抗犬瘟热病毒N蛋白的单克隆抗体对和核酸分子、细胞及制备方法和应用与流程

本发明属于免疫学领域和分子病毒学的，尤其涉及一种抗犬瘟热病毒n蛋白的单克隆抗体对和核酸分子、细胞及制备方法和应用。

背景技术：

1、犬瘟热(cd)是由犬瘟热病毒(cdv)感染犬科动物引起的严重系统性疾病，主要临床表现主要为发热、卡他性呼吸道症状、胃肠疾病、皮疹和中枢神经系统疾病。cd最初被认为是一种犬科动物易感的传染性疾病，但近些年来关于鼬科、浣熊科、鬣狗科、熊猫科、灵长目猕猴科、偶蹄目猪科、鳍足目海豹科以及鲸目海豚科等动物发病的报道不断增多，且有证据表面cdv可跨宿主种属传播，其感染谱系呈不断扩大的趋势，所造成的危害也越来越大。因此，开发特异、快速和灵敏的检测技术，进行cdv早期检测具有重大的意义。

2、cdv属于副粘病毒科麻疹病毒属，为有囊膜包裹的、单股、不分节段的负链rna病毒，全长15～16kb，其基因组主要编码核衣壳蛋白(n蛋白)、血凝素(h蛋白)、融合蛋白(f蛋白)、磷蛋白(p蛋白)、大蛋白(l蛋白以及基质蛋白(m蛋白)；其中，与其他蛋白相比，n蛋白的编码基因变异性小，在病毒复制过程中起重要作用，且能够引起机体体液免疫和细胞免疫反应，可作为cdv免疫学检测中的目标抗原使用。

3、目前，cdv免疫学检测技术主要包括琼脂扩散法、酶联免疫吸附法、血清中和法、免疫荧光法、免疫组织化学法以及胶体金免疫层析法等方法。上述方法均需要一种与n蛋白具有良好结合能力的抗体作为检测物质，检测样品中是否存在犬瘟热病毒n蛋白；但是，现有技术中所使用到的抗体存在着特异性较低或灵敏度低的问题，这将导致假阳性或假阴性检测结果的出现。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了获得一种具有优异特异性和灵敏度的犬瘟热病毒n蛋白，实现对犬瘟热病毒的高特异性和高灵敏度检测，提供了一种抗犬瘟热病毒n蛋白的单克隆抗体对和核酸分子、细胞及制备方法和应用。

2、第一方面，本发明提供的单克隆抗体对或其抗原结合片段采用以下的技术方案：

3、一种单克隆抗体对或其抗原结合片段包括：重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列分别如seq id no:1～3所示、轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列分别如seq idno:4～6所示的第一抗体或其抗原结合片段；和，重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列分别如seq id no:7～9所示、轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列分别如seq id no:10～12所示的第二抗体或其抗原结合片段。

4、在一些具体的实施方式中，所述第一抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:13所示、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:14所示；所述第二抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:15所示、轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:16所示。

5、在一些具体的实施方式中，所述第一抗体或其抗原结合片段选自fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、dab和互补决定区片段、单链抗体、嵌合抗体和多特异抗体中的一种或多种。

6、在一些具体的实施方式中，所述第二抗体或其抗原结合片段选自fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、dab和互补决定区片段、单链抗体、嵌合抗体和多特异抗体中的一种或多种。

7、第二方面，本发明提供了一种核酸分子，该核酸分子编码上述单克隆抗体对或其抗原结合片段。

8、第三方面，本发明提供了能分泌上述单克隆抗体对或其抗原结合片段的细胞，该细胞包括上述核酸分子。

9、第四方面，本发明提供了制备上述单克隆抗体对或其抗原结合片段的方法，该方法包括：在合适的条件下培养上述的细胞，从细胞培养物中回收单克隆抗体对或其抗原结合片段。

10、第四方面，本发明提供的试剂盒采用以下的技术方案：

11、一种试剂盒，包括重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如seq id no:1～3所示和轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如seq id no:4～6所示的第一抗体或其抗原结合片段；

