本发明涉及生物，尤其是涉及一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液。
背景技术：
1、结肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，也是世界上男性第三普遍、女性第二普遍的癌症，其具有发病快、转移能力强、复发率高等病理特征，严重威胁患者的健康和寿命。随着经济发展带来的人民生活水平的提高、饮食习惯和结构的改变以及人口老龄化问题，结肠癌已经逐渐成为威胁人类健康的主要疾病，并且多数患者就诊时已属于中晚期。
2、手术、放疗和化疗一起并称癌症的三大治疗手段。手术和放疗属于局部治疗，只对治疗部位的肿瘤有效，对于潜在的转移病灶(癌细胞实际已经发生转移，但因为技术手段的限制在临床上还不能发现和检测到)和已经发生临床转移的癌症难以发挥有效治疗。而化疗是一种全身治疗的手段，无论采用什么途径给药(口服、静脉和体腔给药等)，化疗药物都会随着血液循环遍布全身的绝大部分器官和组织。
3、但是，化疗不仅杀灭癌细胞，而是无针对性地杀灭细胞，对患者自身的伤害很大，进行化疗的患者需要身体有一定的承受能力，以抵抗化疗药物对身体的伤害，这些原因导致很多身体状况很差的患者不适合进行化疗。
4、外泌体(exosomes)是一类通过胞-吐过程，由活细胞分泌释放到细胞外的囊泡。研究显示，包括血细胞、免疫细胞、癌细胞、干细胞等在内的几乎所有的细胞都可以产生外泌体，所产生的外泌体不仅存在于细胞培养液中，也存在于血液、尿液、母乳、唾液、胸腔积液等体液中。
5、据统计，单个外泌体含有约≤100拷贝数的蛋白质，不同细胞来源的外泌体中既包含与细胞形成、结构和物质转运相关的共有成分，也含有与来源细胞的生物功能相关的特异蛋白质分子，如血小板和t细胞来源的外泌体包含诸如血管性血友病因子、穿孔素和颗粒酶等特殊蛋白质，而癌细胞来源的外泌体表面可能含有肿瘤特异的蛋白质分子。这类特异的蛋白质分子在外泌体介导的细胞间信号传递、参与和调控生理病理过程中发挥着至关重要的作用。
6、当能够大量获得结肠癌细胞外泌体时，可以有效开展结肠癌细胞外泌体的组学分析和功能研究，还可以使获得大量、高纯度结肠癌细胞特异的蛋白质分子、开展癌细胞特异蛋白质分子的功能研究成为可能，进一步地为攻克癌症、解除患者病痛寻找新的思路。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，以实现大量获得结肠癌细胞外泌体以及大量、高纯度结肠癌细胞特异的蛋白质分子，从而开展结肠癌细胞外泌体及特异蛋白分子的组学分析和功能研究，为攻克癌症、解除患者病痛寻找新的思路。
2、为实现上述目的，本发明提供一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，包括基础培养基350～380g/l、重组胰岛素1～20mg/l、转铁蛋白1～15mg/l、氢化可的松10～30ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子10～30ng/ml、青霉素2～10μg/ml、链霉素2～10μg/ml、甘氨酸20～30mg/l、丙氨酸5～25mg/l、脯氨酸2～20mg/l、丝氨酸40～55mg/l、天冬酰胺5～25mg/l、碱性成纤维细胞生长因子10～30ng/ml、血清白蛋白1～20g/l、维生素c 60～80mg/l、维生素b65～20mg/l、维生素b170～90mg/l、维生素a20～50mg/l。
3、优选的，包括基础培养基350g/l、重组胰岛素1mg/l、转铁蛋白1mg/l、氢化可的松10ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子10ng/ml、青霉素2μg/ml、链霉素2μg/ml、甘氨酸20mg/l、丙氨酸5mg/l、脯氨酸2mg/l、丝氨酸40mg/l、天冬酰胺5mg/l、碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml、血清白蛋白1g/l、维生素c 60mg/l、维生素b65mg/l、维生素b170mg/l、维生素a20mg/l。
4、优选的，包括基础培养基380g/l、重组胰岛素20mg/l、转铁蛋白15mg/l、氢化可的松30ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子30ng/ml、青霉素10μg/ml、链霉素10μg/ml、甘氨酸30mg/l、丙氨酸25mg/l、脯氨酸20mg/l、丝氨酸55mg/l、天冬酰胺25mg/l、碱性成纤维细胞生长因子30ng/ml、血清白蛋白20g/l、维生素c 80mg/l、维生素b620mg/l、维生素b190mg/l、维生素a50mg/l。
5、优选的，包括基础培养基360g/l、重组胰岛素10mg/l、转铁蛋白10mg/l、氢化可的松20ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子20ng/ml、青霉素6μg/ml、链霉素4μg/ml、甘氨酸25mg/l、丙氨酸20mg/l、脯氨酸10mg/l、丝氨酸45mg/l、天冬酰胺10mg/l、碱性成纤维细胞生长因子20ng/ml、血清白蛋白10g/l、维生素c 70mg/l、维生素b610mg/l、维生素b180mg/l、维生素a30mg/l。
6、优选的，包括基础培养基370g/l、重组胰岛素12mg/l、转铁蛋白8mg/l、氢化可的松17ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子22ng/ml、青霉素5μg/ml、链霉素6μg/ml、甘氨酸27mg/l、丙氨酸17mg/l、脯氨酸12mg/l、丝氨酸50mg/l、天冬酰胺15mg/l、碱性成纤维细胞生长因子25ng/ml、血清白蛋白13g/l、维生素c 72mg/l、维生素b614mg/l、维生素b182mg/l、维生素a40mg/l。
