一种高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、NTM感染的circRNA标志物及检测试剂和试剂盒

本发明属于结核病检测领域，具体涉及一种高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的circrna标志物及检测试剂和试剂盒。

背景技术：

1、结核病是慢性传染性疾病。目前全球已有20亿人感染结核菌，活动性结核患者达1500万。2010年全国结核病流行病学抽样调查结果显示，我国结核病疫情特点是：感染人数多，死亡人数多。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。人与人之间呼吸道传播是本病传染的主要方式。传染源是接触排菌的肺结核患者。我国是结核病高负荷国家之一，且是人口大国，进行结核病普查显然是不现实的。因此，对可疑患者进行结核的早期诊断是一项值得考虑的举措。传统的结核确诊手段，需要考虑细菌学、临床表现、分子生物技术等许多方面，如：1.痰涂片抗酸染色查抗酸杆菌。2.痰培养找结核杆菌：近年发展起来的分枝杆菌快速培养、鉴定和药物敏感性检测技术使原来培养所需时间大大缩短。3.结核菌素(现一般用tb-ppd试验)。4.抽血查结核抗体。5.结核特异性反应t细胞的细胞因子释放试验：t-spot及quantiferon-tb检测方法，有助于鉴别结核分枝杆菌感染，区别于卡介苗接种和其他大多数非结核分枝杆菌感染。6.结核杆菌聚合酶链反应(tb-pcr)+探针检查：分枝杆菌基因芯片检查技术、巢式pcr+反向点杂交分枝杆菌鉴定及耐药基因检测技术，使结核菌鉴定及药物敏感试验时间缩短到只需几个小时。

2、目前的鉴别诊断方法对于区分肺结核与肺癌、肺炎、ntm，及正常人存在各种不足。目前临床应用的主要诊断肺结核的方法中：1.细菌培养缓慢：细菌培养阳性仍然是临床肺结核诊断的金标准，但由于结核菌缓慢的生长特点，培养一般需要4-8周且培养阳性率不高，在临床的应用存在很大的局限性。2.灵敏度有待提高：痰涂片、抗酸染色、药敏试验、结核抗体检测存在着特异性差、灵敏度低等局限性。3.成本过高：xpert·mtb对结核的诊断较为准确，但费用较高。4.特异性有待提高：经典的结核菌素试验已经应用了100年，但是该方法敏感性低，特异性差，不能鉴别卡介苗接种者，血清结核抗体检测等方法的敏感性和特异性不理想。5.普适性有待提高：近几年兴起的γ干扰素释放试验(igra)、结核杆菌聚合酶链反应(tb-pcr)+探针检查、结核特异性反应t细胞的细胞因子释放试验如t-spot及quantiferon-tb检测方法的试剂昂贵，技术复杂，需要特殊的设备和培训，不适合基层医疗单位或者现场应用。

3、我们亟需寻找在血液中具有高特异性和灵敏性的基于血清外泌体的生物标志物以实现肺结核的早期诊断。circrna由于其共价闭合环状结构，与其他rna相比，具有结构稳定、不易降解、能长时间发挥作用等特点。不同疾病中其表达量也有所不同，具有特异性，近期在肝癌、胃癌等恶性消化系统肿瘤中相继发现了具有早期诊断价值的circrna，但是在结核分枝杆菌感染领域尚未见circrna相关报道。因此，寻找一种高特异性、高灵敏度结核诊断的生物标志物外泌体circrna是该诊断方法的核心问题。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明提供一种高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的circrna标志物及检测试剂和试剂盒，提高肺结核的诊断效能，寻找高效稳定的circrna，提高肺结核早期诊断效能。提高肺结核与ntm、肺癌、肺炎患者及健康人的鉴别诊断效能，提高普适性，降低操作难度，同时降低对实验室器械的需求，以便结核的实验诊断可下放至基层。减少标志分子组合数量，降低成本。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：一种circrna，其核苷酸序列如seq idno.1所示。

3、一种高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的circrna标志物，所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、circrna标志物在制备作为高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染检测标志物中的应用，所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

5、检测circrna标志物的实际在制备用于诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的试剂盒中的应用，所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

6、进一步的，所述试剂包括seq id no.2-3.所示的引物。

7、一种试剂盒，包括检测circrna标志物的试剂，所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

8、进一步的，所述试剂包括seq id no.2-3所示的引物。

9、本发明高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的circrna标志物及检测试剂和试剂盒的有益之处：

10、1.circrna在血浆外泌体中含量丰富、性质稳定、可定量检测

11、本发明首次筛选确定了一种血浆外泌体高效肺结核诊断与鉴别诊断靶点生物标记物，具有高灵敏度、高准确度和高稳定性，可以有效筛选结核分枝杆菌感染人群。

12、2.本发明结合了基础与临床、理论和应用，有望提高早期肺结核临床诊断率，改善患者治疗效果

13、本发明通过液体活检的方式进行，可以实现无创、实时监测，成本低、使用方便、稳定性好。可以进行高效率的临床诊断及鉴别诊断，提高早期诊断率，能尽早开始治疗，减少患者治疗疗程，以使其获得更好疗效。

14、3.检测指标指示准确度高，受试者工作特征曲线(roc)下面积(auc)为1，远高于现有常见指标

15、本发明所提供的生物标志物为外泌体circrna生物标志物，相比于血浆中rna和蛋白质，受益于外泌体膜结构的保护，分子表达水平更加稳定，具有更高灵敏性和特异性，具有重要临床应用价值。

16、4.检测指标微创价廉，可应用于人群筛查和临床检测，易于推广应用

17、利用本发明的技术方案，可在治疗开始之前，仅通过少量血液样本即可实现，相较于实时荧光定量pcr检测价格昂贵、恒温扩增检测易产生假阳性、基因探针(基因芯片)检测操作繁琐、价格昂贵，外泌体circrna检测生产成本低，对实验室要求较低，普及性更强。

技术特征：

1.一种circrna，其特征是：其核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的circrna标志物，其特征在于：所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.circrna标志物在制备作为高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染检测标志物中的应用，其特征在于：所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

4.检测circrna标志物实际在制备用于诊断和鉴别肺结核与肺癌、ntm感染的试剂盒中的应用，其特征在于，所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述试剂包括seq id no.2-3所示的引物。

6.一种试剂盒，其特征在于：包括检测circrna标志物的试剂，所述circrna标志物核苷酸序列如seq id no.1所示。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂包括seq id no.2-3所示的引物。

技术总结
本发明属于结核病检测领域，具体涉及一种高效诊断和鉴别肺结核与肺癌、NTM感染的circRNA标志物及检测试剂和试剂盒。circRNA标志物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。一种试剂盒，包括检测circRNA标志物的试剂，所述circRNA标志物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述试剂包括SEQ ID NO.2‑3所示的引物。本发明所提供的circRNA生物标志物对于人肺结核诊断与鉴别具有很高的灵敏度和特异性，可以作为新型的生物标志物用于肺结核的检测。本发明为临床医生快速判断肺结核患者的病情，为提高这类患者的临床治疗效果奠定基础，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助，具有较好的应用价值和前景。

技术研发人员：伊正君,付玉荣,宋桃花,姜吉亮,杨国儒,曲梅花,杨致亭
受保护的技术使用者：潍坊医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13