12、和，重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如seq id no:7～9所示和轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如seq id no:10～12所示的第二抗体或其抗原结合片段。

13、在一些具体的实施方式中，所述第一抗体或其抗原结合片段为捕获抗体，所述第二抗体或其抗原结合片段为标记抗体。

14、在一些具体的实施方式中，所述第一抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，所述可检测的标记选自放射性同位素、荧光染料、生物素、胶体金和酶中的一种或多种。

15、在一些具体的实施方式中，所述第二抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，所述可检测的标记选自放射性同位素、荧光染料、生物素、胶体金和酶中的一种或多种。

16、第五方面，本发明提供了上述单克隆抗体对或其抗原结合片段、核酸分子和/或试剂盒在在非诊断目的的犬瘟热病毒检测中的应用。

17、有益效果：

18、本发明中提供的第一抗体或其抗原结合片段、第二抗体或其抗原结合片段与犬瘟热病毒n蛋白均具有高亲合力；其中，以第一抗体或其抗原结合片段作为捕获抗体、第二抗体或其抗原结合片段作为标记抗体时，犬瘟热病毒n蛋白与第二抗体或其抗原结合片段进行结合后空间结构发生改变，使得第一抗体或其抗原结合片段与犬瘟热病毒n蛋白具有更加良好的结合能力，能够不受其他疾病病毒株及药物的交叉干扰，实现对犬瘟热病毒n蛋白的高特异性和高灵敏度检测。

技术特征：

1.一种单克隆抗体对或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体对或其抗原结合片段包括：重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列分别如seq id no:1～3所示、轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列分别如seq idno:4～6所示的第一抗体或其抗原结合片段；

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体对或其抗原结合片段，其特征在于，所述第一抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:13所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:14所示；

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体对或其抗原结合片段，其特征在于，所述第一抗体或其抗原结合片段选自fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、dab和互补决定区片段、单链抗体、嵌合抗体和多特异抗体中的一种或多种；

4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～3任一所述的单克隆抗体对或其抗原结合片段。

5.一种能分泌权利要求1～3任一所述的单克隆抗体对或其抗原结合片段的细胞，其特征在于，包括权利要求4所述的核酸分子。

6.一种制备权利要求1～3任一所述的单克隆抗体对或其抗原结合片段的方法，其特征在于，该方法包括：在合适的条件下培养权利要求5所述的细胞，从细胞培养物中回收单克隆抗体对或其抗原结合片段。

7.一种试剂盒，其特征在于，包括重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如seq idno:1～3所示和轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如seq id no:4～6所示的第一抗体或其抗原结合片段；

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，所述可检测的标记选自放射性同位素、荧光染料、生物素、胶体金和酶中的一种或多种；

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体或其抗原结合片段为捕获抗体，所述第二抗体或其抗原结合片段为标记抗体。

10.权利要求1～3任一所述的单克隆抗体对或其抗原结合片段、权利要求4所述的核酸分子和/或权利要求7～9任一所述的试剂盒在非诊断目的的犬瘟热病毒检测中的应用。

技术总结
本发明属于免疫学领域和分子病毒学的技术领域，公开了一种抗犬瘟热病毒N蛋白的单克隆抗体对和核酸分子、细胞及制备方法和应用。一种单克隆抗体对或其抗原结合片段包括重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如SEQ ID NO:1～3所示、轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如SEQ IDNO:4～6所示的第一抗体或其抗原结合片段；和，重链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如SEQ ID NO:7～9所示、轻链可变区互补决定区1～3的氨基酸序列如SEQ ID NO:10～12所示的第二抗体或其抗原结合片段。本发明提供的单克隆抗体对具有高效价，均与犬瘟热病毒N蛋白具有强结合能力，能够不受其他病毒及药物的干扰，实现对犬瘟热病毒的高特异性和高灵敏度检测。

技术研发人员：张涛,邹柳,林奕婷,周国栋,盛布恩,张松
受保护的技术使用者：领地动物诊疗科技（厦门）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13