一种鸡B亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216insCC及其应用

本发明涉及家禽遗传抗性品种选育，具体涉及一种鸡b亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216inscc及其应用。

背景技术：

1、鸡b亚群禽白血病是由b亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus subgroup b，alv-b)引起的一种鸡免疫抑制性肿瘤性传染病。alv-b可引起感染鸡群产生免疫抑制而极易继发禽流感、新城疫等其他病毒性疾病和大肠杆菌、沙门氏菌等细菌性疾病，引起感染种鸡、肉鸡发生特征性肿瘤而死亡，致使感染鸡群生产性能和肉、蛋品质下降，给世界家禽产业造成了巨大的经济损失。目前，禽白血病尚无商品化疫苗和有效的治疗方法，主要通过种群净化措施进行防控，但种群净化周期长(至少8-10年)、费用高(每只种鸡净化费用约500元)，且净化后阴性鸡群依然面临着再次感染alv的风险，很难维持禽白血病的防控成效，且会陷入病原-动物-检测人员持续的斗争。近年来已从地方鸡种、黄羽肉鸡、白羽肉鸡、蛋鸡等不同类型鸡中均分离出alv-b。可见，现有措施并不能完全控制b亚群禽白血病在中国的发生与流行，该病已成为威胁我国养鸡业(尤其是种鸡业)可持续健康发展的重大疾病之一。alv-b主要通过垂直传播，其感染可从曾祖代(纯系)→祖代→父母代→商品代逐代放大，每代感染率扩大约5％-20％，1只曾祖代(纯系)种鸡感染alv-b后可传染给24万只商品鸡，禽白血病已成为危害我国家禽种业安全最大的疾病。因此，开展控制禽白血病的技术创新，从宿主遗传抗性方面研究禽白血病的抗病育种已成为防控该病的有效策略。

2、alv-b由鸡tvb受体基因编码的细胞表面特异性tvb受体蛋白介导侵入宿主细胞，继而发生感染，决定宿主细胞对alv-b感染的易感性或抗性。tvb受体基因的遗传突变可能会导致tvb受体蛋白表达的完全缺失或表达一个不适宜作为alv-b受体的缺陷型tvb受体蛋白，从而引起宿主细胞对alv-b的感染产生遗传抗性。因此，鉴定b亚群禽白血病的遗传抗性分子标记，并应用于筛选b亚群禽白血病遗传抗性育种素材，以培育遗传抗b亚群禽白血病鸡品种(系)是实现b亚群禽白血病抗病育种的关键所在，从而保障我国家禽种业安全。

技术实现思路

1、为了解决现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种鸡b亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216inscc及其应用，以解决现有技术中存在的不能完全控制b亚群禽白血病在我国鸡群发生与流行的问题。

2、本发明的第一个目的是提供一种鸡b亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216inscc，该分子标记为tvb受体基因在第3215～3216位碱基之间插入cc碱基。

3、本发明的第二个目的是提供一种用于检测上述分子标记tvb3215-3216inscc的引物，该引物的核苷酸序列如seq id no：1和seq id no：2所示。

4、本发明的第三个目的是提供一种应用，即将上述分子标记tvb3215-3216inscc和/或上述引物用于筛选/鉴定b亚群禽白血病遗传抗性鸡。

5、进一步，上述应用包括以下步骤：

6、提取待测样本基因组dna，扩增tvb受体基因片段，然后进行测序，若tvb受体基因序列第3215～3216位碱基位置存在cc纯合插入突变(tvbinscc/inscc)，则待测样本为b亚群禽白血病遗传抗性鸡，也就是说存在上述cc纯合突变，则具有对alv-b的感染产生遗传抗性的表型，即待测鸡基因型为tvbinscc/inscc，则该个体为b亚群禽白血病遗传抗性鸡；

7、若tvb受体基因序列第3215～3216位碱基位置没有发生cc纯合插入突变，则待测样本为b亚群禽白血病易感鸡，也就是说没有发生cc插入突变则为野生型，则对alv-b的感染易感(无抗性)，即如待测样本的基因型为野生型tvbs1/s1，则该个体为b亚群禽白血病易感鸡；

