靶向PD-1和VEGF的双功能抑制剂的制作方法

本发明涉及生物医药，具体涉及同时靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂。

背景技术：

1、程序性死亡分子1(programmed death-1，pd-1)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，vegf)通常在肿瘤微环境中共同表达。

2、pd-1是b7-cd28家族中的一员，作为一种重要的免疫抑制分子，能够抑制淋巴细胞的免疫杀伤作用。pd-1有两个配体，即程序性死亡配体1(programmed death ligand-1，pd-l1)和程序性死亡配体2(programmed death ligand-2，pd-l2)，其中pd-l1为主要配体，在多种恶性肿瘤中高表达。pd-1与pd-l1结合产生抑制信号，可阻止cd4+t细胞、cd8+t细胞增殖及细胞因子的产生，改变肿瘤微环境，使机体对肿瘤细胞的监视及清除能力减弱，产生免疫逃逸。

3、vegf是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用，其参与许多血管生成依赖性疾病的发病及其进展，包括癌症、某些炎性疾病以及糖尿病视网膜病变等。vegf还可直接参与肿瘤的免疫逃逸机制，抑制免疫细胞通过外渗进入肿瘤组织，以及通过抑制树突状细胞成熟来降低肿瘤抗原的呈现。

4、大量的研究已证实，阻断pd-1/pd-l1信号通路可解除由该信号通路介导的免疫抑制作用、活化细胞毒t淋巴细胞，从而抑制肿瘤生长。而阻断vegf/vegfr信号通路，不仅可抑制血管内皮细胞增殖和新血管的形成，达到抑制肿瘤生长的目的，还可以改善肿瘤微环境、提高细胞毒t淋巴细胞在肿瘤微环境中的浸润，有利于免疫治疗。

5、综上所述，可以预期同时阻断pd-1/pd-l1信号通路和vegf/vegfr信号通路将可以有效抑制肿瘤的生长，因此开发能够用于同时抑制pd-1和vegf功能，进而阻断这两个信号通路的新型制剂对于抑制肿瘤生长将具有重要的意义。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明一方面旨在提供一种同时靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂，所述双功能抑制剂优选是抗体，其重链包含与抑制pd-1和vegf的功能相关的氨基酸序列。所述抗体优选是全人源化抗体。

2、优选地，靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂中的所述重链包含seq id no.1所示的序列，轻链包含seq id no.2所示的序列。

3、另一方面，本发明还提供核酸分子，其编码生成所述靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂的所述重链和/或所述轻链。

4、另一方面，本发明还提供构建体，其携带有能够编码生成所述重链和/或所述轻链的核酸分子。优选地，所述构建体包括携带有编码所述重链和/或所述轻链的核酸分子的构建体。进一步优选地，所述构建体是将编码所述重链和/或所述轻链的核酸分子插入到质粒载体pcdna3.4而得到的构建体。

5、另一方面，本发明还提供一种细胞，所述细胞中携带有至少一个拷贝的能够编码生成所述重链和/或所述轻链的核酸分子或者构建体，且在适于所述核酸分子或所述构建体表达生成所述双功能抑制剂的条件下培养时，能够以完整抗体形式生成所述双功能抑制剂。

6、优选地，所述细胞来源于哺乳动物细胞。

7、另一方面，本发明还提供一种药物组合物，组合物包含：本发明的靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂、编码生成所述靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂的所述重链和/或所述轻链的核酸分子、携带有所述核酸分子的构建体或者携带有至少一个拷贝的能够编码生成所述重链和/或所述轻链的核酸分子或构建体的细胞中的任一种或多种；以及药学上能接受的载体和/或助剂。

8、另一方面，本发明还提供所述靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂、所述核酸分子、所述构建体、所述细胞和/或所述组合物在制备用于预防、减轻、改善或抑制疾病或病症的药物中的用途。

9、在一些实施方式中，疾病或病症包括实体瘤和非实体瘤。

10、在一些实施方式中，疾病或病症包括pd-l1阳性肿瘤。

11、在一些实施方式中，疾病或病症包括肺癌、结直肠癌、宫颈癌、胃癌和/或肾癌。

12、在一些实施方式中，疾病或病症包括白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤。

13、又一方面，本发明还提供一种制备靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂的方法，其包括：

14、步骤s1：获取编码所述双功能抑制剂的重链和/或轻链的核酸分子；

15、步骤s2：分别构建携带有编码所述重链的核酸分子的构建体以及携带有编码所述轻链的核酸分子的构建体；

16、步骤s3：将步骤s2得到的两种构建体同步导入细胞，并在适于所述两种构建体以完整抗体形式表达生成所述双功能抑制剂的条件下培养所述细胞；以及

17、步骤s4：从步骤s3的细胞培养物中分离并纯化所述双功能抑制剂。

18、鉴于pd-1和vegf在肿瘤微环境中的共表达，与现有技术中的常规联合疗法相比，本发明的靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂作为单一药物同时抑制这两个靶点，能更有效地阻断这两个通路，从而增强抗肿瘤活性。而且单一药物能够减小患者的用药负担，进而提高患者的用药依从性。

技术特征：

1.一种靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂，其特征在于：所述双功能抑制剂是抗体，所述抗体的重链包含与抑制pd-1和vegf的功能相关的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂，其特征在于：所述重链包含seq id no.1所示的氨基酸序列，所述双功能抑制剂的轻链包含seq id no.2所示的氨基酸序列。

3.编码权利要求1或2中所述双功能抑制剂的所述重链和/或所述轻链的核酸分子。

4.携带有权利要求3所述核酸分子的构建体。

5.一种细胞，其特征在于，所述细胞中携带有至少一个拷贝的权利要求3所述的核酸分子或者权利要求4所述的构建体，且在适于所述核酸分子或所述构建体表达生成权利要求1或2所述的双功能抑制剂的条件下培养时，能够以完整抗体形式生成所述双功能抑制剂。

6.根据权利要求5所述的细胞，其特征在于，所述细胞来源于哺乳动物细胞。

7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：权利要求1或2所述的靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的构建体或者权利要求5或6所述的细胞中的任一种或多种，以及药学上能接受的载体和/或助剂。

8.权利要求1或2所述的靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的构建体、权利要求5或6所述的宿主细胞和/或权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防、减轻、改善或抑制疾病或病症的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病症包括实体瘤和非实体瘤。

10.一种制备靶向pd-1和vegf的双功能抑制剂的方法，其包括：

技术总结
本发明提供一种同时靶向PD‑1和VEGF的双功能抑制剂，其是抗体，所述抗体的重链包含与抑制PD‑1和VEGF的功能相关的氨基酸序列。本发明还提供编码生成双功能抑制剂的重链和/或轻链的核酸分子、携带有所述核酸分子的构建体、携带有所述核酸分子或所述构建体的细胞。本发明还涉及包含所述双功能抑制剂、所述核酸分子、所述构建体和/或所述细胞的药物组合物，以及所述双功能抑制剂、所述核酸分子、所述构建体、所述细胞和/或所述组合物在制备用于预防、减轻、改善或抑制疾病或病症的药物中的用途。本发明的双功能抑制剂能有效抑制实体瘤和非实体瘤细胞的生长。

技术研发人员：袁红,王贤淼,田登科,郭凌敏,李春,金佳丽,尹子波
受保护的技术使用者：杭州美赛生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13