一种检测辐射损伤DNA拷贝数变异的方法及其用途与流程

本发明属于辐射生物剂量，具体涉及一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法及其用途。

背景技术：

1、dna是辐射作用的靶分子，dna拷贝数变异(copy number variation,cnv)是dna突变的一种重要形式，一定程度上会引起细胞甚至是机体产生一系列应激反应。电离辐射诱发的dna拷贝数变异可作为一种潜在检测受照剂量的指标。在受照早期，错误的dna拷贝没有及时修复，该错误将长期在基因组中存在。相关技术对cnv的检测包括基于芯片的比较基因组杂交(array-based comparative genomic hybridization，acgh)、单核苷酸多态性-微阵列(snp-array)、基于二代测序的cnv分析、多重连接探针扩增技术(multiplexligation-dependent probe amplification,mlpa)等。这些方法复杂，检测成本高，且对dna拷贝数变异的检测准确度不高。

技术实现思路

1、针对现有技术所存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种速度快、通量高，取样量少准确度高可确定辐射损伤dna拷贝数变异的方法及其用途。

2、为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，包含以下步骤：

3、(1)抽取外周静脉血，对抽取的外周静脉血进行不同剂量的辐射照射，得到辐射损伤的外周静脉血样品；

4、(2)提取上述样品dna，进行测序及生物信息分析，筛选出实验组和对照组的dna拷贝数变异；

5、(3)对筛选出实验组和对照组进行数字pcr检测得到辐射损伤dna拷贝数变异14q32.33区段464bp。

6、进一步地，所述步骤(1)，抽取健康成年男性外周静脉血于真空edta抗凝管，辐射照射剂量率为0.5gy/min，源皮距80cm，照射野30×30cm。

7、进一步地，所述步骤(1)，所述辐射损伤是60coγ射线照射形成。

8、进一步地，所述步骤(2)，参考基因组版本为grch37(hg19)。

9、进一步地，所述步骤(3)，所述pcr检测的上游引物、下游引物、探针序列分别为5'-attcactcgggagaccacct-3'、5'-tgcacagttcctacaacagacc-3'、5'-ataccccgaacgac-3'。

10、本发明还提供了一种辐射损伤dna拷贝数变异的用途，所述辐射损伤dna拷贝数变异用于辐射照射的敏感生物学指标。

11、本发明还提供了一种辐射损伤dna拷贝数变异的用途，所述辐射损伤dna拷贝数变异用作检测辐射损伤的试剂盒。

12、本发明还提供了一种辐射损伤dna拷贝数变异的用途，所述辐射损伤dna拷贝数变异用作回顾性剂量估算的生物学指标。

13、采用本发明的技术方案带来的有益效果是，一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，对抽取的人体外周血进行辐射照射，对辐射照射后的样品进行测序及生物信息分析筛选辐射损伤相关dna拷贝数变异，利用数字pcr验证得到辐射损伤的dna拷贝数变异14q32.33区段464bp；本发明的方法得到的dna拷贝数变异与染色体畸变存在相关性，且具有一定的时间依赖关系和剂量依赖关系；且dna拷贝数变异14q32.33区段464bp具有剂量依赖关系。本发明的方法简单，能够快速准确的得到辐射损伤的dna拷贝数变异，可将得到的dna拷贝数变异用于辐射照射的敏感生物学指标及、检测辐射损伤的试剂盒及回顾性剂量估算的生物学指标。

技术特征：

1.一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，其特征是，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，其特征是，所述步骤(1)，抽取健康成年男性外周静脉血于真空edta抗凝管，辐射照射剂量率为0.5gy/min，源皮距80cm，照射野30×30cm。

3.根据权利要求1所述的一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，其特征是，所述步骤(1)，所述辐射损伤是60coγ射线照射形成。

4.根据权利要求1所述的一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，其特征是，所述步骤(2)，参考基因组版本为grch37(hg19)。

5.根据权利要求1所述的一种检测辐射损伤dna拷贝数变异的方法，其特征是，所述步骤(3)，所述pcr检测的上游引物、下游引物、探针序列分别为5'-attcactcgggagaccacct-3'、5'-tgcacagttcctacaacagacc-3'、5'-ataccccgaacgac-3'。

6.根据权利要求1～5任一项所述的辐射损伤dna拷贝数变异的用途，其特征是：所述辐射损伤dna拷贝数变异用于辐射照射的敏感生物学指标、生物剂量回顾、检测辐射损伤的试剂盒。

7.根据权利要求1所述的辐射损伤dna拷贝数变异的用途，其特征是：dna拷贝数变异14q32.33区段464bp用于辐射照射的敏感生物学指标。

8.根据权利要求1所述的辐射损伤dna拷贝数变异的用途，其特征是：dna拷贝数变异14q32.33区段464bp用作检测辐射损伤的试剂盒。

9.根据权利要求1所述的辐射损伤dna拷贝数变异的用途，其特征是：dna拷贝数变异14q32.33区段464bp用于回顾性剂量估算的生物学指标。

技术总结
本发明公开了一种检测辐射损伤DNA拷贝数变异的方法及其用途，对抽取的人体外周血进行辐射照射，对辐射照射后的样品进行测序及生物信息分析筛选辐射损伤相关DNA拷贝数变异，利用数字PCR验证得到辐射损伤的DNA拷贝数变异14q32.33区段464bp；本发明的方法得到的DNA拷贝数变异与染色体畸变存在相关性，且具有一定的时间依赖关系和剂量依赖关系。事故人员中同样发现14q32.33区段464bp变异具有剂量依赖关系；且本发明的方法简单，能够快速准确的得到辐射损伤的DNA拷贝数变异，可将得到的DNA拷贝数变异用于辐射照射的敏感生物学指标及、检测辐射损伤的试剂盒及回顾性剂量估算的生物学指标。

技术研发人员：原雅艺,刘晓明,董娟聪,董豫阳,任越,程娇,刘红艳,张晓泉,党旭红
受保护的技术使用者：中国辐射防护研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13