一种识别柯萨奇病毒A2和A4的单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及分子生物学和免疫学分析，具体涉及一种识别柯萨奇病毒a2和a4(cv-a2和cv-a4)的单克隆抗体7h11e及其应用。

背景技术：

1、手足口病(hand,foot and mouth disease，hfmd)是由多种人肠道病毒引起的法定丙类传染病，以发热和手、足、口腔等部位出现皮疹等症状，多见于5岁以下儿童，重症患者可出现肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症，甚至死亡。近年来，肠道病毒引起的手足口病呈聚集性爆发，多病毒交叉感染等特点，其中肠道病毒a种群病毒如柯萨奇病毒(coxsackievirus，cv)a2、a4、a5、a6、a10、a16、肠道病毒(enterovirus，ev)a71等是引起婴幼儿手足口病的主要病原体。

2、目前，仅有单价的ev-a71全病毒灭活疫苗上市用于预防手足口病，而柯萨奇病毒a种群4型和2型(cv-a4和cv-a2)同属小rna病毒科，肠道病毒属，也是引起手足口病、疱疹性咽峡炎和急性迟缓性麻痹等疾病的重要病原体，但目前关于其相关的研究则比较少。因此，研究针对cv-a4和cv-a2等其它手足口病肠道相关病毒的特异性或广谱性的单克隆抗体，对临床样品病毒快速检测、实验室病毒鉴别、功能研究和疫苗研发的质量控制及疫苗成品抗原定量等方面具有重要价值。

技术实现思路

1、基于此，本发明的目的之一在于提供一种识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有seq id no.9所示的重链互补决定区cdr1、seq id no.10所示的重链互补决定区cdr2、seq id no.11所示的重链互补决定区cdr3，以及seq id no.12所示的轻链互补决定区cdr1、seq id no.13所示的轻链互补决定区cdr2、seq id no.14所示的轻链互补决定区cdr3。

2、优选的，所述单克隆抗体具有seq id no.7所示的氨基酸序列的重链；和/或，所述单克隆抗体具有seq id no.8所示的氨基酸序列的轻链。

3、优选的，所述单克隆抗体的重链氨基酸序列为seq id no.7所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的氨基酸序列或与seq id no.7所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列；和/或，所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列为seq id no.8所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的氨基酸序列或与seq idno.8所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列。

4、优选的，所述单克隆抗体为igg2b亚型。

5、该单克隆抗体可以特异性识别柯萨奇病毒a2和a4，而不结合其以外的其它肠道病毒，可以进行间接免疫荧光法、免疫印迹法及酶联免疫吸附法等基础实验，对柯萨奇病毒a2和a4引起的手足口病、疱疹性咽峡炎和急性迟缓性麻痹等疾病都具有相同的抗原高效价结合。

6、本发明的目的之二在于保护编码上述识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体的多核苷酸分子。

7、优选的，所述多核苷酸分子具有seq id no.5所示的核苷酸序列；和/或，所述多核苷酸分子具有seq id no.6所示的核苷酸序列。

8、本发明的目的之三在于保护一种用于检测柯萨奇病毒a2和a4的试剂盒，所述试剂盒包括上述的单克隆抗体或上述多核苷酸分子编码的单克隆抗体。

9、本发明的目的之四在于保护上述单克隆抗体或上述多核苷酸分子编码的单克隆抗体在制备检测柯萨奇病毒a2和a4中的单种或两种的试剂或试剂盒中的应用。

10、本发明的目的之五在于保护上述单克隆抗体或上述多核苷酸分子编码的单克隆抗体在制备抑制、预防、治疗柯萨奇病毒a2和a4的单种或两种药物中的应用。

11、本发明的目的之六在于保护上述单克隆抗体或上述多核苷酸分子编码的单克隆抗体在柯萨奇病毒a2和a4的vp1蛋白及病毒结构构象改变研究中的应用。如cv-a2和cv-a4病毒颗粒的形态构象转变中间体功能和n末端氨基酸在穿入细胞膜、释放病毒rna至胞内的基础研究。

