抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系的制作方法

本发明涉及基因工程，具体涉及抑制人fam86b1基因表达的sirna及fam86b1低表达的细胞系。

背景技术：

1、fam86b1(序列相似性家族86成员b1)是一种蛋白质编码基因，当前已有研究证明其能够启动甲基转移酶活性，参与甲基化过程，然而其在人类胶质母细胞瘤的发生发展中的作用机制还并不明确。

2、人类胶质瘤细胞系u251在胶质母细胞瘤的研究中常用作实验模型，可用于提取肿瘤干细胞以及胶质细胞瘤发展机制、药物抗胶质细胞瘤生长的研究等，适合于基因敲除、基因敲低和基因敲入，是基因编辑领域的热门细胞系。

3、人类胶质母细胞瘤细胞系u-87具有上皮形态，可以在裸鼠体内产生与胶质母细胞瘤一致的恶性肿瘤，是最常见的脑肿瘤研究模型。除了常用于脑癌研究，u-87细胞还广泛应用于生物医药产业，如病理生理学研究、药物筛选、癌症药物的研究等，具有广阔的市场前景。

4、小干扰rna(small interfering rna，sirna)，又称沉默rna或短干扰rna，为长度20～25个碱基对的双链rna分子，它通过识别互补的靶基因mrna，诱导其发生降解，从而抑制靶基因的表达。sirna能够应用于临床，达到治疗目的的首要前提是实现靶组织或靶细胞的有效递送。当前主要有两种递送方式，一为裸sirna或化学修饰sirna的直接递送，包括工程化纳米粒子、化学基团修饰、蛋白质或多肽包被后递送等；二为借助基因工程病毒载体的递送，即利用编码短发夹rna(short hairpin rna，shrna)基因的慢病毒、腺病毒、腺相关病毒感染细胞，在胞内转录生成sirna。使用病毒载体的最大优势是单次给药之后可获得长期rna干扰效应。基于sirna互补已知序列靶基因的特异性、可修饰性、高干扰效率等优势，sirna已逐渐成为研究基因功能与药物靶点的重要工具。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供抑制人fam86b1基因表达的sirna及fam86b1低表达的细胞系。本发明提供了抑制人fam86b1基因表达的三个sirna，并构建了fam86b1基因低表达的人胶质瘤u251与u87细胞系。

2、本发明提供了sirna，其正义链具有如seq id no：1～3任一项所示的核酸序列；其反义链具有如seq id no：4～6任一项所示的核酸序列。

3、具体的，所述sirna的正义链和反义链分别具有如seq id no：1和seq id no：4所示的核酸序列；或

4、其正义链和反义链分别具有如seq id no：2和seq id no：5所示的核酸序列；或

5、其正义链和反义链分别具有如seq id no：3和seq id no：6所示的核酸序列。

6、本发明针对人源fam86b1的序列，设计了三组靶向该基因的双链sirna，将所述三组sirna分别转染到细胞中，发现三组sirna对fam86b1有不同程度的干扰。

7、因此本发明提供了所述sirna在制备抑制fam86b1表达的试剂中的应用。

8、本发明提供了一种抑制fam86b1表达的试剂，其包括本发明所述的sirna以及可接受的助剂或载体。所述助剂包括但不限于催化剂、引发剂、乳化剂、分散剂、阻聚剂、终止剂、氧化剂、分子量调节剂、扩链剂、中和剂、脱水剂、溶剂、稀释剂或溶剂。所述载体包括但不限于用于病毒包装的辅助载体、用于噬菌体包装的辅助载体，和/或用于真核或原核宿主细胞基因组整合的辅助载体，本发明对此不做限定；

9、本发明提供了所述sirna或所述试剂在制备改善和/或治疗胶质母细胞瘤的药物中的应用。

10、本发明提供了一种改善和/或治疗胶质母细胞瘤的药物，其包括本发明所述的sirna或所述的试剂，以及药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料包括但不限于稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、包衣材料、溶剂、ph调节剂、缓冲剂、抗氧化剂、金属离子螯合剂、抑菌剂或等渗调节剂。

