一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基的制作方法

本发明涉及培养基制备，特别涉及一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基。

背景技术：

1、冬虫夏草( cordyceps sinensis (berk) sacc)是我国名贵的补益类中药，与人参、鹿茸并列为中国中药的三大补品。是鳞翅目蝙蝠蛾科蝠蛾属幼虫被子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属冬虫夏草真菌( ophiocordyceps sinensis)寄生后形成的虫菌复合体。冬虫夏草长期以来即可药用又可食用，是一种高档滋补品。近年来，国内外对冬虫夏草的需求剧增，但由于冬虫夏草有其特殊的生态环境和严格的寄生性，产量相当有限，资源紧缺。为缓解市场的供需矛盾，冬虫夏草的人工发酵产品越来越重要，人工发酵培养冬虫夏草菌丝体是解决冬虫夏草资源紧缺的一种有效途径。

2、冬虫夏草菌生物特性决定了培养条件严苛，生长缓慢，分离纯菌株技术难度较高。目前常用的分离途径主要有子囊孢子分离法（挖取新鲜的冬虫夏草，在无菌条件下获取成熟的子囊孢子，接种于真菌培养基上，放置于合适的温度下黑暗培养，待生长出单个菌落）和组织分离法（取新鲜、完整及子座饱满的冬虫夏草，经洗净、消毒后切取小块置培养基上培养长出菌落）。现有技术中，采用组织分离法分离培养冬虫夏草菌所用培养基都是普通培养基，菌落扩繁效率低。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基，在冬虫夏草菌种培养过程中能够产生大量分生孢子，增加菌落总数，从而达到扩繁的目的，进一步增加菌丝产量。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基，所述培养基通过以下方法制备得到：包括以下步骤：

4、s1：制备基础培养基

5、该基础培养基包含以下组分：蛋白胨3-10g/l、酵母提取粉为5-20g/l、葡萄糖为5-20g/l、磷酸二氢钾 0.5g/l、硫酸镁为0.5g/l、琼脂20g/l；按配方依次加入上述组分和蒸馏水，搅拌溶解制成溶液，121℃下灭菌30-35min，取出灭菌溶液，在无菌环境下分装至培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用；

6、s2：制备补充剂

7、该补充剂包含以下组分，硫酸亚铁5-30g/l、硝酸钙50-200g/l、氯化钠50-150g/l，按配方加入上述组分和蒸馏水配制成溶液，保存备用；

8、s3：制备本发明培养基

9、在灭菌容器中加入步骤s1制备好的基础培养基，然后再加入步骤s2制备得到的补充剂，补充剂的添加量为基础培养基量的0.5%-1%，121℃下灭菌30-35min后取出灭菌溶液，得到本发明培养基，分装至灭菌后的培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用。

10、进一步地，步骤s1中所述基础培养基包含以下组分，蛋白胨5g/l、酵母提取粉为12g/l、葡萄糖为15g/l、磷酸二氢钾0.5 g/l、硫酸镁为0.5 g/l、琼脂20 g/l。即每1l蒸馏水中加入蛋白胨5g、酵母提取粉为12g、葡萄糖为15g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁为0.5g、琼脂20g。

11、进一步地，步骤s2中所述补充剂包含以下组分，硫酸亚铁10g/l、硝酸钙100g/l和氯化钠50g/l。

12、与现有技术相比，本发明一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基具有以下有益效果：

13、1.该培养基的制备原料容易得到，制备方法简单，成本低；

14、2.制备得到的培养基在冬虫夏草菌种培养过程中能够产生大量分生孢子，增加菌落总数，达到扩繁的目的，进一步增加菌丝产量，具有明显效果。

15、实施方式

16、为使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，以下实施例仅用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

17、实施例

18、本实施例提供一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基，所述培养基通过以下方法制备得到：包括以下步骤：

19、s1：制备基础培养基

20、取蛋白胨5g、酵母提取粉为12g、葡萄糖为15g、磷酸二氢钾 0.5g、硫酸镁为0.5g、琼脂20g，加入1000ml蒸馏水，搅拌溶解制成溶液，121℃下灭菌30min，取出灭菌溶液，在无菌环境下分装至培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用；

21、s2：制备补充剂

22、取硫酸亚铁0.1g、硝酸钙1g、氯化钠1g，加入10ml蒸馏水配制成溶液，保存备用；

23、s3：制备本发明培养基

24、在灭菌容器中加入步骤s1制备好的基础培养基1l，然后再加入步骤s2制备得到的补充剂10ml，121℃下灭菌30min后取出灭菌溶液，得到本发明培养基，分装至灭菌后的培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用。

25、实施例

26、本实施例提供一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基，所述培养基通过以下方法制备得到：包括以下步骤：

27、s1：制备基础培养基

28、取蛋白胨3g、酵母提取粉为5g、葡萄糖为5g、磷酸二氢钾 0.5g、硫酸镁为0.5g、琼脂20g，加入1000ml蒸馏水，搅拌溶解制成溶液，121℃下灭菌30min，取出灭菌溶液，在无菌环境下分装至培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用；

29、s2：制备补充剂

30、取硫酸亚铁0.05g、硝酸钙0.5g、氯化钠0.5g，加入10ml蒸馏水配制成溶液，保存备用；

31、s3：制备本发明培养基

32、在灭菌容器中加入步骤s1制备好的基础培养基1l，然后再加入步骤s2制备得到的补充剂5ml；121℃下灭菌30min后取出灭菌溶液，得到本发明培养基，分装至灭菌后的培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用。

33、实施例

34、本实施例提供一种促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数的培养基，所述培养基通过以下方法制备得到：包括以下步骤：

35、s1：制备基础培养基

36、取蛋白胨10g、酵母提取粉为20g、葡萄糖为15g、磷酸二氢钾 0.5g、硫酸镁为0.5g、琼脂20g，加入1000ml蒸馏水，搅拌溶解制成溶液，121℃下灭菌35min，取出灭菌溶液，在无菌环境下分装至培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用；

37、s2：制备补充剂

38、取硫酸亚铁0.3g、硝酸钙2g、氯化钠1.5g，加入10ml蒸馏水配制成溶液，保存备用；

39、s3：制备本发明培养基

40、在灭菌容器中加入步骤s1制备好的基础培养基1l，然后再加入步骤s2制备得到的补充剂8ml；121℃下灭菌35min后取出灭菌溶液，得到本发明培养基，分装至灭菌后的培养皿中，每皿分装量为培养皿1/3高度，凉至室温，待凝固后备用。

41、实施例

42、本本实施例以实施例1为标准，制备基础培养基和本发明培养基，然后将提前分离的冬虫夏草菌种在无菌环境中分别接入基础培养基（步骤s1）和本发明培养基（步骤s3），接入菌块直径为5mm，其他条件均相同，培养80天，每10天进行观察记录，逐个对菌落进行计数，明显的生长点计数为1，两个为2，依次计数，重叠的不计数（见表1）。

43、综上，本发明培养基在冬虫夏草菌种培养过程中可以明显促进冬虫夏草菌种产生孢子、增加菌落总数。

44、以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种变换，这些简单变型均属于本发明的保护范围。