本发明涉及基因诊断试剂盒，具体讲是一种diego血型di*a等位基因的双重taqman荧光定量pcr检测试剂盒及其应用。
背景技术：
1、diego血型系统由22种抗原组成，其中dia和dib是最具临床意义的。两者均可引起新生儿溶血性疾病和溶血性输血反应。但特异性商业抗体的获取有限，使得为抗-dib受体筛选di(a+b-)即di*a/di*a供体变得困难。这一需求促使我们寻找抗原检测的替代方法，并选择相应阴性的血液单位。
2、除了abo和rhd之外，大多数血型抗原都是由单核苷酸多态性(snps)产生的，这使得基因分型方法相对简单。例如，di*a和di*b多态性是由slc4a1基因19外显子c.2561位点的t＞c核苷酸取代决定的，将条带3蛋白中854位点的亮氨酸改变为脯氨酸。通过这种单核苷酸多态性的基因分型，可以可靠地推导出血型表型。
3、目前的已应用到diego血型基因分型的技术包括pcr-sbt法、pcr-ssp法、pcr-ssop法。pcr-sbt法，主要不足是对仪器和试剂有特殊要求，不易普及、操作复杂、成本相对较高、速度慢、通量底。pcr-ssp法，需通过琼脂糖凝胶电泳分析，操作复杂且容易污染。pcr-ssop法，虽然灵敏度高，特异性较强，结果直观，但操作比较繁琐，耗时较长，难以标准化和自动化。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种diego血型di*a等位基因的双重taqman荧光定量pcr检测试剂盒。所述试剂盒特异性强、灵敏度高，操作简便快速，结果判读简单方便，从而可实现临床diego血型的快速检测。
2、本发明的第一个目的是提供一种diego血型di*a等位基因的双重taqman荧光定量pcr检测试剂盒，所述试剂盒包括正向引物dia-s、反向引物dia-as以及taqman探针dia-probe；还包括正向引物bactin-s、反向引物bactin-as以及taqman探针bactin-probe；
3、所述正向引物dia-s的核苷酸序列seq id no.1如下所示：
4、5’-gtgggtggtgaagtccaatct-3’；
5、所述反向引物dia-as的核苷酸序列seq id no.2如下所示：
6、5’-agagggtctggctgtcttgaa-3’；
7、所述taqman探针dia-probe的核苷酸序列seq id no.3如下所示：
8、5’-fam-tctggcctgctgtgtcctagcatatgatc-bhq1-3’；
9、所述正向引物bactin-s的核苷酸序列seq id no.4如下所示：
10、5’-ctctgcctgacatgagggtta-3’；
11、所述反向引物bactin-as的核苷酸序列seq id no.5如下所示：
12、5’-tcaccttcaccgttccagttt-3’；
13、所述taqman探针bactin-probe的核苷酸序列seq id no.6如下所示：
14、5’-hex-tggcctcgctgtccaccttcca-bhq1-3’。
15、本发明的第二个目的是提供一种所述的diego血型di*a等位基因的双重taqman荧光定量pcr检测试剂盒的应用，用于diego血型基因分型。
16、本发明的有益效果是：荧光定量pcr技术是在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，其优点是无需凝胶电泳分析结果，pcr完成时即可判读结果，省去了pcr产物开盖电泳分析步骤，避免了pcr产物污染的风险，同时大大降低的实验步骤，操作简便快速，结果判读简单方便。对于血站或临床检验科室而言，实时荧光pcr技术既做到了操作简便，同时成本低、结果判读快，在众多基因分型方法中，无疑是临床最适用的血型快速检测技术。而基于taqman探针的荧光定量pcr技术特异性强灵敏度高，因此本发明建立了双重taqman荧光定量pcr方法检测di*a等位基因。
1.一种diego血型di*a等位基因的双重taqman荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括正向引物dia-s、反向引物dia-as以及taqman探针dia-probe；还包括正向引物bactin-s、反向引物bactin-as以及taqman探针bactin-probe；
2.一种权利要求1所述的diego血型di*a等位基因的双重taqman荧光定量pcr检测试剂盒的应用，其特征在于：用于混合样本的di*a等位基因分型。