12、本发明所提供的单克隆抗体是以柯萨奇病毒a种群4型(cv-a4)病毒实心颗粒(fp)免疫balb/c小鼠，制备并筛选杂交瘤细胞后纯化获得，其为能够特异性识别柯萨奇病毒a组2型和4型(cv-a2和cv-a4)的单克隆抗体，为igg2b亚型非中和抗体，能够特异性结合cv-a2和cv-a4的结构蛋白vp1 n末端第1-15个氨基酸，其中，vp1 n端氨基酸第2-4(dai)和6(d)，为该单克隆抗体的特异性结合cv-a4 vp1 n端氨基酸的足迹。

13、该单克隆抗体可与偶联物结合(辣根过氧化物酶或异硫氰酸荧光素等)用于直接或间接检测或快速诊断，在临床样本快速经济检测、实验室鉴别、病毒滴定、疫苗制备中间品及产品的抗原定量和结构蛋白vp1功能和抗病毒药物靶点等研发、基于抗原抗体反应的其它应用等方面，具有重要研究和应用价值。

技术特征：

1.一种识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体具有seqid no.9所示的重链互补决定区cdr1、seq id no.10所示的重链互补决定区cdr2、seq idno.11所示的重链互补决定区cdr3，以及

2.根据权利要求1所述的识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体具有seq id no.7所示的氨基酸序列的重链；和/或，所述单克隆抗体具有seq idno.8所示的氨基酸序列的轻链。

3.根据权利要求2所述的识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链氨基酸序列为seq id no.7所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的氨基酸序列或与seq id no.7所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列；和/或，所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列为seq id no.8所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的氨基酸序列或与seq id no.8所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1～3任一项所述的识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为igg2b亚型。

5.编码权利要求1或2或3所述的识别柯萨奇病毒a2和a4的单克隆抗体的多核苷酸分子。

6.根据权利要求5所述的多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子具有seq idno.5所示的核苷酸序列；和/或，所述多核苷酸分子具有seq id no.6所示的核苷酸序列。

7.用于检测柯萨奇病毒a2和a4的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2或3或4所述的单克隆抗体或权利要求5或6所述的多核苷酸分子编码的单克隆抗体。

8.权利要求1或2或3或4所述的单克隆抗体或权利要求5或6所述的多核苷酸分子编码的单克隆抗体在制备检测柯萨奇病毒a2和a4中的单种或两种的试剂或试剂盒中的应用。

9.权利要求1或2或3或4所述的单克隆抗体或权利要求5或6所述的多核苷酸分子编码的单克隆抗体在制备抑制、预防、治疗柯萨奇病毒a2和a4的单种或两种药物中的应用。

10.权利要求1或2或3或4所述的单克隆抗体或权利要求5或6所述的多核苷酸分子编码的单克隆抗体在柯萨奇病毒a2和a4的vp1蛋白及病毒结构构象改变研究中的应用。

技术总结
本发明涉及分子生物学和免疫学分析技术领域，具体涉及一种能够识别柯萨奇病毒A2和A4的单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体具有SEQ IDNO.9所示的重链互补决定区CDR1、SEQ ID NO.10所示的重链互补决定区CDR2、SEQ ID NO.11所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQ ID NO.12所示的轻链互补决定区CDR1、SEQ ID NO.13所示的轻链互补决定区CDR2、SEQ ID NO.14所示的轻链互补决定区CDR3，其能够特异性结合柯萨奇病毒A2和A4的结构蛋白VP1N末端的前15个氨基酸，可以用于临床患者样品检测、病毒分离株实验室抗体鉴定以及生产中间品及产品中柯萨奇病毒A2和A4抗原的定量检测。

技术研发人员：申硕,靳卫平,田宇璇,魏真妮,汪梦俊,付烈,吕诗韵,郭靖,孟胜利,王泽鋆
受保护的技术使用者：武汉生物制品研究所有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13