可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法与流程

本发明涉及微生物培养，尤其涉及可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法。

背景技术：

1、微生物去除硫化氢污染的方法是近年来发展起来的一种新型的方法，已经被应用在污水中的硫化氢处理中。能够有效的去除硫化氢污染的微生物是硫氧化菌。不同类型的化能自养型硫氧化菌具有不同的形态、生理和生态特征，他们能够将硫离子、硫、硫代硫酸盐在有氧气存在的情况下将硫离子氧化从而实现化能自养。由于化能自养型硫氧化菌生长的环境比较容易实现，而且能够有效的将硫化氢转化成无毒的硫酸盐，所以已经被应用在生活污水中硫化氢的去除上。

2、但是，在石油、天然气等无氧工作环境中的硫化氢的去除上还没有被应用。其主要原因是不存在微生物代谢所必须的氧气。厌氧环境下，可以通过光能自养型硫氧化菌来去除体系中的硫离子。光能自养型硫氧化菌有绿硫菌和紫硫菌两大类。绿硫菌能够利用光能自养，以co2或者碳酸盐作为碳源，氧化h2s为单质硫并排出细胞外。

3、由于紫硫菌将硫继续氧化成硫酸根过程中不仅不会将单质硫进行回收利用，而且会产生大量的氢离子，能够严重腐蚀设备，因此需要避免使用紫硫菌。而现有的绿硫菌的培养方法培养出的单纯的同一种绿硫菌在大量细菌存活的环境中很难与其它微生物竞争，作为微生物主体存活。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，包括以下步骤：

4、步骤1：取水样，密封备用；

5、步骤2：制备无机盐溶液：称取磷酸盐化合物、mgcl2·6h2o、cacl2·2h2o和蒸馏水，充分混合，并调节ph至6.8-7.3，高温灭菌后，得到无机盐溶液，冷却待用；

6、步骤3：制备营养源溶液：称取磷酸盐化合物和na2s·9h2o，分别用除氧蒸馏水溶解后，混合并过滤除菌，得到营养源溶液，储存在灭菌的容器中，于冰箱中冷藏待用；

7、步骤4：制备氯化铵溶液：称取nh4cl，在紫外灯下灭菌后使用除氧蒸馏水溶解，得到无菌nh4cl溶液，移入灭菌瓶中密封保存；

8、步骤5：制备无机盐培养液：按照10：1：1的比例称取无机盐溶液、营养源溶液和氯化铵溶液，混合得到无机盐培养液；

9、步骤6：制备富集溶液：将步骤1中的水样接种于上述无机盐培养液中，开始富集时接种量按照体积比1：1接种，将接种得到的富集溶液放入容器中，并封口，将容器置于带光照的培育装置中进行培养；

10、步骤7：上述富集溶液培养一周后，按照富集溶液：无机盐培养液的体积比为1：5的量移入到新的灭菌后的容器中，充满容器并封口，将容器置于带光照的培养装置中；

11、步骤8：重复步骤7的程序，直至两个月后稳定后应用；

12、步骤9：稳定后，每隔一周更换一次无机盐培养液，每次均在更换培养基时进行取用。

13、优选的，步骤1中，从污水处理厂、生活废水出口处以及处理过程中厌氧区进行取样，且取样处位于液面0.5米深处。

14、优选的，步骤2和步骤3中的磷酸盐化合物为nahco3或khco3。

15、优选的，步骤2中，高温灭菌的温度为121℃，高温灭菌时长为20分钟。

16、优选的，步骤3中，使用0.22μm微孔滤膜进行过滤除菌。

17、优选的，步骤6中，在接种前，无机盐培养液用无菌氮气充分除氧。

18、优选的，步骤6和步骤7中，培养装置中温度稳定在28℃-32℃，光照强度约在3000lx-5000lx。

19、优选的，步骤9中，每隔一周更换一次无机盐培养液的具体方法为：倒出4/5的溶液，并用新的无机盐培养液加满后密封。

20、本发明的有益效果为：

21、本发明的微生物培育方法中，通过富集培养出来的以绿硫菌为主的混合微生物群体，由于共生原因，绿硫菌的生存能力提升，在应用于废水除硫时，混合微生物群体中的绿硫菌能够在大量细菌存活的环境中更好的与其他微生物竞争，并作为微生物主体存活，具有竞争优势，并能够在厌氧环境中有效去除废水中的硫离子。

技术特征：

1.可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤1中，从污水处理厂、生活废水出口处以及处理过程中厌氧区进行取样，且取样处位于液面0.5米深处。

3.根据权利要求1所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤2和步骤3中的磷酸盐化合物为nahco3或khco3。

4.根据权利要求1所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤2中，高温灭菌的温度为121℃，高温灭菌时长为20分钟。

5.根据权利要求1所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤3中，使用0.22μm微孔滤膜进行过滤除菌。

6.根据权利要求1所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤6中，在接种前，无机盐培养液用无菌氮气充分除氧。

7.根据权利要求1所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤6和步骤7中，培养装置中温度稳定在28℃-32℃，光照强度约在3000lx-5000lx。

8.根据权利要求1-7任一所述的可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，其特征在于，步骤9中，每隔一周更换一次无机盐培养液的具体方法为：倒出4/5的溶液，并用新的无机盐培养液加满后密封。

技术总结
本发明涉及微生物培养技术领域，公开了可在厌氧环境下脱除废水中硫离子的微生物的培养方法，包括以下步骤：取水样；制备无机盐溶液；制备营养源溶液；制备氯化铵溶液；制备无机盐培养液；制备富集溶液。本发明的微生物培育方法中，通过富集培养出来的以绿硫菌为主的混合微生物群体，由于共生原因，绿硫菌的生存能力提升，在应用于废水除硫时，混合微生物群体中的绿硫菌能够在大量细菌存活的环境中更好的与其他微生物竞争，并作为微生物主体存活，具有竞争优势，并能够在厌氧环境中有效去除废水中的硫离子。

技术研发人员：匡飞,谢媛
受保护的技术使用者：松滋市高层次人才服务中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13