7、优选的，所述基础培养基为dmem与sfm培养基按体积比1:3混合。
8、一种如上所述的促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液在促进结肠癌细胞外泌体分泌中的应用。
9、因此，本发明提供的一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，具有以下有益效果：
10、(1)本发明提供的促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液可以促使结肠癌细胞分泌大量的外泌体，且分泌的外泌体结构良好，可以用于后续研究及使用；
11、(2)本发明提供的促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液营养全面，在促进外泌体分泌的同时不影响结肠癌细胞的生长，具有很好的经济效益；
12、(3)本发明提供的促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液不含动物血清，不含抗原成分，产生的外泌体可以应用于医学目的，而不必担心产生免疫排斥反应。
13、下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
1.一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，其特征在于：包括基础培养基350～380g/l、重组胰岛素1～20mg/l、转铁蛋白1～15mg/l、氢化可的松10～30ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子10～30ng/ml、青霉素2～10μg/ml、链霉素2～10μg/ml、甘氨酸20～30mg/l、丙氨酸5～25mg/l、脯氨酸2～20mg/l、丝氨酸40～55mg/l、天冬酰胺5～25mg/l、碱性成纤维细胞生长因子10～30ng/ml、血清白蛋白1～20g/l、维生素c60～80mg/l、维生素b65～20mg/l、维生素b170～90mg/l、维生素a20～50mg/l。
2.根据权利要求1所述的一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，其特征在于：包括基础培养基350g/l、重组胰岛素1mg/l、转铁蛋白1mg/l、氢化可的松10ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子10ng/ml、青霉素2μg/ml、链霉素2μg/ml、甘氨酸20mg/l、丙氨酸5mg/l、脯氨酸2mg/l、丝氨酸40mg/l、天冬酰胺5mg/l、碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml、血清白蛋白1g/l、维生素c60mg/l、维生素b65mg/l、维生素b170mg/l、维生素a20mg/l。
3.根据权利要求1所述的一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，其特征在于：包括基础培养基380g/l、重组胰岛素20mg/l、转铁蛋白15mg/l、氢化可的松30ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子30ng/ml、青霉素10μg/ml、链霉素10μg/ml、甘氨酸30mg/l、丙氨酸25mg/l、脯氨酸20mg/l、丝氨酸55mg/l、天冬酰胺25mg/l、碱性成纤维细胞生长因子30ng/ml、血清白蛋白20g/l、维生素c80mg/l、维生素b620mg/l、维生素b190mg/l、维生素a50mg/l。
4.根据权利要求1所述的一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，其特征在于：包括基础培养基360g/l、重组胰岛素10mg/l、转铁蛋白10mg/l、氢化可的松20ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子20ng/ml、青霉素6μg/ml、链霉素4μg/ml、甘氨酸25mg/l、丙氨酸20mg/l、脯氨酸10mg/l、丝氨酸45mg/l、天冬酰胺10mg/l、碱性成纤维细胞生长因子20ng/ml、血清白蛋白10g/l、维生素c70mg/l、维生素b610mg/l、维生素b180mg/l、维生素a30mg/l。
5.根据权利要求1所述的一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，其特征在于：包括基础培养基370g/l、重组胰岛素12mg/l、转铁蛋白8mg/l、氢化可的松17ng/ml、结肠直肠细胞源性生长因子22ng/ml、青霉素5μg/ml、链霉素6μg/ml、甘氨酸27mg/l、丙氨酸17mg/l、脯氨酸12mg/l、丝氨酸50mg/l、天冬酰胺15mg/l、碱性成纤维细胞生长因子25ng/ml、血清白蛋白13g/l、维生素c72mg/l、维生素b614mg/l、维生素b182mg/l、维生素a40mg/l。
6.根据权利要求1所述的一种促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液，其特征在于：所述基础培养基为dmem与sfm培养基按体积比1:3混合。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的促进结肠癌细胞外泌体分泌的培养液在促进结肠癌细胞外泌体分泌中的应用。