8、若tvb受体基因序列第3215～3216位碱基位置存在杂合插入突变(tvbs1/inscc)，则该个体为b亚群禽白血病易感鸡，但基因型均为tvbs1/inscc种公鸡、种母鸡配种后产生的下一代可以产生基因型为tvbinscc/inscc的个体，则该个体为b亚群禽白血病抗性鸡。

9、进一步，扩增时扩增体系包括：dna模板1μl，10×buffer 2.5μl，dntps 2μl，上下游检测引物1μl，kod-fx 0.5μl，最后用ddh2o补至25μl。

10、进一步地，扩增时扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃后延伸5min，最后4℃保存。

11、本发明的第四个目的是提供一种检测/筛选b亚群禽白血病遗传抗性鸡的试剂盒，该试剂盒包括上述引物。

12、本发明的第五个目的是将上述试剂盒用于筛选培育遗传抗b亚群禽白血病鸡品种/品系的育种素材。

13、本发明具有以下有益效果：

14、本发明首次在我国鸡种中发现alv-b受体基因tvb dna序列(genbank登录号：nc_052553.1)第3215～3216位碱基存在cc插入突变(tvb3215-3216inscc)，进一步研究证实该tvb受体基因自然突变能够引起宿主鸡对alv-b的感染产生遗传抗性。因此，将该突变位点作为鉴定鸡b亚群禽白血病遗传抗性的分子标记是非常准确的。

15、本发明进一步建立了b亚群禽白血病遗传抗性标记tvb3215-3216inscc的分子诊断和基因分型方法，建立了一种鉴定b亚群禽白血病遗传抗性鸡的方法，能够快速、准确判定检测样本为b亚群禽白血病遗传抗性鸡还是易感鸡，可应用于在我国鸡种(包括地方鸡种和商业鸡品系)中筛选培育b亚群禽白血病遗传抗性鸡品种(品系)的育种素材，从而开展b亚群禽白血病遗传抗性鸡品种(品系)的选育，具有很好的应用价值和推广前景。

技术特征：

1.一种鸡b亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216inscc，其特征在于，该分子标记为tvb受体基因在第3215～3216位碱基之间插入cc碱基。

2.用于检测权利要求1所述的鸡b亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216inscc的引物，其特征在于，该引物的核苷酸序列如seq id no：1和seq id no：2所示。

3.权利要求1所述的鸡b亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb3215-3216inscc和/或权利要求2所述的引物在筛选/鉴定b亚群禽白血病遗传抗性鸡中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，扩增时扩增体系包括：dna模板1μl，10×buffer 2.5μl，dntps 2μl，上下游检测引物1μl，kod-fx 0.5μl，最后用ddh2o补至25μl。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，扩增时扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃后延伸5min，最后4℃保存。

7.一种检测/筛选b亚群禽白血病遗传抗性鸡的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求2所述引物。

8.权利要求7所述的试剂盒在筛选培育遗传抗b亚群禽白血病鸡品种/品系育种素材中的应用。

9.权利要求1所述的分子标记和/或权利要求2所述的引物在筛选培育遗传抗b亚群禽白血病鸡品种/品系育种素材中的应用。

技术总结
本发明公开了一种鸡B亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb<supgt;3215‑3216insCC</supgt;及其应用，该分子标记为tvb受体基因在第3215～3216位碱基之间插入CC碱基。本发明从体外、体内实验两个层面证实了该tvb受体基因自然突变引起宿主抗ALV‑B的感染，还基于B亚群禽白血病遗传抗性分子标记tvb<supgt;3215‑3216insCC</supgt;建立了B亚群禽白血病遗传抗性鸡的鉴定方法，该方法能够快速、准确判定检测样本为ALV‑B抗性鸡还是易感鸡，可从我国鸡种(包括地方鸡种和商业肉鸡品系)筛选用于选育ALV‑B遗传抗性鸡品种/品系的育种素材，为培育ALV‑B遗传抗性鸡品种/品系提供技术支撑。

技术研发人员：谢青梅,陈伟国,李文雪,陈胜,徐慧娟
受保护的技术使用者：华南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13