一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法

本发明属于微生物发酵，具体涉及一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法。

背景技术：

1、天麻是我国名贵的中药材，具有丰富的药用价值，不仅具有治疗肢体痉挛，清肝解热和安心定神等功效，常用于治疗惊厥、癫痫、头晕等症状，还具有抗衰老、健脑增智等保健作用。蜜环菌与天麻为共生关系，其对天麻幼苗、营养器官和生殖器官的生长发育有显著影响，天麻自身无光合作用，需从蜜环菌中获取营养物质而进行生长发育。

2、蜜环菌隶属于真菌界、担子菌门、担子菌纲、伞菌目、属白蘑(口蘑)科、蜜环菌属，为常见食药用菌，多生长在榛材岗上。目前，蜜环菌的生产多采用固体接种、固体发酵的方式，该生产方式存在效率低、生产周期长，投入成本较高等多种弊端，液体发酵具有生产耗时短，接种简便，制备量大等优点。因此，采用液体接种和液体发酵方式生产蜜环菌。此外，为了提高蜜环菌生物量，许多研究者从培养基筛选、发酵工艺、添加外来刺激物等多个方面进行了液体深层发酵的研究，以期得到更多的发酵产物。

3、然而，常规液体培养过程中蜜环菌存在生长周期长、易污染、形成的菌丝球大(菌丝球直径通常为5～10mm)且数量少，菌丝活力差等缺点，难以满足现阶段蜜环菌快速繁殖、生产的要求。因此，本领域仍然需要一种能缩短发酵周期，使蜜环菌快速繁殖，提高蜜环菌生物量和菌丝活力的天麻共生蜜环菌培养方法。而蜜环菌种子液与密环菌的生产效率密切相关，目前未见能够提高蜜环菌生产效率的蜜环菌种子液制备方法的报道。

技术实现思路

1、本发明的目的提供了一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法，该蜜环菌种子液菌丝活力高，生产效率高。

2、本发明提供了一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法，包括：将蜜环菌菌苔挑入液体培养基，进行第一次匀浆后培养得到一级种子液，对所述一级种子液进行第二次匀浆后培养得到二级种子液，对所述二级种子液进行第三次匀浆，得到蜜环菌发酵种子液；

3、所述第一次匀浆、第二次匀浆和第三次匀浆的转速分别为7000～9000r/min，所述第一次匀浆、第二次匀浆和第三次匀浆的时间分别为30～90s。

4、优选的，所述第一次匀浆所得产物中的菌丝长度、所述第二次匀浆所得产物中的菌丝长度和蜜环菌种子液中的菌丝长度分别为50～1000μm。

5、优选的，所述培养的温度为25～28℃，培养的转速为150～200r/min，培养的时间为2～5d。

6、优选的，所述一级种子液第二次匀浆后接种到液体培养基中培养；所述一级种子液的接种量为液体培养基体积的2～10％。

7、优选的，所述液体培养基包括pda液体培养基。

8、本发明提供了一种蜜环菌的发酵方法，包括如下步骤：

9、对上述技术方案所述的制备方法得到的蜜环菌发酵种子液进行发酵培养，得到蜜环菌菌液。

10、优选的，所述发酵培养的溶氧值为20％～60％，所述发酵培养的温度为25～28℃，时间为80～180h。

11、优选的，得到所述蜜环菌菌液后，还包括蜜环菌菌液匀浆后进行培养。

12、本发明提供了上述技术方案所述的方法得到的蜜环菌种子液或上述技术方案所述的发酵方法得到的蜜环菌菌液在缩短蜜环菌的培养时间和/或增加蜜环菌生物量中的应用。

13、本发明的有益效果：本发明提供了一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法，包括：将蜜环菌菌苔挑入液体培养基，进行第一次匀浆后培养得到一级种子液，对所述一级种子液进行第二次匀浆后培养得到二级种子液，对所述二级种子液进行第三次匀浆，得到蜜环菌发酵种子液；所述第一次匀浆、第二次匀浆和第三次匀浆的转速分别为7000～9000r/min，所述第一次匀浆、第二次匀浆和第三次匀浆的时间分别为30～90s。本发明所述制备方法得到的蜜环菌种子液的菌丝小相比于蜜环菌菌丝球更加易于吸收培养基中的营养物质，菌丝活力高且生长快，应用该蜜环菌种子液进行蜜环菌发酵培养可以提高密环菌生产效率。实施例结果表明：利用本发明的蜜环菌种子液进行发酵培养蜜环菌生物量干重为16.47～18.39g/l，发酵培养得到的蜜环菌菌丝体菌液匀浆后接种在菌瓶中，接种后40d内生长满瓶，蜜环菌生产效率高。

技术特征：

1.一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法，其特征在于，包括：将蜜环菌菌苔挑入液体培养基，进行第一次匀浆后培养得到一级种子液，对所述一级种子液进行第二次匀浆后培养得到二级种子液，对所述二级种子液进行第三次匀浆，得到蜜环菌发酵种子液；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一次匀浆所得产物中的菌丝长度、所述第二次匀浆所得产物中的菌丝长度和蜜环菌种子液中的菌丝长度分别为50～1000μm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述培养的温度为25～28℃，培养的转速为150～200r/min，培养的时间为2～5d。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一级种子液第二次匀浆后接种到液体培养基中培养；所述一级种子液的接种量为液体培养基体积的2～10％。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述液体培养基包括pda液体培养基。

6.一种蜜环菌的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的蜜环菌发酵方法，其特征在于，所述发酵培养的溶氧值为20％～60％，所述发酵培养的温度为25～28℃，时间为80～180h。

8.根据权利要求6所述的蜜环菌发酵方法，其特征在于，得到所述蜜环菌菌液后，还包括蜜环菌菌液匀浆后进行培养。

9.权利要求1～5任一项所述的方法得到的蜜环菌种子液或权利要求6～8任一项所述的发酵方法得到的蜜环菌菌液在缩短蜜环菌的培养时间和/或增加蜜环菌生物量中的应用。

技术总结
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法。本发明提供了一种多级匀浆制备蜜环菌种子液的方法，包括：将蜜环菌菌苔挑入液体培养基并进行第一次匀浆后培养得到一级种子液，对所述一级种子液进行第二次匀浆后培养得到二级种子液，对所述二级种子液进行第三次匀浆后得到蜜环菌发酵种子液。本发明所述的制备方法得到的蜜环菌发酵种子液能显著提高蜜环菌的发酵生产效率，利用蜜环菌种子液发酵制备的蜜环菌菌液的蜜环菌生物量高，菌丝球体积小，其菌丝活力高，同时缩短发酵时间。

技术研发人员：林连兵,罗成莹,缪家云,李世波,罗智文,刘佳佳,李宗扬
受保护的技术使用者：昆明理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13