一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组、试剂盒及其方法与流程

本发明涉及生物，更具体地，涉及鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组、试剂盒及其方法。

背景技术：

1、玉米是世界上种植最广泛的农作物之一。玉米也是我国种植面积最广的农作物。在玉米生产中，抗虫和耐除草剂都是非常需要的农艺性状。抗虫转基因玉米能够大幅度地降低化学杀虫剂的使用量，从而降低生产成本并且减少农药对环境和农作物产品的污染。耐除草剂玉米可以大幅度降低防治杂草所需要的农业劳动力，降低劳动力的投入，减少杂草对玉米产量的影响。此外，利用除草剂防治杂草也更加有利于推广免耕技术，减少土壤和肥料的流失。因此抗虫和耐除草剂性能在玉米生产中具有突出的重要性。

2、转cry1ab基因和am 79epsps基因抗虫耐除草剂玉米wyn041是将cry1ab基因和am79epsps基因根据玉米密码子偏好性特征进行优化，获得的双价抗虫耐除草剂的玉米在耐除草剂和抗虫方面均展现出优异的性能。根据转基因插入片段的旁侧序列设计转化体特异的检测是目前最为有效的转基因检测方法。常用的转基因植物外源插入载体旁侧序列检测方法包括外源接头介导pcr。但是，该方法循环过程复杂，从而降低了检测效率，并不利于检测。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组、试剂盒及其方法，该方法能够准确能够准确鉴定抗虫耐除草剂玉米，且检测过程简单，效率高。

2、本发明实施例提供一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组，所述引物组包括：第一引物对和第二引物对中的至少一对，所述第一引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如序列表中seq id no：1所示，所述第二引物的序列如序列表中seq id no：2所示，所述第二引物对包括第三引物和第四引物，所述第三引物的序列如序列表中seq idno：3所示，所述第四引物的序列如序列表中seq id no：4所示。

3、另一方面，本发明实施例提供了一种鉴定耐草剂玉米的试剂盒，所述试剂盒包括：如权利要求1所述的引物组，所述试剂盒还包括：dna聚合酶和dntp。

4、具体地，所述第一引物、所述第二引物、所述第三引物、所述第四引物的终浓度均为0.25μm。

5、又一方面，本发明实施例提供了一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的方法，所述方法包括：

6、获得待测玉米的基因组dna；

7、以所述基因组dna为模板，采用上述引物组进行扩增，得到扩增产物；

8、确定预期的dna片段；

9、若所述扩增产物包括所述预期的dna片段，则所述待测玉米为抗虫耐除草剂玉米wyn041；

10、若所述扩增产物不包括所述预期的dna片段，则所述待测玉米不为抗虫耐除草剂玉米wyn041。

11、具体地，确定预期的dna片段的方法包括：若所述引物组包括第一引物和所述第二引物，则所述预期的dna片段为517bp。

12、具体地，若所述引物组包括所述第三引物和所述第四引物，则所述预期的dna片段为373bp。

13、具体地，若所述引物组包括：第一引物、所述第二引物、所述第三引物和所述第四引物，则所述预期的dna片段包括：517bp的dna片段和373bp的dna片段。

14、具体地，所述pcr扩增的程序包括32个循环，每个循环均包括：95℃5min，95℃30s，58℃30s，72℃45s，循环结束；然后72℃5min；最后保持在4℃。

15、具体地，所述第一引物、所述第二引物、所述第三引物和所述第四引物的终浓度均为0.25μm。

16、本发明实施例提供了一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组、试剂盒及其方法，根据转cry1ab基因和am79epsps基因的抗虫耐除草剂玉米的侧翼序列获得引物组，该引物组和试剂盒对鉴定抗虫耐除草剂玉米具有较高的灵敏度和特异性，该鉴定方法能够准确鉴定出抗虫耐除草剂玉米，且鉴定过程简单，效率高。

17、本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。

技术特征：

1.一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组，其特征在于，所述引物组包括：第一引物对和第二引物对的至少一对，所述第一引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如序列表中seq id no：1所示，所述第二引物的序列如序列表中seq id no：2所示，所述第二引物对包括第三引物和第四引物，所述第三引物的序列如序列表中seq id no：3所示，所述第四引物的序列如序列表中seq id no：4所示。

2.一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：如权利要求1所述的引物组，所述试剂盒还包括：dna聚合酶和dntp。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一引物、所述第二引物、所述第三引物、所述第四引物的终浓度均为0.25μm。

4.一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的方法，其特征在于，所述方法包括：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，确定预期的dna片段的方法包括：若所述引物组包括所述第一引物对，则所述预期的dna片段为517bp。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，若所述引物组包括所述第二引物对，则所述预期的dna片段为373bp。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，若所述引物组包括：第一引物对和所述第二引物对，则所述预期的dna片段包括：517bp的dna片段和373bp的dna片段。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的程序包括32个循环，每个循环均包括：95℃5min，95℃30s，58℃30s，72℃45s，循环结束；然后72℃5min；最后保持在4℃。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一引物、所述第二引物、所述第三引物和所述第四引物的终浓度均为0.25μm。

技术总结
本发明提供了一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组、试剂盒及其方法。所述引物组包括：第一引物对和第二引物对的至少一对，所述第一引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述第二引物的序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，所述第二引物对包括第三引物和第四引物，所述第三引物的序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，所述第四引物的序列如序列表中SEQ ID NO：4所示。本发明实施例提供了一种鉴定抗虫耐除草剂玉米的引物组、试剂盒及其方法，该引物组和试剂盒对鉴定抗虫耐除草剂玉米具有较高的灵敏度和特异性。

技术研发人员：何军光,苗昱婷,任鑫,楼亿圆,李焰,周骏,任志勇,张凌燕,李静静,顾伟航,陆建明
受保护的技术使用者：浙江新安化工集团股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13