一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法

本发明涉及农业病虫害防治，具体来说涉及一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法。

背景技术：

1、柑橘黄龙病又称黄梢病、黄枯病、青果病，是一种系统性病害，它由韧皮部杆菌属细菌(candidatus liberobacter)侵染引起，是柑橘产业中最具毁灭性的病害之一。当前黄龙病病原菌暂无法离体培养，严重限制了该病原菌的生物学研究。黄龙病病原菌在植株体内分布不均，在一定程度上影响药剂的筛选。

2、目前仍没有有效防治柑橘黄龙病的药剂，防治柑橘黄龙病主要使用无菌树苗、挖除病树及防治木虱等方法，但是这些效率低且成本较高。因此，发现治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法是快速筛选药剂的基础，也是防治柑橘黄龙病中亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种能减小柑橘黄龙病病原菌在植株体内分布不均对药剂筛选带来的误差，简单、快速、直观并且结果可靠的治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

3、本发明的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，包括以下步骤：

4、(1)采集黄龙病枝条：采集田间严重感染柑橘黄龙病的枝条，并且均匀喷洒速效生根剂至淋湿叶片；

5、(2)枝条叶片右边半叶用毛刷均匀涂上药剂，同时叶片左边半叶涂上不含药剂的溶剂作为对照组(ck)，放入恒温培养箱中培养3天，培养条件为24℃，95％的湿度，12小时光照，12小时黑暗；

6、(3)每隔24小时均匀喷洒一次速效生根剂；

7、(4)培养3天后，取出处理后的枝条，每根枝条随机摘取三片叶片，分别收集左右两半叶片用锡箔纸包好并做好标签，用液氮速冻后-80℃保存；

8、(5)用trizol法提取叶片rna，反转录成cdna，用actin/clas引物进行qpcr检测黄龙病含量，并计算治疗效果：

9、治疗效果＝(1-药剂处理半叶的相对含菌量)*100％。

10、上述的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，其中：步骤(1)中选取的感染柑橘黄龙病的枝条应该具有长势接近或生长周期相同的叶片。

11、上述的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，其中：步骤(2)中应待叶片表面水挥发干后，然后在叶片右半边刷上药剂。

12、上述的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，其中：步骤(4)中收集左右两半叶片去除中间的叶脉。

13、本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明采用同一个叶片的左右半边进行对比，能有效减小含菌量不均对治疗效果计算带来的误差。可用于快速筛选治疗柑橘黄龙病药剂，所占地空间小，可操作性很强，适合进行大量药剂的筛选，显著减轻工作强度；所用时间短，短期就能测定出治疗效果。

技术特征：

1.一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，其中：步骤（1）中选取的感染柑橘黄龙病的枝条应该具有长势接近或生长周期相同的叶片。

3.如权利要求1所述的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，其中：步骤（2）中应待叶片表面水挥发干后，然后在叶片右半边刷上药剂。

4.如权利要求1所述的一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，其中：步骤（4）中收集左右两半叶片去除中间的叶脉。

技术总结
本发明公开了一种治疗柑橘黄龙病药剂的快速筛选方法，包括：采集田间严重感染柑橘黄龙病的枝条，均匀喷洒速效生根剂至淋湿叶片；枝条叶片右边半叶用毛刷均匀涂上药剂，同时叶片左边半叶涂上不含药剂的溶剂作为对照组，放入恒温培养箱中培养3天，培养条件为24℃，95％的湿度，12小时光照，12小时黑暗，每隔24小时均匀喷洒一次速效生根剂，取出处理后的枝条，每根枝条随机摘取三片叶片，分别收集左右两半叶片用锡箔纸包好并做好标签，用液氮速冻后‑80℃保存；用Trizol法提取叶片RNA，反转录成cDNA，用Actin/Clas引物进行qPCR检测黄龙病含量，并计算治疗效果。本发明能减小柑橘黄龙病病原菌在植株体内分布不均对药剂筛选带来的误差，简单、快速、直观并且结果可靠。

技术研发人员：陈吉祥,罗鑫,陈艺方,张勇,刘兴,邹跃
受保护的技术使用者：贵州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13