也是在世界范围内被人类消灭的一种传染病。感染天花病毒后的潜伏期平均约为12天（7-17天）。发病早期出现发热、寒战、头痛、嗜睡、乏力、背部疼痛和肌痛等前驱症状。发病1-3天后出现皮疹。首先出现再面部，逐渐蔓延至四周，手心和脚掌均可出现皮疹。

6、由于在1980年消灭了天花并随后停止接种天花疫苗，猴痘已成为公共卫生领域最重要的正痘病毒。2022年5月初以来，已有20多个非地方性流行国家发现多例猴痘病例，且已出现人际传播。

7、按照中国疾控中心发布的《猴痘防控技术指南（2022 版》内容，诊断猴痘疾病时需要与其他发热出疹性疾病，如水痘、带状疱疹、单纯疱疹、麻疹、登革热等进行鉴别诊断，实现疑似病例早发现、早报告、早诊断、早调查、早处置。

8、国际上尚无一种通用的、安全快速的对天花和猴痘病毒感染的血清学诊断方法，而生物学鉴别诊断（病毒分离培养、电镜观察等）通常需要3-6d，且存在于生物安全危害隐患。而血清学诊断于临床诊断的灵敏度不高，不易诊断天花、猴痘及其他出皮疹的疾病的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，并根据猴痘病毒快速检测和鉴别的需求，提供一种检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，采用taqman-mgb探针法，利用5种荧光标记，结合mgb探针，可实现单管五重检pcr扩增，检测猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒i型（hsv i型）、水痘-带状疱疹病毒及人基因组基因，具有检测通量高，技术成熟、成本低、操作简单、结果判读简单易懂的特点。

2、根据本发明具体检测引起发热出疹性疾病病毒组合物，所述组合物包括用于检测猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒i型、水痘-带状疱疹病毒的引物和探针，其中，

3、检测猴痘病毒的引物、探针为：

4、seqid no.1:5'-tagaaaatggagcaaatgtca-3'；

5、seqid no.2:5'-ctacgggcgatgacagat-3'；

6、seqid no.3:5'-acgcagtaatgagtaa-3'；

7、检测天花病毒的引物、探针为：

8、seqid no.4:5'-aatattatgaatgagagataccttaatgt-3'；

9、seqid no.5:5'-acattttttatctgtgaaaacagg-3'；

10、seqid no.6:5'-tgtgtcaaaagtatacga-3'；

11、检测水痘-带状疱疹病毒株的引物、探针为：

12、seqid no.7:5'-gagattcacgaagattgcgg-3'；

13、seqid no.8:5'-cctcccagcacgctaacg-3'；

14、seqid no.9:5'-cgacttttatctaatggg-3'；

15、检测天单纯疱疹病毒i型的引物、探针为：

16、seqid no.10:5'-gtctggtggtcgtagggtg-3'；

17、seqid no.11:5'-atcttgtgggcgggact-3'；

18、seqid no.12:5'-tgtatctggcgttcg-3'。

19、根据本发明具体实施方式的组合物，其还包括人源内参基因gapdh的引物、探针，

20、seqid no.13:5'-atggacacgctcccctgac-3'；

21、seqid no.14:5'-tgagtccttccacgataccaaa-3'；

22、seqid no.15:5'-gcaatgcctcctgcaccaccaa-3'。

23、根据本发明具体实施方式的组合物，所述组合物还包括pcr反应液，扩增酶混合液、阳性对照和阴性对照。

24、优选的，所述组合物还包括10×pcr buffer、 mgcl2、 dutp/dntps mix、所述引物和探针、bsa、taq dna聚合酶、udg酶和灭菌超纯水。

25、根据本方具体实施方式的组合物，其中，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。

26、优选的，所述荧光基团包括fam、vic、rox、cy5和cy5.5，并且检测猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒i型、水痘-带状疱疹病毒的探针所标记的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。

27、本发明还提供上述组合物在制备检测引起发热出疹性疾病病毒的试剂中的应用，适用的临床标本类型为血清、血液标本、咽拭子、疱疹液、疱疹表面或渗出液拭子等。

28、本发明的有益效果：

29、本发明使用5色荧光技术，检测4种常见引物出疹疾病的病原体微生物，具体包括猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒1型和水痘-带状疱疹病毒，同时使用人源基因gapdh作为内对照，对标本采集、运输、保存、提取和加样等全过程进行质量监控，具有特异性好、便于运输和保存的特点。

30、本发明的组合物可用于上述病原微生物的同时检测或鉴定，为临床判断发热出疹性疾病提供辅助指导。

技术特征：

1.检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒i型、水痘-带状疱疹病毒的引物和探针，其中，

2.根据权利要求1所述的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，所述组合物还包括人源内参基因gapdh的引物、探针，

3.根据权利要求1所述的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，所述组合物还包括pcr反应液，扩增酶混合液、阳性对照和阴性对照。

4. 根据权利要求3所述的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，所述组合物还包括10×pcr buffer、 mgcl2、 dutp/dntps mix、所述引物和探针、bsa、taq dna聚合酶、udg酶和灭菌超纯水。

5.根据权利要求1所述的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。

6.根据权利要求4所述的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，所述荧光基团包括fam、vic、rox、cy5和cy5.5。

7.根据权利要求5所述的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，其特征在于，检测猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒i型、水痘-带状疱疹病毒的探针所标记的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。

8.权利要求1-7任一项所述的组合物在制备检测引起发热出疹性疾病病毒的试剂中的应用。

技术总结
本发明属于医学检测领域，具体涉及检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物。本发明的检测引起发热出疹性疾病病毒的组合物，包括用于检测猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒I型、水痘‑带状疱疹病毒的引物和探针，其可检测上述四中病毒，外加一个人源内参基因，采用5色荧光PCR技术，设计为单管多通道检测产品。从而，本发明使用5色荧光技术，实现检测4种常见引物出疹疾病的病原体微生物，具体包括猴痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒1型和水痘‑带状疱疹病毒，同时使用人源基因GAPDH作为内对照，对标本采集、运输、保存、提取和加样等全过程进行质量监控，具有特异性好、便于运输和保存的特点。

技术研发人员：柳辉,毕德熙,沈亚南,窦静雅,何犇,郑文果,毕少辉
受保护的技术使用者：北京康美天鸿生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12