提高超氧化物歧化酶热稳定性的方法

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及提高超氧化物歧化酶热稳定性的方法。

背景技术：

1、超氧化物歧化酶(sod)具有清除自由基的作用，可以有效地缓解因过量超氧阴离子引起的细胞损伤。但是sod对高温敏感，在食品医药加工过程中容易变性失活，造成功能性物质损失。

2、因此，目前的超氧化物歧化酶仍有待研究。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题。为此，本发明提出了分离的超氧化物歧化酶、分离的核酸、表达载体、重组细胞、重组菌、生产超氧化物歧化酶的方法和提高超氧化物歧化酶热稳定性的方法，本发明的分离的超氧化物歧化酶热稳定性强、酶活性好，有利于在食品、医药和化妆品等领域中的应用，具有重要的意义。

2、在本发明的一个方面，本发明提出了一种分离的超氧化物歧化酶。根据本发明的实施例，与seq id no：1所示的氨基酸序列相比，所述分离的超氧化物歧化酶具有下列至少之一的突变：a115t、d25n和s135p。

3、本发明的发明人创造性地发现，通过对超氧化物歧化酶(seq id no：1)的第115位、25位和135位这三个位点中任意一个、两个或者三个进行突变，突变方式为a115t、d25n、s135p，可以有效地提高sod的热稳定性，sod酶活性好，有利于在食品医药中的应用，具有重要的意义。

4、在本发明的另一方面，本发明提出了一种分离的核酸。根据本发明的实施例，所述分离的核酸编码前面所述分离的超氧化物歧化酶。由此，利用本发明实施例的分离的核酸表达的sod热稳定性强、酶活性好，应用价值高。

5、在本发明的又一方面，本发明提出了一种表达载体。根据本发明的实施例，所述表达载体含有前面所述分离的核酸分子。由此，利用本发明实施例的表达载体表达的sod热稳定性强、酶活性好，应用价值高。

6、在本发明的又一方面，本发明提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，所述重组细胞含有前面所述分离的超氧化物歧化酶、所述分离的核酸或所述表达载体。由此，培养根据本发明实施例的重组细胞得到的sod热稳定性强、酶活性好，应用价值高。

7、在本发明的又一方面，本发明提出了一种重组菌。根据本发明的实施例，所述重组菌含有前面所述分离的超氧化物歧化酶、所述分离的核酸、所述表达载体或所述重组细胞。由此，培养根据本发明实施例的重组菌得到的sod热稳定性强、酶活性好，应用价值高。

8、根据本发明的实施例，所述重组菌为毕赤酵母。由此，经突变的sod能够通过毕赤酵母进行高密度发酵表达，提高其工业生产效率、降低生产成本。

9、在本发明的又一方面，本发明提出了一种食品、药品或化妆品。根据本发明的实施例，所述食品、药品或化妆品含有前面所述分离的超氧化物歧化酶、所述分离的核酸、所述表达载体、所述重组细胞或所述重组菌。由此，根据本发明实施例的食品、药品或化妆品中含有高热稳定性和高酶活性的sod，有助于更好地发挥sod作用，延长保质期。

10、在本发明的又一方面，本发明提出了一种生产超氧化物歧化酶的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：对前面所述重组菌进行发酵培养，得到发酵液；从所述发酵液中分离出超氧化物歧化酶。由此，利用根据本发明实施例的方法可以获得高热稳定性和高酶活性的sod，保质期长，应用价值高。并且，该方法操作简便，适于规模化生产。具体地，本发明对于从发酵液中分离出sod的方法不做严格限定，可以参考本领域常规技术手段实施。

11、在本发明的又一方面，本发明提出了一种提高超氧化物歧化酶热稳定性的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将具有seq id no：1所示氨基酸序列的超氧化物歧化酶进行如下至少之一方式的突变处理：a115t、d25n和s135p。针对上述突变方式的一种、两种或者三种进行突变，可以有效地提高超氧化物歧化酶热稳定性。

12、根据本发明的实施例，所述突变处理的方式为下列之一：1)a115t；2)a115t和d25n；3)a115t和s135p。由此，采用上述三种之一的突变方式，获得的sod热稳定性较佳，其中，采用方式3)的效果更佳。

13、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种分离的超氧化物歧化酶，其特征在于，与seq id no：1所示的氨基酸序列相比，所述分离的超氧化物歧化酶具有下列至少之一的突变：d25n、a115t和s135p。

2.根据权利要求1所述的分离的超氧化物歧化酶，其特征在于，与seq id no：1所示的氨基酸序列相比，所述分离的超氧化物歧化酶具有如下之一突变：1)a115t；2)a115t和d25n；3)a115t和s135p。

3.一种分离的核酸，其特征在于，所述分离的核酸编码权利要求1或2所述分离的超氧化物歧化酶。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述分离的核酸分子。

5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求1或2所述分离的超氧化物歧化酶、权利要求3所述分离的核酸或权利要求4所述表达载体。

6.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌含有权利要求1或2所述分离的超氧化物歧化酶、权利要求3所述分离的核酸、权利要求4所述表达载体或权利要求5所述重组细胞。

7.根据权利要求6所述重组菌，其特征在于，所述重组菌选自毕赤酵母。

8.一种食品、药品或化妆品，其特征在于，含有权利要求1或2所述分离的超氧化物歧化酶、权利要求3所述分离的核酸、权利要求4所述表达载体、权利要求5所述重组细胞或权利要求6或7所述重组菌。

9.一种生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括：

10.一种提高超氧化物歧化酶热稳定性的方法，其特征在于，包括：

11.根据权利要求10所述方法，其特征在于，所述突变处理的方式为下列之一：1)a115t；2)a115t和d25n；3)a115t和s135p。

技术总结
本发明提出了分离的超氧化物歧化酶、分离的核酸、表达载体、重组细胞、重组菌、生产超氧化物歧化酶的方法和提高超氧化物歧化酶热稳定性的方法，本发明的分离的超氧化物歧化酶热稳定性强、酶活性好，有利于在食品、医药和化妆品等领域中的应用，具有重要的意义。

技术研发人员：廖小军,赵阳,王永涛,赵靓
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13