11、本发明提供的药物，其剂型包括但不限于溶液型、胶体溶液型、乳剂型、混悬性、气体分散型、微粒分散性或固体分散型。

12、本发明还提供了治疗胶质母细胞瘤的方法，包括给予本发明所述的药物。

13、本发明提供了所述sirna在构建fam86b1低表达的细胞模型中的应用。

14、本发明提供了fam86b1低表达的细胞系，其转染有本发明所述的sirna。具体的，所述细胞为人胶质瘤u251细胞和/或u87细胞。利用本发明构建的fam86b1低表达的细胞模型，能够研究fam86b1在人胶质瘤发生发展中的重要作用，有助于揭示人胶质瘤形成的潜在机制，为胶质瘤的疾病治疗提供有用的线索。

15、本发明还提供了所述fam86b1低表达细胞系的制备方法，包括将本发明所述的sirna转染到u251细胞和/或u87细胞中。其中，所述转染的方式包括化学转染、电穿孔、磷酸钙共沉淀或显微注射。具体的，在本发明的实施例中，通过化学转染方式将sirna转染到细胞中。

16、本发明将三组sirna：fam86b1 sirna1、fam86b1 sirna2与fam86b1sirna3分别转染到u251细胞和u87细胞中，培养一段时间后检测这两个细胞中fam86b1的表达量，结果表明fam86b1 mrna的表达量均显著下降，其中fam86b1 sirna2对人胶质瘤u251细胞的干扰效果最明显，fam86b1sirna1对人胶质瘤u87细胞的干扰效果最明显。

17、本发明利用rnai技术对人fam86b1基因进行干扰，构建的人fam86b1低表达的人胶质瘤细胞系，为临床上干预人类胶质瘤疾病与治疗带来了新的希望；此外，本发明利用rnai技术构建的人fam86b1低表达的人胶质瘤细胞系，有助于后续进行更深一步的研究以探索fam86b1与人类胶质瘤的发生发展的分子机制；为治疗人类胶质瘤疾病提供有用的线索；因此本发明具有重要的应用价值。

技术特征：

1.sirna，其正义链具有如seq id no：1～3任一项所示的核酸序列；其反义链具有如seq id no：4～6任一项所示的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于，其正义链和反义链分别具有如seq idno：1和seq id no：4所示的核酸序列；或

3.权利要求1或2所述的sirna在制备抑制fam86b1表达的试剂中的应用。

4.抑制fam86b1表达的试剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述的sirna以及可接受的助剂或载体。

5.权利要求1或2所述的sirna或权利要求4所述的试剂在制备改善和/或治疗胶质母细胞瘤的药物中的应用。

6.改善和/或治疗胶质母细胞瘤的药物，其特征在于，包括权利要求1或2所述的sirna或权利要求4所述的试剂，以及药学上可接受的辅料。

7.权利要求1或2所述的sirna在构建fam86b1低表达的细胞模型中的应用。

8.fam86b1低表达的细胞系，其特征在于，其转染有权利要求1或2所述的sirna。

9.根据权利要求8所述的细胞系，其特征在于，所述细胞为人胶质瘤u251细胞和/或u87细胞。

10.权利要求8或9所述细胞系的制备方法，其特征在于，包括将权利要求1或2所述的sirna转染到u251细胞和/或u87细胞中。

技术总结
本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系。本发明公开的siRNA能够抑制人胶质瘤细胞中FAM86B1基因的表达。利用所述siRNA构建FAM86B1低表达的人胶质瘤细胞模型，研究FAM86B1在人胶质瘤发生发展中的重要作用，有助于揭示人胶质瘤形成的潜在机制，为胶质瘤的临床治疗提供有价值的依据。

技术研发人员：谢水林,李伍新
受保护的技术使用者：广东明珠生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12