一种ASFVp30蛋白单克隆抗体及其应用

本发明属于微生物检测，具体涉及一种asfvp30蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟(africanswine fever,asf)是由非洲猪瘟病毒(asf virus,asfv)引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，可感染不同年龄的家猪和野猪，表现为急性、亚急性、慢性和亚临床等多种形式。分子流行病学调查显示，猪场流行的asfv越来越复杂，毒株不断发生遗传演化，除了导致急性出血性死亡的高致病性毒株，也有致病性较低、临床症状温和的基因缺失或突变毒株流行。这些低致病性毒株的慢性或亚临床感染，可造成asf的长期流行与危害。asf于1921年在肯尼亚首次发现，随后在非洲流行；1957年从非洲传到了葡萄牙，并在欧洲多个国家迅速蔓延，同时期美洲如古巴、巴西、海地等国家也流行过该病；2007年，asf传到了格鲁吉亚和俄罗斯，并在东欧多个国家蔓延。长期以来asf是全球养猪业发展和相关产品贸易往来的重要威胁，世界卫生组织(world organization for animalhealth，oie)将其列为法定报告动物疫病。自2018年asf首次传入中国以来，该病在国内迅速蔓延流行，截止到2019年即该病流行一周年时，asf导致中国损失1.909亿头猪，其中母猪2940万头，生猪存栏量下降40.5％，根据有的学者推算asf造成的直接经济损失高达1万亿人民币。

2、多年来，人们不断努力地研究不同类型的asf疫苗，但迄今仍然没有有效、安全的疫苗用于临床。对猪群进行监测、检测和剔除感染猪是目前防控asf的主要措施。

3、因此，研发一种可以检测asfv抗体的方法对于生猪养殖具有重大意义。

技术实现思路

1、针对以上问题，本发明目的之一在于提供一种asfv p30蛋白单克隆抗体，基于该asfv p30蛋白单克隆抗体，可以使用阻断elisa方法对非洲猪瘟病毒抗体进行检测，基于该asfv p30蛋白单克隆抗体建立的方法特异性强，灵敏度高，稳定性好，准确率高。

2、为了达到上述目的，本发明可以采用以下技术方案：

3、本发明一方面提供一种asfv p30蛋白单克隆抗体，其能够识别的p30蛋白的抗原表位115aa-134aa。

4、本发明另一方面提供一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的elisa试剂，其包括上述的asfv p30蛋白单克隆抗体。

5、本发明另一方面提供一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的elisa试剂盒，其包括上述的asfv p30蛋白单克隆抗体或上述的用于检测非洲猪瘟病毒抗体的elisa试剂。

6、本发明再一方面提供一种检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，其包括：将上述的asfvp30蛋白单克隆抗体作为被阻断酶标记抗体使用阻断elisa方法进行检测。

7、本发明再一方面提供一种上述的asfv p30蛋白单克隆抗体在检测非洲猪瘟病毒及其抗体中的应用。

8、本发明中的杂交瘤细胞株p30-g10的保藏信息为：保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cctcc)；保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号；保藏日期：2022年03月08日；保藏编号：cctcc no:c202329。

9、本发明有益效果包括：基于本发明提供的asfv p30蛋白单克隆抗体作为被阻断酶标抗体对非洲猪瘟病毒抗体构建阻断elisa方法进行检测，该检测方法与csfv、prrsv及prv等抗血清均无交叉反应；最低能检出1∶512稀释的阳性血清特异性抗体；批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.116％和5.187％；与商品试剂盒的阳性符合率92.31％，阴性符合率92.38％，总符合率为92.36％。

技术特征：

1.一种asfv p30蛋白单克隆抗体，其特征在于，其能够识别的p30蛋白的抗原表位115aa-134aa。

2.根据权利要求1所述的asfv p30蛋白单克隆抗体，其特征在于，抗原表位多肽包括如seq id no.1所示序列。

3.一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的elisa试剂，其特征在于，包括权利要求1或2中任一权利要求所述的asfv p30蛋白单克隆抗体。

4.一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的elisa试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的asfv p30蛋白单克隆抗体或权利要求4所述的用于检测非洲猪瘟病毒的elisa试剂。

5.一种检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，其特征在于，包括：将权利要求1或2所述的asfvp30蛋白单克隆抗体作为被阻断酶标记抗体使用阻断elisa方法进行检测。

6.根据权利要求5所述的检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，其特征在于，asfv p30蛋白的包被浓度为0.5μg/ml，待检血清和被酶标阻断抗体的稀释倍数分别为1∶2和1∶1000；和/或封闭液为含5％脱脂奶粉pbst。

7.根据权利要求5或6所述的检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，其特征在于，37℃下，asfvp30抗原-待检血清的反应时间分别为60min；待检血清-酶标阻断抗体的反应时间为45min。

8.根据权利要求7所述的检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，其特征在于，当阻断率≥26.58％，待检血清判为非洲猪瘟病毒抗体阳性；当21.42％≤阻断率＜26.58％时，待检血清判为可疑；当阻断率＜21.42％时，待检血清判为阴性。

9.权利要求1或2所述的asfv p30蛋白单克隆抗体在检测非洲猪瘟病毒及其抗体中的应用。

10.一种分泌权利要求1或2所述的asfv p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为cctcc no:c202329。

技术总结
本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种ASFVp30蛋白单克隆抗体及其应用。该ASFVp30蛋白单克隆抗体其能够识别p30蛋白抗原表位的115aa‑134aa。基于该ASFVp30蛋白单克隆抗体建立的阻断ELISA方法对非洲猪瘟病毒抗体进行检测时，与CSFV、PRRSV及PRV等抗体均无交叉反应；最低能检出1∶512倍稀释的阳性血清特异性抗体；批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.116％和5.187％；与商品试剂盒的阳性符合率92.31％，阴性符合率92.38％，总符合率为92.36％。

技术研发人员：宋勤叶,马天天,袁晨,冯亚文,逯纪成,孙泰然
受保护的技术使用者：河北农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15